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外周血DNA提取方法的比较及改良 总被引:10,自引:0,他引:10
目的 对3种提取外周血的实验方法进行了比较,并建立一种简便、快速、有效的外周血基因组DNA的提取方法。方法 采用常规酚/氯仿提取法、碘化钾法和外周血液DNA提取法。结果 外周血液DNA提取方法提取外周血基因组DNA的纯度高,通过电泳图明显可见。结论 外周血液DNA提取简便、快速、有效适用于临床标本的研究。 相似文献
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目的观察姜黄素对膀胱肿瘤T24细胞中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的影响。方法用不同浓度的姜黄素作用于膀胱肿瘤细胞株T24,用MTT法测定细胞抑制率,用流式细胞仪测定细胞凋亡结果,用RT-PCR测定不同姜黄素浓度对肿瘤细胞株胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)mRNA表达量的影响。结果姜黄素对膀胱肿瘤细胞株的作用具有时间和剂量依从性,姜黄素能够诱导膀胱肿瘤细胞株凋亡,姜黄素可使肿瘤细胞株的IGF-1 mRNA表达量降低。结论姜黄素可能会通过胰岛素样生长因子-1(IGF-1)通路抑制膀胱肿瘤T24细胞的生长,促进其凋亡。 相似文献
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目的探讨植物雌激素Genistein对氧化型低密度脂蛋白干预的内皮细胞内皮型一氧化氮合酶和核因子κB表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,在氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)干预内皮细胞的基础上,不同浓度的Genistein(10、50和100nmol/L)孵育,MTT法观察Genistein对细胞活力的影响,实时定量逆转录聚合酶链反应检测内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达,Western blotting检测内皮型一氧化氮合酶和核因子κB蛋白的表达。结果与空白对照组相比,氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)明显抑制细胞活力,下调内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白表达,上调核因子κB蛋白表达(P0.05);Genistein明显增高细胞活力,上调内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白表达,抑制核因子κB蛋白表达(P0.05),且呈浓度依赖性(P0.05)。结论 Genistein能够促进内皮型一氧化氮合酶的表达,抑制核因子κB的表达。 相似文献
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目的研究三氧化二砷(As2O3)联合γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺(BSO)对肿瘤多药耐药细胞K562/ADM细胞中P-糖蛋白(P—gP)的抑制作用,比较单用As2O3与两药联合的作用效果。方法As2O3组(0.5μmol/L,2.0μmol/L,5.0μmol/L)单独及联合100μmol/LBSO作用于K562/ADM细胞后,分光光度法检测K562/ADM细胞内谷胱甘肽(GSH)含量变化;流式细胞术(FCM)检测P-gp蛋白水平表达变化;反转录一聚合酶链反应(RT—PCR)方法检测mdr-1 mRNA的表达变化。结果As2O3临床剂量组(0.5μmol/L,2μmol/L)联合BSO24h内即可抑制P-gp和mdr-1mRNA的表达水平,在48h后,临床剂量联合组抑制mdr-1mRNA的作用效果要明显强于单用高剂量组,在72h后,临床剂量联合组抑制P—gP的作用效果要明显强于单用高剂量组。结论临床剂量As2O3联合BSO可有效抑制K562/ADM细胞P—gp及mdr-1 mRNA的表达。 相似文献
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目的 本研究探讨颅脑损伤后血清黑色素细胞刺激素α-MSH含量变化,以及与颅脑损伤严重程度、血清肿瘤坏死因子-α (TNF-α)的关系.方法 选取急性颅脑损伤患者48例,按GCS评分归为3组,重度组(3~8分)18例,中度组(9~12分)16例,及轻度组(13~ 15分)14例;并选取健康自愿者10例为对照组.于伤后24 h内、3d、5d、7d分别抽取血标本,采用酶联免疫吸附双抗体夹心(ELISA)方法测定血清α-MSH和TNF-α的含量.数据用均数±标准差((x)±s)表示;统计分析采用重复测量的方差分析及进一步多重比较;如需两数据之间单独比较采用LSD-t检验法;相关性分析采用Pearson相关性分析.结果 各颅脑损伤组血清α-MSH含量均低于对照组(P<0.05),且病情越重α-MSH含量越低,其最低值在第3天或第5天[重度组(9.65±4.21)pg/mL,中度组(10.69±4.30) pg/mL,轻度组(18.89 ±7.19) pg/mL vs.对照组(45.67±10.95) pg/mL].各损伤组血清TNF-α含量与对照组比较均增高(P<0.05),病情越重TNF-α含量越高,且三组均于第3天达最高[重度组(37.24±18.28) pg/mL,中度组(26.19±6.78) pg/mL,轻度组(18.60±7.83) pg/mL vs.对照组(10.74 ±1.71) pg/mL].患者血清α-MSH含量和TNF-α含量在四个时间点均呈负相关.结论 颅脑损伤后血清α-MSH含量降低,低点在3d或5d;血清TNF-α含量增高,峰值在3d;损伤程度越重,这些含量改变越明显;血清α-MSH和TNF-α含量基本呈负相关. 相似文献
