胶质瘤中LGI 1的突变及微卫星不稳定性研究

目的 为了检测人脑胶质瘤组织及胶质瘤细胞系LGI 1基因编码区中有无碱基突变及微卫星不稳定性(MSI)和杂合性缺失(LOH).方法 收集30例胶质瘤标本,2例脑膜瘤、2例瘤旁及2例颅脑损伤内减压脑组织标本及体外培养5个脑胶质瘤细胞系.提取组织标本及培养细胞基因组DNA.设计特异性引物分别扩增LGI 1各外显子序列,采用SSCP银染分析;扩增LGI 1微卫星序列,凝胶电泳银染分析;发现异常泳动条带进行DNA序列分析.结果 ①PCR-SSCP分析琼脂糖凝胶电泳检测有1例Ⅱ级胶质瘤标本未检测到第1 a外显子处扩增产物以及Ⅱ、Ⅲ级各1例胶质瘤标本均未检测到第8 c外显子处扩增产物.未在30例胶质瘤标本和4个脑胶质瘤细胞系中检测到电泳条带异常,在细胞系TJ905第5外显子处检测到电泳条带异常,经DNA测序分析证实确有突变.②在30例胶质瘤标本及5个细胞系中均未检测到MSI和LOH.结论 基因突变及MSI和LOH可能不是LGI 1在胶质瘤恶性进展过程中失活的主要原因.     

白藜芦醇抑制C6及TJ905胶质瘤细胞生长的研究

白藜芦醇是近年来发现的具有预防肿瘤发生的天然植物成分，属于非黄酮类多酚化合物，广泛存在于种子植物中，并以新鲜葡萄皮中所含的量为最高（50～100μg/g），而在红葡萄酒中也可高达1．5～3mg／L。白藜芦醇是植物在遇到真菌感染、紫外线照射不利条件时所产生的植物补体，对植物本身起保护作用，同时对人体也具有调节脂质代谢、抑制血小板聚集、保护心血管、抗炎、抗肿瘤等多种生物学活性和药理作用，具有很大的药用价值。目前的研究表明，白藜芦醇对鼠肝细胞癌、人肝母细胞、乳腺癌等多种肿瘤细胞均有显著抑制作用。但白藜芦醇对脑胶质瘤作用的研究国内还未见报道。本实验初步研究白藜芦醇对大鼠C6及人脑TJ905胶质瘤细胞的生长抑制和杀伤作用。     

卡氮芥-聚乳酸缓释剂生物相容性研究

目的：研究卡氮芥(BCNU)-聚乳酸缓释剂生物相容性。方法：将BCNU-聚乳酸缓释膜片(BCNU—PLA组)及聚乳酸缓释膜片(PLA组)分别植入2组Wistar大鼠的额叶脑组织内，观察其对脑、心、肝、脾、肺、肾及血液系统的影响。结果：BCNU—PLA组缓释膜片植入后造成的局部脑水肿持续7d以上，术后14d仍有2只鼠轻度脑水肿，但与PLA组比较差别无统计学意义。其他器官及血液系统未见明显异常。聚乳酸缓释膜片植入后，除早期手术造成的轻微脑水肿外，其他器官与系统无异常。结论：BCNU-聚乳酸缓释剂安全、可靠，生物相容性良好。     

甲状腺重量及血清TSH浓度对小剂量131Ⅰ治疗甲亢疗效的影响

目的:评价甲状腺重量及血清TSH浓度对小剂量131Ⅰ治疗甲状腺功能亢进症(甲亢)疗效的影响.方法:患者治疗前均行甲状腺SPECT扫描并检测血清FT3、FT4、TSH浓度;131I治疗的剂量为常规剂量的1/2～2/3.结果:①治疗前一次给药组TSH浓度为0.10±0.34mμ·L-1,重复给药组为0.04±0.10mμ·L-1,两者差异有显著性(P＜0.05);②治疗前甲状腺的重量一次给药组为51.22±26.09g,重复给药组87.34±63.69g,两者差异有显著性(P＜0.0001).结论:小剂量131Ⅰ治疗甲亢的疗效良好,多数患者能一次治愈,但对于大甲状腺患者或血清TSH浓度很低者则需多次治疗.     

Vpr对人结肠癌细胞的抑制作用及其机制

目的 探讨人类免疫缺陷病毒1型( HIV-1)病毒蛋白r(Vpr)对人结肠癌细胞HCT-8的抑制作用及其机制.方法 将细胞分为空白对照组、空载体转染组和Vpr转染组.空白对照组:细胞不予干预;空载体转染组:对数生长期的细胞加入不同感染复数(MOI)的空载体腺病毒;Vpr转染组:加入不同MOI的含有HIV1-Vpr基因的重组腺病毒(Adv-Vpr).应用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及线粒体膜电位,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达.多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验;或采用双因素方差分析,组内比较采用t检验.结果 Vpr显著抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,Adv-Vpr转染72 h后(MOI=200),Vpr转染组细胞MTT值为1.03±0.04,与空载体转染组(2.46 +0.15)及空白对照组(2.51±0.14)比较,差异有统计学意义(F=144.6,P＜0.05);Adv-Vpr转染48 h后(MOI=200),Vpr转染组处于G2/M期的细胞比例及线粒体膜电位下降的细胞比例增加,分别为37.31％±5.90％和32.07％±5.64％,与空载体转染组(18.30％±6.04％、3.32％±0.79％)及空白对照组916.66％±3.51％、2.76％±1.43％)比较,差异有统计学意义(F=10.08,64.45,P＜0.05).Adv-Vpr转染72 h后(MOI=200),Vpr转染组细胞凋亡率为37.62％±6.48％,与空载体转染组(3.44％±1.11％)及空白对照组(2.93％±1.07％)比较,差异有统计学意义(F=122.4,P＜0.05).Adv-Vpr处理48 h后(MOI=200),Westem blot检测发现Vpr导致了Caspase-9、Caspase-3剪切为活性片段,p-Chk1-S345磷酸化增加,而Fas、Fas-L、ERK1及ERK2表达未见上调.结论 Vpr在体外能够有效抑制结肠癌细胞株HCT-8增殖,并诱导其细胞周期G2期阻滞及凋亡,其机制分别与DNA损伤信号通路激活及线粒体凋亡通路启动有关.Vpr在结肠癌的治疗中具有潜在的应用前景.     

