ALS2调控初级纤毛发生的机制研究

目的 探究肌萎缩侧索硬化症蛋白2(ALS2)对初级纤毛发生的调控作用及其可能机制。方法 通过免疫荧光染色检测ALS2蛋白的亚细胞定位。采用siRNA干涉特异性敲低RPE-1细胞中ALS2 mRNA含量,检测ALS2蛋白含量减少对初级纤毛的影响。利用Western印迹检测初级纤毛组装与去组装过程中ALS2蛋白的动态变化。建立初级纤毛去组装实验体系,检测ALS2蛋白缺失对初级纤毛去组装过程的影响,Time-laps活细胞实时成像技术检测ALS2对初级纤毛去组装过程中纤毛末端剪切的影响。结果 免疫荧光显示,ALS2定位于初级纤毛发生的基体——中心体周围。在RPE-1细胞中敲低ALS2会显著提高初级纤毛异常发生的比例。蛋白水平动态检测结果显示,在初级纤毛去组装过程中ALS2蛋白表达水平逐渐增加;敲低ALS可显著抑制纤毛去组装过程。活细胞实时成像显示,ALS2蛋白缺失可抑制初级纤毛去组装过程的末端剪切。结论 ALS2作为中心体定位蛋白,通过促进初级纤毛末端剪切的正常进行,调控初级纤毛组装与去组装之间的动态平衡,防止纤毛异常生长引起的纤毛类疾病的发生。