从人软骨提取总RNA和CDMP－1成熟肽片段的克隆

目的 克隆人软骨来源形态发生蛋白－１（ＣＤＭＰ－１）成熟肽编码区的基因片段。方法 用异流氰酸胍一步法从人软骨组织和酶消化法原代培养的软骨细胞中分别抽提总ＲＮＡ,利用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出人ＣＤＭＰ－１成熟区的基因片段（约１．０ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ）质粒载体,重组质粒ＤＮＡ,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果 从罗骨组织直接取到总ＲＮＡ,其质量与从等重量软骨     

大鼠牙胚发育早期核心结合因子1表达的时空特异性

目的:探讨采用成骨细胞特异性转录因子核心结合因子1cDNA探针对大鼠不同时期牙胚进行原位杂交实验,以及其在牙胚发育过程中的表达。方法:实验于2003-05/08在北京军事医学科学院组织工程研究中心实验室完成。取SD孕期大鼠12只,利用核心结合因子1cDNA克隆产物,自行制备核心结合因子1cDNA探针,并对同笼后11d(蕾状期)、14d(帽状期)、17d(钟状早期)及出生后1d和9d(钟状晚期)4个时期的大鼠牙胚进行原位杂交实验,观察核心结合因子1在大鼠牙胚不同时期中的表达。结果:①大鼠牙胚蕾状期原位杂交可见明显阳性表达结果,其表达部位主要集中于牙胚及牙蕾顶部邻近的外胚间充质。②帽状期及钟状早期牙乳头、成牙本质细胞及成釉细胞均呈阳性表达。③钟状晚期表现于成牙本质细胞的表达明显下调,而成釉细胞呈阳性表达。结论:核心结合因子1在牙胚不同时期的表达有时空特异性,在大鼠牙胚发育早期即蕾状期的强阳性表达,表明核心结合因子1参与了牙胚的早期发育。     

牙乳头细胞复合海藻酸钠-聚乳酸羟基乙酸共聚物构建组织工程牙根

背景：牙胚组织工程重建研究表明牙齿结构可用组织工程方法构建,牙齿存活及行使功能的关键在于牙根及其牙周附着,那么是否可以绕开具有复杂组织结构的完整牙齿组织工程概念的束缚,而将组织工程构建目标仅仅指向结构单一的牙根组织？ 目的：采用组织工程方法,以牙乳头细胞为种子细胞,海藻酸钠-聚乳酸羟基乙酸共聚物为支架材料构建兔组织工程牙根。 方法：分离、培养扩增兔牙乳头细胞,离心收集细胞混于海藻酸钠水凝胶,制成浓度6×10⁹ L^-1的细胞悬液,接种到人牙根状聚乳酸羟基乙酸共聚物支架中,用CaCl₂固化后,构建出细胞-支架复合物,然后移植于裸鼠背部皮下,植入后4,8周取材,进行大体标本、X射线、三维CT、组织学及免疫组织化学染色观察。 结果与结论：经4-8周体内移植后获得的组织定型于牙根形状。植入4周后,标本密度较低;牙根移植物出现矿化,但矿化不完全,海藻酸钠水凝胶已降解,聚乳酸羟基乙酸共聚物支架未降解;标本中出现了大量类牙本质结构,在标本表面具有纤维膜结构,与根面平行,结构不连续,没有明显髓腔形成。植入后8周,标本密度增高,更为接近自然生长的牙根组织;牙根移植物矿化基本完成,聚乳酸羟基乙酸共聚物支架已大部分降解;标本中出现了大量类似于成熟牙本质的结构,在标本表面形成连续的纤维膜结构,与根面平行,在其下方开始有类似牙骨质样结构的形成。表明采用工程方法可建出具有基本组织学类型和结构的类似人工牙根组织。     

兔骨髓肌卫星细胞的体外培养及生长特征的研究

目的：研究体外分离培养的兔骨髓肌卫星细胞（ＳＣ）的生物学特征。方法：采用细胞培养方法，对兔骨髓肌ＳＣ进行活细胞观察，并测定兔骨髓肌ＳＣ的细胞生长曲线、细胞分裂指数、细胞贴壁率。结果：①兔骨髓肌ＳＣ为梭形，呈长轴平行排列，具有明显的方向性；②体外培养的兔骨髓肌ＳＣ在１０代以内生长稳定，超过１０代以后肌ＳＣ的融合能力和形成骨管的能力也随之下降。结论：体外培养的兔骨髓肌ＳＣ在合适的传代比例和培养条件下在     