RP-HPLC法测定花生仁、花生油和葡萄干中白藜芦醇

白藜芦醇的化学名为三酚(3,5,4-trhydrox-ystilbene)。研究表明,白藜芦醇具有抗菌、抗炎、抗过敏、抗血栓作用,明显的抗氧化、抗自由基作用,对冠心病、高血脂的防治作用,抗癌、抗诱变的作用以及抑制肿瘤的产生。花生仁、花生油和葡萄干为常用食物,富含白藜芦醇,对人们的健康非常重要。因此本研究采用RP-HPLC法测定花生仁、花生油和葡萄干中白藜芦醇。1仪器与材料Agilent1100高效液相色谱仪,化学工作站;CX—250超声波清洗器;909型电热干燥箱;AE240S电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。乙腈为色谱纯,水为四蒸水,甲醇为分析…     

白藜芦醇对U251脑胶质瘤细胞Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1和STAT-3蛋白表达的影响

探讨白藜芦醇对U251人脑胶质瘤细胞生长的抑制和相关蛋白的表达及其意义.采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响;采用ABC免疫组化法检测相关Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1和STAT-3蛋白的表达.结果显示,白藜芦醇对U251脑胶质瘤细胞生长有抑制作用,且呈时间、剂量相关;白藜芦醇作用于U251脑胶质瘤细胞后Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1、STAT-3蛋白表达下降,同时细胞形态也发生改变.白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤细胞的增殖,能诱导细胞凋亡.     

RNA干扰胰岛素样生长因子结合蛋白2基因治疗胶质瘤的体外实验研究

目的 研究与胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGF-BP2)对胶质瘤的抑制作用.方法 化学合成3条针对IGF-BP2的siRNA和1条阴性对照siRNA,采用小分子干扰RNA技术使胶质瘤U251细胞的IGF-Bit2基因沉默.通过逆转录PCR和免疫组化的方法检测IGF-BP2的表达,用MTT法检测干扰后U251细胞的增殖活性变化.结果 逆转录PCR检测表明转染后24 h IGF-BP2的mRNA表达明显降低,空白对照、阴性对照、脂质体、siRNA1、siRNA2、siRNA3组中IGF-BP2 mRNA水平分别为:0.88±0.02,0.87±0.03,0.84±0.02,0.65±0.03,0.55±0.04和0.64±0.02.48 h分别为0.93±0.04.0.90±0.04,0.93±0.03,0.76±0.04,0.58±0.03和0.75±0.02,72 h为0.95±0.04,0.95±0.03,0.94±0.02,0.78±0.05,0.60±0.02和0.76±0.03.3条siRNA中siRNA2作用最显著.免疫组织化学方法检测表明IGF-BP2的蛋白表达阳性率也由92.3%明显降低至24 h的15%,至48 h为52.5%,仍低于正常胶质瘤细胞.RNA干扰后胶质瘤细胞的MTT值虽在缓慢升高,于24 h相对于对照组差异无统计学意义,但至48 h和72 h均低于对照组(P＜0.05).结论 理想的IGF-BP2小分子干扰RNA序列能够抑制该基因的mRNA和蛋白的表达并能抑制胶质瘤细胞的增殖活性.     

卡氮芥-聚乳酸缓释剂对鼠胶质瘤的抑制作用

为了提高胶质瘤化疗的疗效 ,我们研制了卡氮芥聚乳酸缓释剂 (ＢＣＮＵ ＰＬＡ) ,并曾初步探讨了其体外释放特性。本研究进一步对ＢＣＮＵ ＰＬＡ对大鼠体重和血细胞的影响 ,还将ＢＣＮＵ ＰＬＡ用于治疗大鼠脑胶质瘤 ,收到良好疗效。一、材料与方法1 .ＢＣＮＵ ＰＬＡ缓释剂对外周血的影响 :36只大鼠随机分成 6组 (载药量 30 %ＢＣＮＵ ＰＬＡ 3组、空白 ＰＬＡ 3组 ) ,每组 6只 ,体重 2 0 0～ 2 50ｇ ,戊巴比妥钠腹腔麻醉 (40ｍｇ ｋｇ)后 ,将鼠头部固定于立体定位仪上 ,碘酒、酒精消毒 ,于矢状缝左 2ｍｍ ,冠状缝后 3ｍｍ处 ,切开皮肤 ,钻…     

冠状动脉支架术患者血浆血小板激活因子含量的变化

冠状动脉(冠脉)支架术是救治急性冠脉综合征(ACS)及时而有效的手段。血小板激活因子(PAF)在各种感染和非感染性炎症反应的发生中起主要作用。我们观察了行与未行冠脉支架术ACS患者血浆PAF含量的变化，并与稳定型心绞痛(SA)患者及健康人进行比较，报告如下。