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1.
2.
目的:研究具有生物学活性的人防御素2(HBD2)多肽在大肠杆菌中的原核高效表达的可行性及融合表达蛋白的分离纯化技术。方法:PCR扩增不合前导序列的HBD2成熟肽的编码框全长的cDNA片段(smHBD2-cDNA),利用BglⅡ和BamHⅠ同尾酶构建多拷贝串联的nsmHBD2-cDNA的克隆载体,利用NcolⅠ和HindⅢ限制性内切酶构建融合表达载体pET32-nsmHBD2-cDNA,在大肠杆菌中BL21(DE3)中诱导表达含HBD2的融合蛋白,SDS-PAGE分析产量。可溶蛋白经亲和层析、肠激酶酶切、离子交换层析等方法分离、纯化HBD2多肽。采用液体培养法,测定重组人β防御素2对大肠杆菌的抑菌活性。结果:构建了n为1、2、4或8倍的多拷贝串联nsmHBD2-cDNA表达载体,1、2和4倍smHBD2-cDNA的可溶蛋白比例分别为52%、48%和31%;而8倍HBD2-cDNA几乎不合可溶蛋白,目标蛋白以包含体形式表达,集中在不可溶部分。重组HBD2对E.coli K12 D31有较强的抑制作用,在终浓度约为0.4至0.5μg/ml时,90%细胞的生长被抑制。结论:采用融合表达、多拷贝串联表达方式,可增加产物长度以弱化蛋白酶的降解作用,也减弱了目标蛋白产物对宿主的毒性;适当的多拷贝串联基因可以提高HBD2的产量,但拷贝数过高会影响重组蛋白表达产量,且易形成不溶蛋白;在大肠杆菌中可达到具有生物学活性的HBD2多肽的原核高效表达。 相似文献
3.
目的 考察甘草查尔酮A对顺铂致人肾小管上皮细胞HK-2损伤的影响。方法 将点板的HK-2细胞分为对照组(不含药的培养基)、顺铂组(顺铂20μM)、合用组(顺铂20μM和甘草查尔酮A 4μM)、甘草查尔酮A组(甘草查尔酮A 4μM);采用CCK8法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,q RT-PCR检测HK-2中caspase-3、caspase-8、caspase-9的m RNA水平。结果 与对照组比较,甘草查尔酮A组各项指标比较差异均无统计学意义(P> 0.05),顺铂组则细胞活力降低,凋亡率增高,caspase-3、caspase-8、caspase-9的m RNA水平增高(P <0.05);与顺铂组相比,合用组使HK-2细胞活力由(40.52±5.65)%上升到(69.42±5.54)%(P <0.05);凋亡细胞比例由(20.33±1.81)%下降到(7.77±1.98)%(P <0.05);顺铂诱导的caspase-3、caspase-8、caspase-9的m RNA水平显著降低(P <0.05)。结论 甘草查尔酮A对顺铂致伤的肾小管上皮细胞... 相似文献
4.
中医药是中华民族优秀文化的瑰宝。中医药事业是我国卫生事业的重要组成部分,中药产业是我国具有原创知识产权的优势民族产业。中药以其天然、具有治疗、预防、保健等作用,且毒副作用小而享誉世界。不久前召开的全国中医药工作会议也进一步阐明:“具有几千年悠久历史的中医药,在构建社会主义和谐社会和全面建设小康社会进程中充满着无限生机与活力。继承发展中医药是历史赋予我们的神圣职责和光荣使命”。那么,在全国久负盛名的湖南中医药行业,在新的历史时期将怎样审视和致力于中国中医药事业发展,如何为构建和谐湖南和加快富民强省作出贡献?笔者近日在湖南省中医药研究院隆重庆祝建院50周年的喜庆日子里,访问了湖南中医药大学党委书记、湖南省中医药研究院院长、博士生导师蔡光先教授。问:50年风雨征程,50年艰苦创业。请问您,走过半个世纪历程的湖南省中医药研究院,取得了哪些重大成就?答:湖南省中医药研究院从建院之日起,始终站在中国中医药事业发展和科学研究最前沿,面向国家战略和社会发展需要,面向人民群众健康需求,在中医药科研、医疗、教育、生产、信息交流等领域,谱写了一篇篇精彩华章,取得了一项项丰硕成果,成为中华杏林一朵璀璨夺目的奇葩。具体来讲,取得了以下... 相似文献
5.
