胰岛素样生长因子结合蛋白-4对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和神经分化的影响

目的探究胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP4)对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖和神经分化的影响。方法通过全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,免疫荧光检测IGFBP4在P1、P4、P6、P8和P10 BMSCs的表达。取第4代BMSC细胞,分为单纯培养基组和添加IGFBP4组,用CCK8试剂盒检测单纯培养基组和添加IGFBP 4组吸光度值A450 nm。再将BMSC细胞分为3组:neurocult组、EGF+b FGF组、EGF+b FGF+IGFBP4组,每组连续测定7 d,每天6个平行孔,诱导培养基Neuro Cult培养再分别添加EGF+b FGF和EGF+b FGF+IGFBP4,诱导其向神经祖细胞分化,免疫荧光染色检测Nestin和Sox-2表达,并观察神经球数量和细胞增殖活性。结果成功获得原代大鼠BMSCs,可见CD105、CD44和CD90表达,IGFBP4的表达随培养代数而增加,外源IGFBP4能明显抑制BMSCs的增殖(P0.05)。经诱导BMSCs形成的神经球样结构表达Nestin和Sox-2,细胞增殖活性升高(P0.05)。结论 IGFBP4能抑制BMSCs的增殖,促进其向神经祖细胞分化。     

沙培林瘤腔内注射治疗脑胶质瘤疗效观察

目的探讨沙培林瘤腔内注射治疗脑胶质瘤的疗效。方法自2000年1月至2004年1月对36例脑胶质瘤病人于手术切除肿瘤后,放置Ommaya囊,瘤腔内注射沙培林治疗。4次为一疗程,定期复查CT随诊,可重复治疗2～3疗程。结果病人反应轻微,耐受性好。CT复查见残余及复发的肿瘤液化、坏死。随访8月～4．5年,存活29例,术后3年以上者21例,2年以上者26例。结论该疗法安全可靠、操作简单,应用于脑胶质瘤术后的病人,可延长其生存期,提高生存质量。     

耳后小切口入路手术治疗三叉神经痛1100例临床分析

本文报告自１９８４年１月至１９９３年４月，对诊断为原发性三叉神经痛久治不愈者１１００例，采用局麻、耳后小切口入路行桥小脑角探查术。据术中发现不同病因采用神经血管减压术、肿瘤切除术等治疗。本组死亡２例，近期总有效率为９９．５％。对本病的治疗方法、术式的选择、并发症和副反应的防治等问题，进行了讨论。     

神经元和胶质细胞的相互作用与帕金森病

帕金森病是黑质多巴胺能神经元变性坏死而引起的神经系统退行性疾病。胶质细胞介导的免疫炎症反应是导致该疾病发生的主要因素之一。活化的小胶质细胞和星形胶质细胞释放的多种炎症因子不仅发挥着保护和(或)损伤神经元的作用,而且存在着复杂的相互联系和作用。不仅如此,神经元也可以反过来调控胶质细胞的活性。因此,在帕金森病的发病机理中,神经元和胶质细胞共同构成了一个复杂的神经系统网络。     

卡马西平增加癫痫模型大鼠脑内P-糖蛋白的表达

目的探讨癫痫发作与抗癫痫药物卡马西平(CBZ)对多药耐药基因编码的P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法给雌性SD大鼠侧脑室注射海人酸(KA)或PBS,成模后再口服CBZ。成模或给药后3、5、7、14、21和28d灌杀大鼠取脑,用免疫组化和双标免疫染色对脑中P-gp进行半定量及定位分析。尼氏染色观察海马神经元的变化。结果模型大鼠脑电图及行为变化与人类癫痫相似,CBZ对癫痫发作没有作用。癫痫发作后第5天脑P-gp表达水平增加,7d时最高,21d后恢复到正常水平。阳性产物主要位于海马的毛细血管内皮细胞,也见于皮层的毛细血管及神经元。CBZ对正常大鼠P-gp的表达没有影响。CBZ KA组动物海马P-gp的表达与KA组动物相似,但7d时其表达明显增强。结论癫痫发作可诱导P-gp的表达;卡马西平在癫痫发作中也参与了P-gp的高表达。     

一种小鼠肿瘤相关膜蛋白单抗对DCS细胞生物学行为的影响

探讨一种小鼠肿瘤相关膜蛋白在ＤＣＳ细胞表达的意义。方法用该蛋白抗处理ＤＣＳ细胞,观察其对细胞生长速度,软琼脂克隆形成能力,粘附性,细胞运动能力,水解酶活性,侵袭性,体内转移率等生物学行为方面的影响。结论该细胞膜蛋白可能调控小鼠肿瘤细胞增殖能力。     

烟雾病68例临床分析

目的报告用丹参和川芎嗪及手术治疗的68例烟雾病病人的经验。方法回顾性总结了烟雾病的病史、临床表现及诊断、治疗情况。结果治愈44例，显著进步19例；对5例经药物治疗不见好转者，3例做了带蒂大网膜颅内移植，2例做了颞肌瓣脑表面贴合术，术后均愈，全组病例经6个月至16a的随访未见复发。结论烟雾病的治疗应首选丹参、川芎嗪活血化淤制剂，对药物治疗无效者可选择手术。     