大鼠牙髓干细胞的基本细胞学特征以及增殖和矿化能力：分化为牙本质样细胞的可能性

目的：实验观察大鼠牙髓干细胞的基本细胞学特征和增殖及矿化特性。方法：实验于2003-07／10在军事医学科学院组织工程研究中心实验室完成。采用光学显微镜观察大鼠牙髓干细胞生长变化。①细胞爬片固定后用苏木精-伊红染色观察细胞的基本形态，②采用四甲基偶氮唑盐法对大鼠牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞的生长及增殖能力进行检测比较。③应用矿化液对大鼠牙髓干细胞进行诱导并采用Von Kossa染色的方法检测大鼠牙髓干细胞矿化能力。结果：①大鼠牙髓干细胞基本形态特征：为成纤维细胞样生长。细胞呈梭形，密集区细胞形态多样，可见多角形或椭圆形细胞密集排列。②细胞生长曲线及群体倍增时间：大鼠牙髓干细胞群体倍增时间为：58．3h；骨髓间充质干细胞的生长较牙髓干细胞旺盛，其群体倍增时间为：41．8h。③大鼠牙髓干细胞矿化能力：Von Kossa染色可见细胞密集区为黑褐色，呈结节状分布，表明有钙化结节形成。结论：大鼠牙髓干细胞形态正常，虽比骨髓间充质干细胞稍弱，但仍具有较强的增殖性能，还有一定的矿化能力，说明在一定条件下可向牙本质样细胞分化。     

重建牙本质-牙髓复合体样结构的实验研究

目的 采用组织工程学的方法重建牙本质-牙髓复合体样结构。方法以大鼠牙髓干细胞为种子细胞，将羟基磷灰石-磷酸三钙（HA-TCP）复合支架材料接种至裸鼠背部皮下，8周后取材进行组织学及免疫组织化学检测。结果移植物组织学切片可见支架材料孔隙内有3层组织结构，由外向内分别为矿化牙本质、前期牙本质及牙髓组织，其中牙本质小管明显，牙髓组织外层细胞密集，部分出现极化，呈现出成牙本质细胞样细胞特征。免疫组织化学染色证实人牙本质特异性蛋白、DMP1在前期牙本质区及成牙本质细胞样细胞为阳性表达。结论采用牙髓干细胞为种子细胞、HA-TCP为支架材料可成功构建牙本质-牙髓复合体样结构，为进一步进行牙齿组织工程再造奠定基础。     

复合富血小板血浆培养液对兔骨髓间充质干细胞增殖及矿化的影响

目的研究富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对于骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSC)增殖及矿化能力的影响。方法改良Appel法采集兔PRP,同时培养该兔BMSC,将培养成功的BMSC分为实验组及对照组,实验组采用含10%PRP的培养液,对照组采用常规培养液,分别对两组细胞进行细胞增殖的检测(MTT法)、ATP活性检测(试剂盒)及矿化能力检测(Von-Kossa染色)。收集结果并进行统计。结果实验组兔BMSC胞体丰满,细胞突起明显增长;实验组细胞增殖能力强于对照组(P<0.01);实验组细胞在第4、8、12天时ALP活性强于对照组(P<0.05),第16天时无显著差别;实验组每孔矿化结节数(4.083±2.022)个,对照组每孔矿化结节数(3.417±1.285)个,两组比较无统计学差异。结论 PRP对BMSC的生长增殖有促进作用,但对该细胞的矿化能力无明显促进作用。     

关于口腔种植影像测量的精确性研究

目的本研究通过测量种植体实际长度与CBCT图像上种植体长度之间的差别,计算出上颌后牙区上颌窦底至牙槽嵴顶（窦嵴距）的实际高度。从而减少上颌后牙区种植并发症的发生。方法对21例患者种植手术前后进行统一标准的CBCT检查,对手术前后CBCT片上后牙区种植体的总长度（愈合帽完全拧入种植体后的长度）进行测量,将测量值与种植体实际总长度比较,计算出CBCT检查方法对后牙区的放大率。最终得出正确窦嵴距实际高度。结果种植体CBCT测量结果与实际长度比较有显著性差异（p〈0.05）,影像长度要大于实际长度。结论 CBCT于实验中所产生的放大误差来自于上颌后牙区倾斜角度;图像的处理的容积效应;标准种植体自身误差。