Ki—67表达强度对人脑胶质瘤恶性度的评价 总被引:10,自引:0,他引:10
目的 研究细胞核增殖抗原Ki-67人脑胶质瘤中的表达强度与病理分级的关系。比较Ki-67与其他评价肿瘤增殖潜能指标的优越性。方法 SP免疫组化方法对41例不同级别人脑胶质瘤细胞的Ki-67表达进行观察,评价染色强度和阳性细胞百分数与胶质瘤细胞恶性度的关系。结果 全部受检病例中对照组Ki-67均为阴性染色,全部胶质瘤标本表达阳性率达85%星形细胞瘤I级绝大部分病例为阴性染色,只存在2例阳性染色。结论 Ki-67表达与胶质瘤恶性程度相关,其表达水平不仅可以反映胶质瘤的恶性增殖潜能,亦可反映其预后,Ki-67在人脑胶质瘤中的表达可以应用于临床,作为评价胶质瘤生物学行为,选择治疗措施、预测患者生存时间的指标。 相似文献
6.
面神经损伤引起的周围性面瘫在临床上比较常见,针灸治疗此病已成共识。因面神经位置表浅,颅脑手术及外伤(颞骨骨折、外颞部裂伤等)也极易造成面神经周围支的损伤。这种创伤性面瘫的治疗一直是人们关注的热点,我们采用针灸为主综合治疗15例创伤性面瘫患者,取得满意疗效。现报道如下: 相似文献
7.
目的探讨电针对Aβ25-35导致的阿尔茨海默病模型大鼠应用电针刺激后cAMP/PKA/CREB信号转导通路的变化。方法48只健康雌性SD大鼠随机分为AD模型组、电针组、假手术组和正常对照组各12只。模型组与电针组采用Aβ25-35建立AD模型后电针组给予电针刺激,模型组未给予电针刺激;假手术组双侧海马注射等量生理盐水;正常对照组不做任何处理。4组均采用Morris水迷宫实验检测大鼠记忆与空间探索能力,采用分光光度计法检测脑组织超氧化物歧化酶与丙二醛水平,采用放射免疫法检测海马cAMP水平,采用免疫组织化学法检测海马5-羟色胺1A受体、蛋白激酶A与p-CREB蛋白表达水平,采用Westernblot检测海马总Tau蛋白表达水平及Tau蛋白Ser396位点磷酸化情况。结果与模型组比较,电针组、假手术组与对照组逃避潜伏期缩短、跨越平台次数增多、目标象限停留时间延长(P〈0.05),脑组织中超氧化物歧化酶、5-羟色胺1A受体、蛋白激酶A及p-CREB水平增高(P〈0.05),丙二醛、总Tau蛋白、pTau—Ser396、c—los蛋白水平降低(P〈0.05);电针组总Tau蛋白、c—los及PKA水平高于假手术组(P〈0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论电针可明显提高阿尔茨海默病大鼠学习记忆功能和空间探索能力,可能是通过拮抗cAMP/PKA/CREB信号转导通路相关蛋白的异常改变起作用。 相似文献
8.
椎动脉型颈椎病是中老年人一种常见病,容易复发,且有年轻化趋势,许多患者深受其苦。其发作的最大特点是位置性眩晕,常发生于头颈部活动时,以头颈部前后屈伸及左右旋转时明显,严重影响患者生活质量,且药物治疗效果欠佳。我科采用颈夹脊电针加赵氏正骨手法治疗并配合有效的护理护理90例病人,效果满意,报道如下。 相似文献
9.
10.