AAV-hVEGF165及AAV-TGFβ1转染兔椎间盘纤维环细胞的实验研究

目的探讨应用hVEGF165与TGFβ1基因逆转椎间盘退变的可行性。方法用分子克隆技术，从pcDNA3（＋）-AAV-hVEGF165获得AAV-hVEGF165cDNA，并克隆至AAV包装质粒pSNAV上，构建成pSNAV-hVEGF165的AAV重组质粒。经酶切及测序鉴定后，用脂质体介导pSNAV-hVEG165转染HEK293细胞和血管内皮细胞。荧光免疫组化方法检测hVEGF165蛋白，并用MTT法测定hVEGF165对血管内皮细胞增殖的影响。由本元正阳公司对pSNAV-hVEGF165进行AAV-hVEGF165包装。AAV-hVEGF165与AAV-TGFβ1联合转染退变的椎间盘纤维环细胞，Western blot检测hVEGF165与TGFβ1的表达以及纤维环细胞Ⅰ型胶原表达量的变化。结果经酶切鉴定及基因测序证实AAV包装质粒pSNAV-hVEGF165构建完成，荧光免疫组化显示hVEGF165蛋白表达，MTT法显示hVEGF165蛋白对血管内皮细胞增殖有促进作用。本元正阳公司包装出具有生物学功能的AAV-hVEGF165与AAV-hVEGF165构建成功。Western blot显示hVEGF165与TGFβ1在纤维环细胞中表达，AAV-hVEGF165与AAV-TGFβ1双基因联合转染的纤维环细胞Ⅰ型胶原表达量较hVEGF165与TGFβ1基因各自单独转染的细胞Ⅰ型胶原表达量明显增多。结论hVEGF165在体外能够协同TGFβ1促进退变纤维环细胞Ⅰ型胶原表达增加。     

家庭作坊式人工宝石加工噪声对作业工人心电图的影响

目的探讨家庭作坊式人工宝石加工噪声对作业工人心电图的影响。方法对家庭作坊作业环境进行噪声水平测量;对388名接触噪声工人(暴露组)和177名非接噪者(对照组)的心电图检查结果进行比较分析。结果检测的69个作业点噪声强度为62.4~95.4 d B(A),超标53个(23.19%);暴露组心电图异常率为32.73%(127/388),明显高于对照组的21.47%(38/177)(P<0.01),其中暴露组心律失常率为15.21%(59/388),明显高于对照组的9.04%(16/177)(P<0.05);暴露组18~30岁年龄段心电图异常率为36.67%(22/60),明显高于对照组的11.36%(5/44)(P<0.01)。结论家庭作坊式人工宝石加工产生的噪声对作业工人心电图改变有影响,应加强家庭作坊式作业的职业健康监护,佩戴个人防护耳塞。     

伤椎置短钉技术治疗胸腰椎爆裂骨折的疗效分析

[目的]分析探讨伤椎短钉固定的作用及临床意义。为应用该技术治疗胸腰椎爆裂性骨折提供临床依据。[方法]选取2009年2月²012年9月后路手术治疗的100例胸腰椎爆裂性骨折的临床资料,随机分为2组,A组男28例,女22例,平均年龄35.6岁(252012年9月后路手术治疗的100例胸腰椎爆裂性骨折的临床资料,随机分为2组,A组男28例,女22例,平均年龄35.6岁(25⁶3岁);B组男24例,女26例,平均年龄41岁(2263岁);B组男24例,女26例,平均年龄41岁(22⁶4岁)。其中A组伤椎置短钉治疗胸腰椎爆裂性骨折,即在后路跨伤椎4枚椎弓根钉内固定的基础上,在伤椎完整椎弓根上附加万向型短椎弓根钉164岁)。其中A组伤椎置短钉治疗胸腰椎爆裂性骨折,即在后路跨伤椎4枚椎弓根钉内固定的基础上,在伤椎完整椎弓根上附加万向型短椎弓根钉1²枚。伤椎短钉长度为椎弓根长度约30 mm左右,不进入椎体。伤椎置钉钉尾高度与上下椎体螺钉钉尾高度尽量一致。B组跨伤椎椎弓根4枚螺钉内固定。所有患者术后随访92枚。伤椎短钉长度为椎弓根长度约30 mm左右,不进入椎体。伤椎置钉钉尾高度与上下椎体螺钉钉尾高度尽量一致。B组跨伤椎椎弓根4枚螺钉内固定。所有患者术后随访9³6个月,平均15.8个月。[结果]A组术后矫正率97.1%±2.2%,术后椎管面积改善率42.1%±1.4%,远期丢失率1.2%±1.1%,内固定失效率0;B组术后矫正率85.6%±5.7%,术后椎管面积改善率27.4%±2.2%,远期丢失率8.6%±3.4%,内固定失效率8%。A组在各方面优于B组(P<0.05),差异具有统计学意义。[结论]伤椎置短钉固定能减少复位丢失及内固定松动断裂失效,能纠正脊柱后凸畸形,保持长期有效的内固定,是治疗胸腰椎爆裂性骨折的有效手段。     

