缝牵引成骨扩展颧骨的初步实验研究

目的 探讨三维牵引正常山羊颧骨在缝区形成新骨的可行性和方法。 方法 将自行研制外固定三维缝牵引成骨器，安装固定后三维牵引山羊颧骨，于牵引后2周观察颧骨移动及缝区新组织形成情况。 结果 7只山羊的颧平均被牵引0.6cm缝区新组织生成确切。 结论 该外固定三维缝牵引成骨器操作简便，牵引效果稳定可靠，实验方法切实可行。     

颧骨三维牵张器的初步研制

目的：探讨颧骨外固定三维牵张器的设计和制作。方法：根据机械移动原理，设计两块可相对移动的支撑板，一定范围内在两个垂直方向任意移动，带动牵张杆改变牵张方向，进行三维牵张成骨，在离体羊颅骨模型上进行模拟牵张成骨。结果：研制的三维缝牵张器重量30g，牵张杆前后向移动2cm左右、上下方向移动3．5cm左右，向外移动3cm左右，牵张控制准确，三维变向简便易行。结论：设计的外固定三维牵张器可以三维牵张，操作简便易行，控制准确。     

神经生长因子对脂多糖诱导的成骨细胞炎症反应的影响

目的研究外源性神经生长因子（NGF）对脂多糖（LPS）诱导的成骨细胞炎症相关基因表达的影响。方法原代培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,Griess试剂法测定培养基上清中NO含量：MTT法检测细胞活力;Real-time定量PCR检测炎症相关基因TNF-α、COX-2和NF-κB mRNA表达。结果 NGF高中剂量（100ng/ml、10ng/ml）可显著抑制LPS诱导的成骨细胞NO的释放,该浓度下细胞活力不受影响;NGF可显著抑制TNF-α、COX-2和NF-κB基因表达。结论 NGF通过减少NO释放,抑制炎症相关基因表达发挥抗炎作用。     

颈横血管为蒂的斜方肌上部肌皮瓣及肩胛冈骨肌皮瓣的应用解剖

目的：进一步探讨以颈横血管为蒡的斜方肌上部肌皮瓣及肩胛冈骨肌皮瓣的应用解剖学基础。方法：解剖观测32侧斜方肌上部、肩胛冈的形态、血供。结果：斜方肌上部近似于梯形,A、B、C和D四缘平均长度为174.63、157.18、86.98、80.95mm,面积126.78cm^2,肩胛冈全长131.21mm;颈横动脉干、颈浅动脉干及其升支、肩胛冈支平均长度分别为42.50、27.80、43.12、28.75mm,起点外径分别为2.71、2.39、1.96、0.50mm,升支发出0.5mm以上肌皮穿支3－6支,回流静脉与相应动脉伴行。结论：斜方肌上部及肩胛冈形态及血供适合形成以颈横血管为蒂的组织瓣,修复口腔颌面部组织缺损。     

羊颧骨缝三维牵张成骨的组织学观察

目的探索不截骨的骨缝牵张成骨组织学变化。方法采用10～13个月龄普通山羊为实验对象，每只动物左颧骨行三维牵张成骨，固定1、3、5、8周后取材，和对侧空白对照标本比较，观察缝区组织变化、新骨形成情况。结果骨缝被牵开后1周，成纤维细胞、成骨细胞、毛细血管增生，大量纤维软组织排列有序并连接骨缝两侧，骨缝两侧组织面不整齐，牵张侧成骨活跃，大量类骨质形成；3周时形成较成熟的骨小梁；5周时编织骨形成；8周时结构成熟完整。结论不截骨的骨缝三维牵张成骨，骨缝牵张侧新骨快速形成；     

骨缝牵张成骨的比较组织学研究

目的:比较HE染色和三联染色中不截骨的缝牵张成骨组织学变化情况.方法:不截骨直接三维牵张羊颧骨缝,固定期1、3、5、8周取材,进行三联染色和HE染色,与对侧空白对照标本比较,观察缝区组织变化、新骨质形成情况.结果:骨缝被牵开后1周,成纤维细胞、成骨细胞、毛细血管增生,大量胶原纤维形成、排列有序,3周时以胶原纤维为主,形成较成熟的骨小梁,5周时编织骨形成,8周时未见网状纤维和弹力纤维,结构成熟完整.结论:三联染色显示固定早期大量胶原纤维形成,HE染色显示新骨形成速度快.     

