河南新乡2008年手足口病病原分离鉴定及病毒基因组特征

目的:对2008年分离自河南新乡手足口病患者粪便标本的病原进行分离鉴定及全基因组序列测定,并同相关毒株序列进行同源性比对和进化分析,以了解新分离病毒基因组序列特征及可能的传播来源.方法:将手足口病患者粪便标本接种敏感细胞进行分离传代培养,制备抗原片进行间接免疫荧光检测,采用特异性引物进行PCR鉴定,将病毒基因组分为8个片段进行RT-PCR扩增,扩增产物纯化后进行PCR测序.通过末端重叠序列拼接成全长病毒基因组序列,利用生物信息学软件对序列进行比对分析,绘制进化树.结果:测序获得的3株EV71病毒基因组全长均为7 405 nt,VPI氨基酸序列同源性达100%.Blast分析表明F3(F8)-Henan-08毒株均与安徽阜阳2008年分离的EV71毒株同源性最高,而F4-Henan-08毒株与我国台湾省2004年分离的EV71毒株同源性最高.序列进化分析表明,新分离毒株属于C4基因亚型.结论:新分离的河南EV71毒株与安徽阜阳分离的毒株可能具有相同来源.     

气相色谱法测定质粒DNA中乙醇和异丙醇残留量

目的:建立测定质粒 DNA 中乙醇和异丙醇残留量的方法。方法:顶空进样气相色谱法。色谱条件:DB-624石英毛细管柱(30 m×0.53 mm×3μm),柱温:60℃,气化室温度:120℃,FID 检测器,温度为300℃;进样分流比:1:50,载气 N_2(3.0mL·min~(-1))。结果:乙醇、异丙醇线性关系良好(相关系数均大于0.9999);最低检测浓度分别为0.00125 mg·mL~(-1)和0.00083 mg·mL~(-1);平均回收率分别为100.1%和100.9%;平均 RSD 分别为3.0%和1.5%。结论:该法简单快速,可用于质粒 DNA 中乙醇和异丙醇残留量的测定。     

Up and Down 法与寇氏法测定破伤风毒素LD50的比较

目的比较研究Up and Down法与寇氏法测定破伤风毒素LD50值。方法 NIH小鼠皮下注射破伤风毒素,分别使用寇氏法和Up and Down法计算LD50值。结果同一破伤风毒素经寇氏法计算得LD50值为4.97ng/Kg体重,Up and Down法计算LD50值为4.93 ng/Kg体重,95%置信区间为(4.71～5.13)ng/Kg体重。结论应用Up and Down法可测出与寇氏法相同结果的LD50值,且动物使用数量仅用8只。     

高效液相色谱法测定流感病毒裂解疫苗中Triton X-100的含量

目的:建立流感病毒裂解疫苗中裂解剂Triton X-100含量的HPLC法。方法:采用SymmetryShieldTM RP18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以注射用水-无水甲醇(20∶80)为流动相,流速为1.5 mL.min-1,柱温为25℃,检测波长为230nm,进样量为10μL,用面积归一法测定。结果:Triton X-100在625～39μg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9994),流感病毒裂解疫苗原液平均加样回收率为107.7%,RSD为0.3%;流感病毒裂解疫苗平均加样回收率为108.5%,RSD为0.4%。结论:本方法灵敏度高,操作简便可靠。     

我国血液制品中人细小病毒B19污染情况及基因型的初步研究

目的 分析我国血液制品凝血因子Ⅷ及原料血浆中人B19病毒污染情况及B19病毒的基因型.方法 以B19病毒VP1/VP2区引物采用套式PCR法分别检测16批凝血因子Ⅷ成品及10批混合原料血浆中B19病毒的污染情况,并对阳性样品中B19病毒DNA的NS1-VP1u区进行测序和基因型分析.结果 16批凝血因子Ⅷ中B19病毒DNA阳性率为75%(12/16),10批混合原料血浆中B19病毒DNA阳性率为100%(10/10).序列测定结果表明,所有B19阳性样品中的病毒序列高度保守,同源性为98.3%-100%,且均为基因型I型.结论 我国凝血因子Ⅷ及原料血浆中B19病毒Ⅰ型污染率高,病毒核苷酸具有较高的保守性.     

2022年某国产儿童四价流感病毒裂解疫苗质量检测分析

目的 回顾评估某国产儿童四价流感病毒裂解疫苗关键质量指标，分析疫苗的有效性、安全性和批间一致性。方法以某国产公司生产的14批儿童四价流感病毒裂解疫苗为研究样品，检测样品血凝素含量、总蛋白含量、总蛋白/血凝素比值、卵清蛋白含量、细菌内毒素含量、游离甲醛含量，和企业注册标准、中国药典标准及WHO标准比较，同时计算标准差（s），评价产品质量。结果 14批儿童四价流感病毒裂解疫苗血凝素含量为31.9～35.9μg/m L(s 0.6～1.2)、总蛋白含量223.4～256.0μg/mL(s 9.0)、总蛋白/血凝素比值1.7～1.8(s 0.06)、卵清蛋白含量0.84～2.32 ng/mL(s 0.47)、细菌内毒素含量0.03～0.04 EU/mL(s 0.004)、游离甲醛含量2.05～2.70μg/mL(s 0.23)，检测符合标准要求。结论 该国产儿童四价流感病毒裂解疫苗14批产品检测结果均符合企业注册标准、中国药典标准及WHO标准，批间一致性好，产品具有良好的安全性和有效性。