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目的 研究雌激素受体介导的基因组效应在Genistein促进内皮型一氧化氮合酶表达过程中的作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,在氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)干预内皮细胞的基础上,经雌激素受体拮抗剂ICI182780(1 μmol/L)或经基因转录阻断剂放线菌素D(5 mg/L)作用30 min后,再加入Genistein(100 nmol/L)作用24 h,实时定量PCR检测内皮型一氧化氮合酶mRNA表达,Western Blotting检测内皮型一氧化氮合酶蛋白的表达.结果 与空白对照组相比,氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)明显下调内皮型一氧化氮合酶 mRNA和蛋白表达(P<0.05);Genistein明显上调内皮型一氧化氮合酶 mRNA和蛋白表达(P<0.05),而且Genistein对内皮型一氧化氮合酶的诱导作用被雌激素受体拮抗剂ICI182780和基因转录阻断剂放线菌素D明显抑制(P<0.05 ).结论 Genistein促进内皮型一氧化氮合酶的表达与雌激素受体介导的基因组效应密切相关. 相似文献
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同型半胱氨酸及其代谢酶基因多态性与脑梗死的关系 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T、胱硫醚合成酶(CBS)基因T27796C、蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G 3种基因突变及血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平与脑梗死的关系,进一步确定遗传因素对血浆Hcy水平的影响,以及遗传因素在脑梗死发病中的意义。方法选择年龄与性别基本匹配的脑梗死组62例,健康对照组30名。采用高效液相色谱法测定受检者血浆Hcy水平,并应用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测基因表型。计量资料用x±s表示,比较采用t检验和方差分析。基因型和等位基因频率分布采用2χ检验。应用Logistic回归分析筛选脑梗死的危险因素。结果脑梗死组血浆Hcy水平明显高于健康对照组[(23±12)与(11±14)μmol/L,P<0.05],脑梗死组MTHFR基因TT纯合基因型和T等位基因频率(分别为56.5%,71.8%)均明显高于健康对照组(分别为16.7%,35.0%)。MTHFRC677T基因型和等位基因频率分布差异有统计学意义(P<0.05)。MTHFR基因C677T纯合子基因型血浆Hcy水平显著高于野生型[(21±11)与(14±3)μmol/L,P<0.01]。CBS T27796C基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05),但CBS基因T27796C纯合子基因型血浆Hcy水平显著高于杂合子基因型[(23±11)与(15±6)μmol/L,P<0.01],又高于野生型[(23±11)与(15±5)μmol/L,P<0.01]。MS A2756G基因型和等位基因频率分布组间差异无统计学意义,血浆Hcy水平组间差异无统计学意义。Logistic回归分析显示脑梗死的危险因素为血浆Hcy水平和MTHFR C677T纯合子基因型。结论血浆Hcy水平与脑梗死的发生有一定联系。MTHFR基因C677T位点纯合子突变、CBS基因T27796C位点纯合子突变可引起血浆Hcy水平升高。MTHFR C677T纯合子突变致血浆Hcy水平增高,可能是引起脑梗死发病的重要遗传因素。 相似文献
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目的 :研究雄性激素对鼠巨噬细胞株 (ana 1)细胞杜氏利什曼原虫感染率及感染水平的影响。方法 :体外培养巨噬细胞 ,实验组用雄激素 (0 4μmol L)处理 2 4h ,按巨噬细胞和前鞭毛体 1∶10的比例感染杜氏利什曼原虫。Giemsa染色法观察不同时限 (感染初期 ,3h ,6h ,12h ,2 4h ,36h ,48h)的感染率及感染水平。结果 :雄性激素处理的巨噬细胞对杜氏利什曼原虫感染率及感染水平明显高于未加雄性激素的对照组 ,并且随着时间的延长这种差别愈趋明显 (感染后 12h ,2 4h ,P <0 0 5 ;36h ,48h ,P <0 0 1)。结论 :雄性激素增强杜氏利什曼原虫对巨噬细胞株细胞感染率及感染水平。 相似文献
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TSo联合IFN-γ鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫脾淋巴细胞免疫应答 总被引:5,自引:0,他引:5
目的研究速殖子超声裂解物(TSo)和IFN-γ鼻内免疫小鼠经口感染弓形虫速殖子后,脾T细胞亚群的动态变化。方法将6~7周龄BALB/c小鼠100只随机分为4组,每组25只。分别用10μlPBS、20μgTSo、500UIFN-γ和20μgTSo 500UIFN-γ鼻内免疫小鼠2次,间隔2周。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击。分别于攻击后第7、10、13、16、19天处死小鼠,制备脾淋巴细胞悬液并涂片,免疫细胞化学法检测脾CD4 、CD8 T细胞亚群。结果攻击后第16、19天TSo IFN-γ组脾CD4 T细胞比率较第10天升高(P<0.05);脾CD8 T细胞第10、13、16、19天呈现较高水平;CD4 /CD8 比值第10、13天出现倒置。结论TSo联合IFN-γ鼻内免疫小鼠可激发系统免疫反应,提高其细胞免疫应答水平,增强脾CD8 T细胞的细胞毒作用,抵抗弓形虫感染。鼻黏膜免疫是一种安全有效的免疫接种途径。 相似文献