支具治疗青少年特发性脊柱侧弯

青少年特发性脊柱侧弯(AIS)是青少年常见三维脊柱畸形,可导致患者躯体畸形,心肺功能受损,影响患者生活质量及精神健康.轻、中度AIS患者可采用观察随访、支具治疗等保守治疗方法.2013年一项多中心随机对照试验确立了支具治疗在AIS保守治疗中的重要地位.目前,支具治疗是预防AIS进展最有效的治疗方法,可有效改变AIS的自...     

甲胎蛋白诊断胶乳的研制及应用

本文采用AFP IgG F(ab′)_2片段与聚苯乙烯空白胶乳致敏成胶乳试剂,建立了一种简便、快速和无需特殊器材的AFP胶乳凝集试验。用该法检测了6249份血清标本,并与对流电泳(CIE)、间接血凝(RPHA)和放射免疫法(RIA)作了比较。结果显示胶乳法敏感性及特异性较理想,试剂稳定期在一年以上,适于常规应用和人群肝癌的普查。     

蛋黄免疫球蛋白制备和应用研究进展

用抗原免疫鸡从蛋黄中提取抗体,已用于各种免疫检测中,过去,用哺乳动物产生的抗体,往往能活化标本中的补体系统,并可能与类风湿因子结合,对免疫学试验产生干扰。而蛋黄抗体(Yolk IgG简称IgY)不激活补体,也不与类风湿因子结合,具有突出的优点。IgY比较稳定、耐酸、耐热,可以内服,可用于某些肠道疾病及其他疾病的防治。鸡经免疫10天左右,即在蛋黄中产生了抗体,约20天达到高峰,如再继续免疫加强,一般能获得高产的特异IgY,效价可维持9～28周。采用亲脂性溶剂(如氯仿)以及聚乙二醇(PEG6000)、硫酸铵等沉淀法粗提IgY,再用亲和层析法进一步纯化特异IgY。纯化的IgY在室温中保存6个月,其抗体活性不变,在4℃贮存可达6—7年,活性下降少于5％。基于上述特点,IgY在实验室试验和对某些疾病防治方面有着厂阔的应用前景。     

利培酮联用丙戊酸镁缓释片治疗精神分裂症患者攻击行为的疗效

目的：观察利培酮加用丙戊酸镁缓释片治疗精神分裂症患者攻击行为的疗效和药物不良反应.方法：60例有攻击行为的精神分裂症住院患者被随机分为观察组（利培酮加用丙戊酸镁缓释片）30例和对照组（单用利培酮）30例,疗程4周.两组在治疗前及治疗第4周末采用简明精神病评定量表,治疗前及治疗第2、4周末采用外显攻击行为量表、副反应量表评定疗效与不良反应.结果：两组治疗前与治疗后简明精神病评定量表各因子分差异均有显著性（P〈0.01）,治疗后两组间比较差异无显著性（P〉0.05）.两组治疗前后外显攻击行为量表评分差异有显著性（P〈0.01）.治疗第2、4周末两组间比较差异有显著性（P〈0.01）.结论：利培酮加用丙戊酸镁缓释片治疗精神分裂症患者攻击行为具有很好的疗效.     

人CTGF和TIMP1基因重组腺相关病毒双表达质粒的构建及其活性检测

 目的 构建人结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1, TIMP1)基因腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）表达质粒，并观察其在HEK293细胞中的表达，检测目的蛋白的生物学活性。方法 采用PCR技术，分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定。再采用分子克隆的方法，以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites, IRES)序列连接CTGF和TIMP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1。把重组质粒转染HEK293细胞，用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究，MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性，ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP1蛋白的含量。结果 PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TIMP1基因序列的AAV表达质粒。双重免疫荧光和Western blot检测到目的蛋白的表达，转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性，ELISA法结果证实重组载体能够高表达TIMP1蛋白。结论 成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1，转染 HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的蛋白，为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础。