lncRNA SNHG16 在结直肠癌组织和细胞中表达及其调控结肠癌细胞中GPAM表达的机制

[摘要] 目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）SNHG16 在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）组织和细胞中的表达及其通过海绵吸附miR-128-3p 调控结肠癌细胞线粒体甘油3 磷酸酰基转移酶基因（mitochondrial glycerol-3-phosphateacyltransferase,GPAM）表达的分子机制。方法：收集2014 年1 月至2017 年1 月甘肃省人民医院肛肠科手术切除的60 例CRC患者的癌及癌旁组织标本,以及结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116、Caco-2、DLD-1、HT29 和结肠上皮细胞CCD841,用qPCR法检测CRC组织和细胞系中SNHG16 的表达,分析SNHG16 表达与CRC患者临床病例特征的关系。分别用miR-128-3p模拟物、miR-128-3p 抑制剂、SNHG16 敲降载体转染SW480 细胞后,用qPCR 法检测细胞中miR-128-3p 及SNHG16 mRNA的表达,用Western blotting 法检测GPAM蛋白的表达,用CCK-8 法、克隆形成实验及细胞凋亡实验、Transwell 小室法检测细胞的增殖、凋亡及侵袭。用双荧光素酶报告基因法和RNA免疫共沉淀实验验证SNHG16 和miR-128-3p mRNA靶向结合。构建小鼠SW480细胞移植瘤模型,观察敲降SNHG16 对移植瘤生长的影响。结果：CRC组织及细胞系中SNHG16 高表达（均P<0.01）,其表达水平与CRC淋巴结转移、Duke’s 分期及患者生存期相关（均P<0.01）。敲降SNHG16 可显著抑制SW480 细胞的增殖及侵袭能力,并诱导细胞凋亡（均P<0.01）;敲降SNHG16 后小鼠移植瘤瘤体显著小于对照组(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测及RNA免疫沉淀反应结果显示,miR-128-3p 与SNHG16 相互作用,且在CRC患者中miR-128-3p 与SNHG16 负相关（P<0.01)。SNHG16 通过内源性竞争海绵吸附miR-128-3p 影响其下游靶基因GPAM的表达。结论：SNHG16 在CRC细胞中可通过海绵吸附miR-128-3p 调控GPAM表达,SNHG16及miR-128-3p 可作为CRC诊断及治疗的潜在靶点。     

武威市某镇乙型肝炎感染者家庭内部隐匿性感染现状及其分子进化特征

 目的 研究武威市某镇乙型肝炎病毒(HBV)家庭内部感染者中隐匿性HBV感染(occult hepatitis B virus infection, OBI)的流行现状及其分子进化特征。方法 以2009年武威市某镇体检发现的HBsAg阳性者为先证者,询问其家族史,签署知情同意书后,对此家庭内部人员进行流行病学调查,收集血样。采用ELISA检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc;对所有血清样本用病毒DNA磁珠法试剂盒提取,而后巢式PCR扩增S区获得HBVDNA片段,测序后应用mega6.0进行进化树分析。结果 共收集血清学标本80份;HBsAg、抗-HBc、HBVDNA的阳性率分别为43.8%、78.8%、37.5%;OBI共有12例,感染率是26.7%(12/45)。结论 在HBV感染家庭中,家庭内部OBI阳性率明显高于一般人群,基因型主要是C型、D型,其中基因型D型居多。