靶向Slug基因诱导PUMA上调增强AsPC-1细胞对γ射线的敏感性研究

目的 探讨siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌AsPC-1细胞γ射线敏感性的影响。方法 以0、10、50、100感染复数(MOI)的rAAV-EGFP-Slug-siRNA(Slug-siRNA)转染AsPC-1细胞72 h,免疫组织化学法和Western blotting检测转染前后细胞内Slug和PUMA表达。采用4 Gy γ射线细胞进行照射,MTT比色法和Hoechst 33342和PI双染法检测对照组、转染组(MOI 50)、照射组、转染(MOI 50)+照射组细胞存活率和凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,Giemsa 染色观察细胞形态。结果 细胞受到MOI为10、50、100作用72 h后,Slug 蛋白表达相对值分别为0.831±0.14、0.546±0.12和0.178±0.08,明显低于对照组1.17±0.152, 差异有统计学意义(F= 4.992,P<0.05);而细胞受到MOI为10、50、100作用72 h,PUMA 蛋白表达相对值分别为0.325±0.07、0.593±0.11和0.978±0.12,明显高于对照组0.143±0.04, 差异有统计学意义(F= 4.324,P<0.05);转染(MOI 50)+照射组细胞增殖抑制率为(78.76±9.36)%,明显高于转染组和单独射线照射组[(43.68±6.71)%和(19.25±3.72)%],差异有统计学意义(F=5.056,P<0.05)。另外,转染(MOI 50)+照射组细胞的凋亡现象较其他组更加明显。结论 siRNA干扰Slug基因表达能够解除Slug对PUMA的抑制,增强胰腺癌细胞对γ射线的敏感性。     

靶向抑制Slug基因表达对BxPC-3细胞凋亡和对5-FU化疗敏感性影响的实验研究

目的:探讨siRNA干扰Slug基因表达对BxPC-3细胞增殖、凋亡和对5-FU化疗敏感性的影响.方法:用脂质体转染法将表达siRNA-Slug的真核表达载体pGenesil-1-Slug-siRNA(pSlug-siRNA)和空载体pGenesil-1-Neg-siRNA(pNeg-siRNA)导入胰腺癌BxPC-3细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.将转染栽体的BxPC-3阳性克隆细胞和未转染载体的BxPC-3细胞分别暴露于系列浓度(0.01～100 μmol/L)的5-FU 72 h.RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同组细胞经5-FU作用72 h后的Slug表达;MTT法测定各组细胞生存率并计算IC50,Hoechst33258和PI双染色和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡.结果:实验组细胞内Slug基因被有效沉默;BxPC-3、BxPC-3/pSlug-siRNA知BxPC-3/pNeg-siRNA细胞的5-FU IC50分别为(11.0±2.1)、(1.5±0.4)和(9.7±1.3)μmol/L(P<0.05).BxPC-3/pSlug-siRNA细胞对5-FU作用的敏感性增加了7.33倍.5-FU以剂量依赖方式诱导BxPC-3细胞凋亡,但对BxPC-3/pSlug-siRNA细胞所诱导的凋亡比BxPC-3和BxPC-3/pNeg-siRNA更明显.结论:靶向抑制Slug基因表达促进胰腺癌BxPC-3细胞凋亡,并增强BxPC-3对5-FU的化疗敏感性.