PRDX3真核表达载体构建及亚细胞定位

目的：构建带FLAG标签的过氧化物还原酶3（peroxiredoxin3,PRDX3, PRX3）的真核表达载体,并对其在人舌癌SCC15细胞中的定位进行检测。方法以乳腺文库为模板,PCR扩增带有FLAG标签的PRDX3基因片段,并将扩增产物插入到PCDH空载体中,构建成PCDH－FLAG－PRDX3,质粒测序正确后瞬时转染入人胚肾293T细胞, Western免疫印迹检测克隆载体的表达情况,细胞免疫荧光实验检测PRDX3的亚细胞定位。结果双酶切和测序结果表明,PCDH－FLAG－PRDX3真核表达载体构建成功,转染293T细胞后成功表达了FLAG－PRDX3融合蛋白;细胞免疫荧光显示FLAG－PRDX3蛋白定位于舌癌SCC15细胞的细胞质中,不存在于细胞核内。结论成功构建了带FLAG标签的PRDX3真核表达载体,并检测其定位于舌癌SCC15细胞质中,为进一步明确PRDX3在舌癌发生发展中的功能及分子机制奠定基础。     

颧骨缝牵张成骨的定量研究

目的:研究缝牵张成骨过程中ALP、BGP 、Ca含量变化与新骨形成的关系。方法:牵张成骨后的标本经过匀浆、离心,进行对硝基苯磷酸盐法测量新形成骨中碱性磷酸酶活性水平,利用骨钙素放射免疫试剂盒测定骨钙素含量,用原子吸收分光光度计测定钙含量。结果:骨中碱性磷酸酶在牵张成骨后1周明显升高,3周达到峰值(3.42±0.35) U/g,5周有所下降,8周时接近对照组水平;骨钙素的水平在牵张成骨后有所增加,3周明显上升,牵张成骨后5周达到峰值(74.86±2.71) ng/g,8周下降接近对照组水平;实验组钙含量明显低于对照组,随牵张成骨进行,钙含量逐渐升高,与对照组比较具有明显统计学意义,牵张成骨后5周,实验组钙含量明显增高,8周时钙含量(46.56±2.20) mg/g接近对照组水平。结论:牵张成骨时大量骨碱性磷酸酶、骨钙素先后形成,牵张区钙化迅速,促进新骨质形成。     

敲低PES1基因抑制舌癌细胞的生长

目的：构建稳定表达PES1 shRNA的舌癌细胞系,研究敲低PES1基因对舌癌细胞生长的影响。方法在293 T细胞中包装并获得敲低PES1基因的病毒,然后将病毒感染Tca8113、SCC6和SCC153种舌癌细胞并筛选稳定克隆,Western印迹检测PES1蛋白的表达水平;利用生长曲线检测敲低PES1对舌癌细胞生长的影响,流式细胞术检测敲低PES1对舌癌细胞周期的影响。结果成功构建稳定表达PES1 shRNA的舌癌细胞系,敲低PES1基因能够抑制舌癌细胞的生长,使细胞周期阻滞在G0／G1期,敲低PES1抑制cyclin D1的表达。结论敲低PES1抑制舌癌细胞的生长,诱导细胞周期阻滞在G0／G1期,抑制cyclin D1的表达,因此PES1可能成为舌癌基因治疗的靶标。     

神经生长因子对山羊骨髓间充质干细胞向成骨分化的调节作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对山羊骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的调节作用. 方法:体外培养山羊BMSCs,流式细胞仪鉴定表面标志物;将第3 代BMSCs分为空白对照组、成骨诱导对照组、NGF组和实验组,检测各组碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OC)水平、应用von Kossa染色的方法比较各组细胞成骨性能. 结果:流式细胞术测得各组细胞均呈CD90、CD105强阳性表达,CD34、CD45阴性.实验组ALP和OC表达明显高于其它3 组,差异有显著性意义(P<0.05).成骨诱导对照组细胞von Kossa染色阳性,可见黑色钙化结节,实验组较成骨诱导对照组钙化结节数目明显增多,面积增大.而NGF组各项指标与空白对照组无明显差异.结论:单纯使用NGF并不能诱导山羊BMSCs向成骨细胞转化,但NGF对山羊BMSCs向成骨细胞分化过程具有明显的促进作用.