HPLC法同时测定菊兰感冒颗粒中绿原酸、黄芩苷和木犀草素的含量

目的：建立同时测定菊兰感冒颗粒中绿原酸、黄芩苷和木犀草素等3种成分的HPLC方法。方法：采用Diamosil C18（2）色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相,流速为1.0 ml·min^-1,梯度洗脱;柱温35℃;检测波长为327 nm（绿原酸和黄芩苷）、360 nm（木犀草素）。结果：绿原酸、黄芩苷和木犀草素的线性范围分别为0.50-9.96μg·ml-1（r=0.999 8）、10.10-202.00μg·ml^-1（r=0.999 5）、0.10-2.04μg·ml^-1（r=0.999 6）;平均回收率分别为98.13%、98.80%、99.62%;RSD分别为0.65%、0.26%、0.57%（n=6）。结论：该法简便、稳定、重复性好,可用于菊兰感冒颗粒中绿原酸、黄芩苷和木犀草素的含量测定。     

MR对比剂荧光VEGF165-USPIO合成及其活性的体外实验

目的：探讨荧光 VEGF165-USPIO（血管内皮生长因子165-超顺磁性氧化铁）作为 MR 对比剂的可行性,检测该对比剂体外对 VEGF165抗原的靶向性。方法：通过氨基-羧基偶联方式将 VEGF165单克隆抗体和 USPIO 连接,然后将 Cy5．5标记到单克隆抗体表面,构建 Cy5．5-anti-VEGF165-USPIO 靶向对比剂。以离心和磁分离器的洗涤手段进行改良 ELISA 实验检测其体外活性,实验组加入0．25ml 的荧光-anti-VEGF165-USPIO,对照组加入相同量的荧光 USPIO,每组各设5个离心管,两样本为计量资料,采用独立 t 检验比较不同组间吸光值差异有无显著性。结果：通过分光光度计验证对比剂连接成功,VEGF165单克隆抗体偶联率达到了71．7％,CY5．5的偶联率为83．3％。ELISA 实验表明实验组和对照组各自吸光值差异有显著性意义（P ＜0．05）,实验组 OD（吸光值）明显高于对照组。结论：荧光 anti-VEGF165-US-PIO 体外有结合 VEGF165的活性,为进一步的 MR 肿瘤靶向对比剂研究奠定了实验基础。     

肾移植患者吗替麦考酚酯血药浓度监 测简

目的：探讨对吗替麦考酚酯进行治疗药物监测的临床必要性.方法：采用HPLC方法测定血浆中麦考酚酸的谷浓度和峰浓度,对2012 年10 – 12 月期间83 例肾移植患者血浆麦考酚酸浓度进行分析.结果：患者血浆麦考酚酸谷浓度在0.34 ～ 3.99 μg·mL-1范围内的共46例次,血浆麦考酚酸峰浓度在0.91～12.78 μg·mL-1范围内的有37例次.在固定给药剂量下,麦考酚酸血药浓度的个体差异较大.结论：对吗替麦考酚酯进行治疗药物监测具有重要的临床价值.     

α-酮戊二酸钠对转化生长因子β_1诱导的HK-2细胞上皮-间充质转分化的影响

目的探讨α-酮戊二酸钠对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的HK-2细胞上皮-间充质转分化(EMT)的影响。方法 TGF-β10.5,2和5μg.L-1分别作用于葡萄糖5和30 mmol.L-1培养的HK-2细胞72 h,通过RT-PCR法检测EMT标志物E-钙黏着糖蛋白和波形蛋白mRNA表达的变化,以选择EMT病变模型的最佳诱导条件。在此基础上,观察α-酮戊二酸钠10,100和500μmol.L-1对HK-2细胞EMT病变及G蛋白偶联受体80(GPR80)mRNA表达的影响。结果①在葡萄糖5和30 mmol.L-1条件下,当TGF-β1为5μg.L-1时,与对照组比较,E-钙黏着糖蛋白mRNA的降低和波形蛋白mRNA的升高最明显(P<0.01),表明HK-2细胞发生了典型的EMT病变;②选择TGF-β15μg.L-1和葡萄糖30 mmol.L-1制备EMT病变模型,同时加入α-酮戊二酸钠100和500μmol.L-1作用72 h,与模型组比较,E-钙黏着糖蛋白mRNA明显升高,波形蛋白mRNA明显降低,GPR80 mRNA表达增加(P<0.01),表明α-酮戊二酸钠可逆转HK-2细胞EMT的发生。结论在葡萄糖5和30 mmol.L-1培养条件下,TGF-β15μg.L-1作用72 h,HK-2细胞可出现典型的EMT病变;α-酮戊二酸钠对该病变具有抑制作用。     

