靶标诱导变构解离SELEX技术筛选皮质醇特异核酸适体

目的通过指数富集配体系统进化（SELEX）技术获得皮质醇特异性核酸适体,建立高品质、超敏、易用和稳定的皮质醇检测试剂盒。方法人工合成两端固定序列,中间为35 bp随机序列,生成80 bp长度ssDNA文库,捕获序列固定在磁珠上,文库与其退火组装,皮质醇的特异核酸适体通过我们建立的靶标诱导变构解离SELEX（TISSD-SELEX）技术获得。最后一轮的PCR产物经克隆测序,MegAlign和RNAstructure软件分析其一级和二级结构。实时（real-time）apta-PCR方法分析G12的亲和活性。结果经过12轮筛选后,获得10个皮质醇的核酸适体。序列分析显示,特异核酸适体以高G含量核酸序列为主,软件预测其中8个序列主要以G四联体二级结构为主,候选核酸适体G12显示了可以作为生物探针用于皮质醇检测。结论成功建立TISSD-SELEX技术,获得小分子靶标皮质醇核酸适体。小分子靶标无需将其偶联在固相介质或大分子上,对靶分子结构、性质无特殊要求,因而有望成为小分子靶标核酸适体筛选的通用技术方法。     

关于磷霉素不良反应的叙述

随着我国改革开放的大气候，目前我国个体诊所如雨后春笋般的遍布于各个城市，特别是一些中小城市更为突出。同时请护士上门服务的也大有人在。这就给磷霉素的使用提供了广泛的市场。因为磷霉素虽属处方用药，     

应激适应建立对应激大鼠心肌的保护作用

[目的]建立应激适应的整体动物模型,为研究应激适应的分子机制奠定基础。[方法]利用持续束缚建立应激适应模型,高效液相检测血浆儿茶酚胺;放射免疫法检测血浆皮质醇换算成皮质酮含量,Nagarolsen染色法观察心肌病理变化。[结果]适应组大鼠经过应激后,血浆糖皮质激素、儿茶酚胺的分泌水平,血浆LDH、a-HBDH、CK-MB活性显著低于应激组;Nagarolsen染色和电镜结果表明:适应大鼠应激后,心肌损伤明显弱于应激组。[结论]建立了适应动物模型,适应能够降低应激所造成的心肌损伤。     

静脉留置针的应用与护理

静脉留置针其操作简单，安全方便，既解决了患者反复穿刺的痛苦，保护了静脉，又减轻了护士的护理工作量，可随时打开静脉通道及早用药，提高抢救成功率。有利于临床用药和紧急抢救，为危重患者的生存赢得时间。已成为临床输液的重要工具。     

应激心肌细胞中c-Jun氨基末端激酶对TR3磷酸化水平的调控

目的观察应激心肌细胞中JNK的磷酸化水平及其对核转录因子TR3磷酸化水平的影响。方法采用应激心肌细胞模型,以10-5mol/L糖皮质激素(GC)干预心肌细胞;采用免疫印记法检测细胞中JNK和TR3蛋白的磷酸化水平;应用JNK磷酸化的化学抑制剂SP600125观察JNK磷酸化的抑制对TR3磷酸化水平的影响。用Image Master誖2D Elite(Version 3.10)软件分析蛋白条带的灰度值;用SPSS12.0软件包对灰度值进行统计学分析。结果选取对照组的p-JNK蛋白灰度值(0.99)相比,GC干预心肌细胞10min、20min、40min、60min、90min时的p-JNK蛋白灰度值升高(分别为1.26、1.31、1.29、1.35、1.36)。选取对照组的p-TR3蛋白灰度值(0.83)相比,GC干预心肌细胞40min、60min、90min时的p-TR3蛋白灰度值升高(1.09、1.16、1.02)。与GC干预组的p-JNK蛋白灰度值(1.55)相比,SP600125+GC组的p-JNK蛋白灰度值降低(1.21);与GC干预组的p-TR3蛋白灰度值(1.67)相比,SP600125+GC组的p-TR3蛋白灰度值降低(1.03)。结论在应激心肌细胞中,JNK活化,磷酸化水平升高,并进而促使核转录因子TR3发生磷酸化。     

