人α-磷酸丙酮酸水合酶原核表达载体的构建及蛋白纯化

目的 构建带PET-28a标签的人ENO1基因原核表达产物,观察其表达并纯化出带PET-28a标签的ENO1融合蛋白,为研究肿瘤糖酵解的相关机制奠定实验基础.方法 以人乳腺文库为模板,利用PCR技术扩增出ENO1基因编码片段,将其插入到PET-28a载体中,鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rossate,小量诱导表达后,利用PET-28a-琼脂糖凝胶4B亲和珠纯化PET-28a-ENO1融合蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western印迹检测,获得纯度较好的PET-28a-ENO1蛋白.结果 利用PCR技术从乳腺文库中扩增得到大小约1300 bp的目的基因片段,插入PET-28a载体中,经双酶切鉴定及测序,结果表明PET-28a-ENO1质粒构建成功;转化Rossate菌并小量诱导,表达鉴定成功后纯化得到相对分子质量(Mr)约为57×103的目的蛋白.结论 成功获得了人糖酵解相关基因ENO1的原核表达产物,为进一步研究ENO1在糖酵解过程中的作用机制奠定基础.     

基于Piezo1通道的中药干预动脉粥样硬化研究进展

动脉粥样硬化的发病机制与内皮损伤、免疫以及细胞增殖、凋亡等密切相关。Piezo1是一种新型的机械敏感阳离子通道，能通过调控内皮细胞、免疫细胞、血管平滑肌细胞等途径干预动脉粥样硬化的发生发展。研究发现，丹参、黄芪-丹参、人参皂苷Rg1-三七皂苷R1-原儿茶醛干预动脉粥样硬化的机制与Piezo1通道密切相关。今后可基于Piezo1通道开展更多中药干预动脉粥样硬化的研究。参考文献35篇。