葡聚糖磁性载体在大鼠腹部皮瓣中的靶向性研究

目的：探索外磁场作用下葡聚糖和交联葡聚糖磁性载体在大鼠腹部皮瓣的靶向性,为磁性药物防治同种异体大鼠腹部皮瓣移植后免疫排斥作用做准备。方法：取雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠35只,体重250～350g,随机分为以下7组：①交联葡聚糖磁性载体局部输注,2400GS磁场作用1h组（n=5,此组为标准对照组）;②葡聚糖磁性载体局部输注,2400GS磁场作用1h组（n=5）;③交联葡聚糖磁性载体全身输注,2400GS磁场作用1h组（n=5）;④交联葡聚糖磁性载体局部输注,0GS磁场作用1h组（n=5）;⑤交联葡聚糖磁性载体局部输注,6000GS磁场作用1h组（n=5）;⑥交联葡聚糖磁性载体局部输注,2400GS磁场作用3h组（n=5）;⑦空白对照组（n=5）。取大鼠腹部皮瓣,用原子发射光谱法测定皮瓣内铁元素浓度,间接反映磁性载体在组织中的分布。结果：⑴两种磁性载体比较（第①组与第②组）,在大鼠腹部皮瓣内,交联葡聚糖磁性载体组铁元素浓度245.2±6.84μg/g高于葡聚糖磁粒组168.8±8.70μg/g,P〈0.05。⑵两种输注途径比较（第①组与第③组）,在大鼠腹部皮瓣内,局部输注组铁元素浓度245.2±6.84μg/g高于全身输注组215.2±8.79μg/g,P〈0.05。⑶不同外界磁场强度比较（第①组与第④、⑤组）,在大鼠腹部皮瓣内,6000GS组铁元素浓度388.4±10.99μg/g高于2400GS组245.2±6.84μg/g,P〈0.05,后者又高于0GS组127.8±5.54μg/g,P〈0.05。⑷不同外界磁场作用时间比较（第①组与第⑥组）,在大鼠腹部皮瓣内,3h组铁元素浓度414.4±13.07μg/g高于1h组245.2±6.84μg/g,P〈0.05。结论：在外界磁场作用下,葡聚糖磁性载体可以在大鼠腹部皮瓣内靶向聚集,并且其浓度与磁性载体的性质和输注方式有关,与外界磁场强度及其作用时间呈正相关。     

钴60γ射线辐射对异烟肼稳定性的影响

摘 要 目的：建立测定异烟肼HPLC方法,以钴60γ射线（60Co γ）为辐射源,考察辐射对异烟肼稳定性的影响。方法: 采用Diamosil C18（2）色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;甲醇 0.2%磷酸溶液（2〖KG*9〗∶〖KG-*2〗98）为流动相,流速：1.0 ml·min-1,检测波长：254 nm,进样量：10 μl。分别配制不同准确初始浓度的异烟肼溶液（10 ,50,100,100 μg·ml-1+N2饱和、100 μg·ml-1+O2饱和、100μg·ml-1+10%叔丁醇及异烟肼粉末）等,经不同辐照剂量（0.3,0.6,1,2.5,5,10 kGy）的60Co γ辐照后, HPLC法测定溶液中剩余异烟肼的含量。结果: 异烟肼的线性范围为1～200 μg·ml-1 (r=0.999 0)。平均回收率为98.13%,RSD为0.65%。异烟肼的降解率随吸收剂量的增大而增大,随浓度的增大而减小,粉末状态几乎不降解。O2的存在可明显促进异烟肼的降解,N2和叔丁醇的存在可以在一定程度上抑制异烟肼的降解。结论: 异烟肼水溶液对60Co γ辐照敏感,其浓度越低,辐照剂量越大,降解越彻底。     

重症肌无力患者他克莫司血药浓度监测

目的探讨对重症肌无力患者应用他克莫司进行治疗药物监测的临床必要性。方法采取LC-MS/MS法测定血浆中他克莫司的浓度,对2012年9月~2014年3月期间21例重症肌无力患者血浆他克莫司浓度进行分析。结果患者他克莫司谷浓度分布在0.62~4.69 ng·m L-1。在同样给药剂量下,他克莫司血药浓度的个体差异较大。结论对他克莫司进行治疗药物监测具有重要的临床价值。     