人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)表达及抗体制备

目的 重组表达及纯化人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(betaine-homocysteine methyltransferase, BHMT)蛋白,制备BHMT多克隆抗体并对其性质进行研究.方法 TRizol法提取人HepG2细胞总RNA,RT-PCR获得BHMT基因,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切,构建重组表达载体pET-28a-BHMT,经0.5 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物通过Ni柱亲和纯化获得重组蛋白;以重组BHMT蛋白免疫兔,获得兔多克隆抗体,并对抗体进行纯化,应用Western印迹方法分析其识别人天然BHMT蛋白的能力.结果 经测序证明,RT-PCR得到的人BHMT基因与GenBank中人的BHMT基因完全一致;构建的BHMT原核表达载体可稳定地表达可溶性人BHMT蛋白;重组BHMT蛋白免疫兔后,兔血清抗体纯化获得高纯度BHMT抗体,此抗体可以特异性地识别人肝癌组织中的天然BHMT蛋白.结论 成功重组表达并纯化人BHMT蛋白,所获得的BHMT多克隆抗体可以应用于人BHMT蛋白的检测,为研究BHMT在高同型半胱氨酸血症中的作用机制奠定基础.     

静脉留置针的应用与护理

静脉留置针的操作简单,安全方便,既解决了患者反复穿刺的痛苦,保护了静脉,又减轻了护士的护理工作量,可以随时打开静脉通道及早用药,提高抢救的成功率,有利于临床用药和紧急抢救,为危重患者的生存赢得时间,已经成为临床输液的重要工具.     

无症状性临床前期阿尔茨海默病与微量元素组学的关系

随着老龄化社会的日益加剧,阿尔茨海默病（Alzheimer Disease,AD）作为一种老年认知障碍性疾病,发病率持续增高,但目前其发病机理还不明确,至今无法根治。AD是一种与基因突变和环境密切相关的神经退行性疾病,一旦有临床症状则无法逆转。所以最近国际上热点是对该疾病的早期发现、干预,尤其关注无症状性临床前期AD（Preclinical Alzheimer disease,PCAD）的危险因素。而微量元素是一种关键的AD诱发因素。现以微量元素组学为切入点,阐述PCAD中微量元素组学稳态的重要意义,以期能对AD的治疗以及预防有一定的意义。     

正心力颗粒对睡眠剥夺导致的认知能力和应激适应能力下降的改善作用

目的对中药复方正心力颗粒改善机体应激适应能力的效能进行初步临床观察。方法以72 h睡眠剥夺为应激源,采用放射免疫法测定机体血浆皮质醇水平,免疫印迹法测定外周血淋巴细胞热休克蛋白70（Hsp70）水平,并分别以视觉反应时、记忆广度及闪光融合频率反映机体的反应能力、短时记忆能力和大脑皮质疲劳状况。结果睡眠剥夺后,机体血浆皮质醇水平升高（23.8±4.5）%,外周血淋巴细胞Hsp70表达增强,记忆能力和应激反应能力明显下降;正心力颗粒可抑制应激所致皮质醇的过量释放,诱导Hsp70的激活,显著增强应激机体的记忆能力和应激反应能力,纠正大脑皮质疲劳的发生;且安全无毒。结论中药正心力颗粒具有较强的应激损伤防护功能,并具有明显提高机体应激适应能力和脑体作业能力的作用。     

TNF-α诱导的血管平滑肌细胞迁移中UCH-L1蛋白表达水平变化

目的 研究UCH-L1在TNF-α诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)迁移过程中蛋白表达水平的变化规律,为探索UCH-L1在VSMC迁移中的作用提供依据.方法 用组织块贴壁法体外培养大鼠VSMC,以改良的Boyden chamber方法和划痕法观察TNF-α对VSMC迁移的诱导作用;Western blot检测VSMC迁...