微血管减压术治疗面肌痉挛的远期效果

目的：探讨微血管减压术治疗面肌痉挛1年以上的远期疗效。方法：对1987年7月至1999年6月间329例患者的临床资料及随访结果进行回顾性分析。结果：本组患者随访1－3年97例，痉挛完全缓解92．7％，明显缓解3．1％，部分缓解2．1％，无改变2．1％；3－5年77例，完全缓解92．2％，明显缓解3．9％，部分缓解1．3％，无改变占2．6％；5－10年121例，完全缓解90．9％，明显缓解4．1％，部分缓解2．5％，无改变2．5％；10年以上34例，痉挛综合缓解91．2％，明显缓解5．9％，无改变2．95。329例中主观满意度≥80％者占82．1％，痉挛复发率5．2％，并发症发生率5．5％，。结论：采用微血管减压术治疗面肌痉挛，尽量减少对脑神经及血管损伤，不遗漏面神经根附近的责任血管，是提高远期疗效养活并发症的重要环节。     

基因治疗帕金森病的分子生物学研究：神经营养因子Neurturin基因克隆及其真核表达

目的：克隆中国人Neurturin基因，重组携带Neurturin基因的真核表达载体，为研究Neurturln基因治疗帕金森病提供分子生物学基础。方法：实验于2003—03／2004—05在北京市神经再生修复研究重点实验室完成。采用RT-PCR方法从人胎儿脑中获取Neurturin cDNA，将其克隆至pGEM—Easy—T载体中。测序鉴定后，重组携带Neurturin基因的反转录病毒载体pLPCX-Neurturin；通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系，用病毒上清感染NIH 3T3细胞系以检测病毒滴度。结果：RT-PCR扩增到人Neurturln cDNA片段，序列与Genebank登录的序列一致；将Neurturin基因亚克隆至反转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLPCX-Neurturin，病毒上清滴度为5&;#215;10^4CFU／mL。结论：获得人Neurturln基因cDNA序列，检测到Neurturin基因在真核细胞中表达，并得到较高滴度的病毒上清。     

人类白细胞抗原A表达沉默对大鼠脑内人细胞移植排斥反应的调节

背景：移植物主要组织相容性抗原复合物在移植排斥反应中起关键作用。用慢病毒介导的人类白细胞抗原RNA干扰技术可以降低T淋巴细胞的细胞毒作用和抗体介导的溶细胞作用，但尚未见相关体内研究报道。 目的：拟用携带人类白细胞抗原A小分子干扰RNA序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞。再将其移植到帕金森大鼠纹状体．观察人类白细胞抗原A表达沉默对移植排斥反应的调节。 设计．时间及地点：细胞基因工程体内实验．于2005—09／2008-01在首都医科大学神经科学研究所完成。材料：清洁级12周龄雌性SD大鼠33只，用于建立帕金森动物模型。原代培养的人胚肺成纤维细胞取材于12周流产人胚胎，由北京京北医院提供，293T为贴壁依赖型成上皮样细胞。慢病毒载体系统由psicoR，pCMV—VSV—G和psPAX2三质粒组成，为美国Addgene公司产品。携带HLA—A2厂cDNA的pcDNA I／Amp—HLA质粒由比利时Ludwig肿瘤研究所Pierre van Bruggen教授惠赠。 方法：以携带HLA—A2 cDNA的pcDNA I／Amp—HLA质粒为模板PCR扩增HLA—A2 cDNA编码区序列．构建人类自细胞抗原A融合蛋白表达载体pEGFP—Flag-HLA，转染293T细胞。用HLA-A2编码区序列设计小分子干扰RNA 4个待选靶点序列．分别起始于编码区的第257，350．833，251位碱基，构建表达小分子干扰RNA慢病毒载体。用带有Flag标签的人类白细胞抗躁AcDNA表达载体转染293T细胞后，再进行不同靶点病毒直接感染。33只帕金森模型大鼠随机分为2组，实验组大鼠纹状体植入人类白细胞抗原A小分子干扰RNA病毒感染的人胚肺成纤维细胞．对照组植入带有小分子干扰RNA对照序列和绿色荧光蛋白病毒感染的人胚肺成纤维细胞。 主要观察指标：免疫组织化学染色检测脑内移植物人类白细胞抗原A、CD4和CD8的表达，用抗人细胞核的阳性表达评价移植细胞的存活情况。 结果：与对照组比较，实验组移植后4d、2周时人类白细胞抗原A阳性细胞均较少（t=3．301，2．631，P〈0．01，0．05）．6周时无明显变化；CD4阳性细胞仅移植后6周明显减少（t=2．269．P〈0．05）：移植后4dCD8阳性细胞无明显变化，2周及6周时明显减少（t=2．333．P〈0．05）：抗人细胞核阳性细胞仅移植后2周明显减少（t=2．952，P〈0．05）。 结论：人类白细胞抗原A表达敲减可以抑制移植排斥反应。但并不能显著延长移植物的存活时间。