鼠源T细胞受体单克隆抗体对Ⅱ型胶原诱导DBA/1小鼠关节炎的治疗作用

目的观察鼠源T细胞受体(mTCR)单抗对类风湿性关节炎的治疗作用。方法将DBA/1小鼠随机分为正常对照、模型对照、地塞米松0.5 mg·kg-1和mTCR单抗25 mg·kg-1治疗组,每组6只。除正常对照组外,其余各组小鼠分别在第1天和第22天皮内注射牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂的乳化剂,制备Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)小鼠模型。地塞米松治疗组于第29～41天皮下注射地塞米松磷酸钠注射液,隔日一次;mT-CR单抗组分别在第0天和第21天皮下注射mTCR单抗各1次;正常和模型对照组皮下注射等体积生理盐水。动态观察小鼠体质量、足掌厚度和关节炎指数的变化,并计算CIA的发生率。给药后第60天实验结束,处死小鼠,HE染色观察踝关节组织病理变化,多功能流式液相芯片分析仪测定小鼠血清γ干扰素(IFN-γ),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素4(IL-4)的含量。结果在第42天,模型组小鼠CIA发生率为6/6,地塞米松和mTCR单抗治疗组分别为2/6和1/6;第49天,模型组和地塞米松治疗组CIA的发生率仍分别为6/6和2/6,mTCR单抗治疗组升高为5/6。在整个发病过程中,地塞米松和mTCR单抗治疗组小鼠的足掌厚度和关节炎指数较模型组降低(P<0.05,P<0.01),其中第38天时,正常对照组、模型组、地塞米松和mTCR单抗治疗组小鼠足掌厚度分别为2.34±0.06,2.96±0.49,2.61±0.44和(2.29±0.13)mm;关节炎指数分别为0.0±0.0,4.0±2.6,0.7±1.0和0.3±0.8。实验结束时,地塞米松和mTCR单抗治疗组血清IL-4含量分别为94±12和(105±38)ng·L-1,与模型组(67±8)ng·L-1比较明显升高(P<0.05);TNF-α含量分别为4.8±0.7和(3.8±0.8)ng·L-1,与模型组(6.7±1.5)ng·L-1比较明显降低(P<0.05);各组IFN-γ含量无明显变化。组织病理观察结果显示,与模型组相比,地塞米松和mTCR单抗治疗组小鼠踝关节炎症细胞浸润明显减轻,骨破坏减弱。结论 mTCR单抗对类风湿性关节炎可能具有治疗作用。     

人oGPCRs与Gi1α的基因融合及其在昆虫细胞Sf9的表达

目的获得人孤儿G蛋白偶联受体（oGPCR）与G蛋白α亚基（Gi1α）的融合基因及其表达蛋白。方法采用RT-PCR法,从人HepG2细胞扩增oGPCR成员GPR45,GPR85,GPR174和Gi1α的完整表达序列,运用重叠延伸PCR法扩增得到人oGPCR成员GPR45,GPR85,GPR174分别与Gi1α的融合基因,将各融合基因与供体质粒pFASTBac1重组,而后分别转化DH10Bac菌株获得杆状病毒穿梭杆粒,制备重组杆状病毒并感染Sf9细胞,收获融合蛋白,经Western印迹鉴定。结果得到了上述oGPCR成员的融合基因oGPCRs-Gi1α,并使之在昆虫细胞成功表达,制备了足量的oGPCRs-Gi1α融合蛋白。结论oGPCR可与Gi1α成功融合,昆虫细胞表达体系是制备融合蛋白的理想手段,为今后深入开展oGPCRs的相关研究提供了保障。     

HPLC法同时测定茵栀黄颗粒中黄芩苷、木犀草素和绿原酸的含量

目的:建立同时测定茵栀黄颗粒中黄芩苷、木犀草素和绿原酸含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C18,流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 ml/min,柱温为35℃,黄芩苷和绿原酸检测波长为327 nm、木犀草素检测波长为360 nm,进样量为10μl。结果:黄芩苷、木犀草素、绿原酸质量浓度分别在10.10~202.00、0.10~2.04、0.50~9.96μg/ml范围内与各自峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 7、0.999 6、0.999 7);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<1.0%;平均加样回收率分别为97.98%、98.15%、97.22%,RSD分别为0.04%、0.70%、0.95%(n=6)。结论:该方法简便、稳定、重复性好,可用于茵栀黄颗粒中黄芩苷、木犀草素和绿原酸的含量测定。