适合干细胞移植的小鼠放射性肝损伤模型的构建

随着骨髓移植术前辐射预处理、光子刀立体定向、三维适形、组织间插植内照射等放疗技术在肝脏及腹部肿瘤中的应用,肝脏易受到大剂量的照射而引发放射性肝损伤.     

影响肝外伤手术死亡的危险因素分析

目的分析影响肝外伤手术死亡的危险因素,探讨其临床意义。方法根据AAST和ISS标准,回顾性分析90例肝外伤手术病例,对影响手术死亡的危险因素进行单因素比较和Logistic回归分析。结果死亡15例,其中Ⅲ级2例、Ⅳ级4例、Ⅴ级9例,总体手术死亡率17%。Ⅳ~Ⅴ级肝外伤手术方式的单因素比较提示:清创性肝切除术的相对危险度是0.73;而规则性肝切除术、肝静脉或肝后下腔静脉修补术相对危险度分别是1.32、1.52。Logistic回归分析提示:ISS分会和术中失血量是影响手术死亡率的2个独立因素。结论ISS分值、术中失出血量和手术方式是影响肝外伤手术死亡的3个重要因素,娴熟的手术技能和合理的手术方式可以减少术中出血量和降低手术死亡率。     

TPO+HGF+IL-3方案对人骨髓源性肝干细胞各亚群体外扩增的促进作用

目的体外观察血小板生成素(TPO)+促肝细胞生长素(HGF)+白细胞介素-3(IL-3)方案对人骨髓源性肝干细胞(BMDLSC)各亚型的增长促进作用。方法实验组为添加有TPO 50 ng/mL、HGF 40μg/mL、IL-3 10 ng/mL的高糖DMEM培养基体系,对照组则不含TPO+HGF+IL-3,分别在第1、7、14天,计算细胞总数,并采用流式细胞技术分别测算表达CD90、CD105、CD117、CD184、CD326的人BMDLSC各亚群的数量变化。结果实验组表达CD90、CD105、CD117、CD184、CD326的人BMDLSC各亚群的扩增倍数在第7天分别为(4.94±0.07)、(4.89±0.06)、(6.70±1.75)、(5.72±0.32)、(5.03±0.05)倍,第14天数量增长倍数为(7.60±0.11)、(7.76±0.16)、(11.70±3.06)、(21.38±1.13)、(8.12±0.13)。结论此方案对人BMDLSC各亚型的体外扩增有明显的促进效果,其中以CD184亚群的扩增效果最为明显。     

免疫磁珠分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-

目的:利用免疫磁性细胞分选系统分离纯化骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit lin-。方法:实验于2006-07/08在南方医科大学实验动物中心完成。6～8周龄的SPF级纯系BALB/C雄性小鼠10只,体质量18～20g。收集小鼠股骨骨髓细胞,利用免疫磁性细胞分选系统,通过两步法分选纯化c-Kit lin-:将获取的lin-细胞悬液8℃条件下1500r/min离心10min,弃上清,按80μL/107加入Buffer重悬细胞。按20μL/107加生物素抗体磁珠,混匀,4℃冰箱孵育15min,按1mL/107加入Buffer洗细胞1次,8℃条件下1500r/min离心10min,弃上清,按500μL/108加入Buffer重悬细胞。Buffer500μL润MS柱,悬液过柱后,Buffer500μL/次洗柱3次,柱子脱离磁场,加1mLBuffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit lin-细胞,收集到c-kit lin-细胞,细胞计数。取2.0×106个细胞分成10等份,流式细胞仪分析c-Kit lin-细胞纯度,计算回收率,评估纯化效率,苔盼兰染色检测纯化前后的细胞活力。计算活细胞的百分率。细胞纯度和细胞回收率的计算:细胞纯度=分离产物中的阳性细胞数/分离细胞的总细胞数×100%,细胞回收率=分离产物中的阳性细胞数/起始标本阳性细胞总数×100%。结果:10只小鼠均进入结果分析。利用免疫磁性细胞分选系统分选出的骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit lin-细胞纯度和回收率分别为(77.98±2.34)%,75.40%,纯化前后细胞活力不受影响。结论:免疫磁性细胞分选系统能有效分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit lin-,纯度和回收率高,且不影响细胞活力。     

免疫磁珠分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit~+lin~-

目的：利用免疫磁性细胞分选系统分离纯化骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit^＋lin^-。方法：实验于2006—07／08在南方医科大学实验动物中心完成。6～8周龄的SPF级纯系BALB，C雄性小鼠10只，体质量18～20g。收集小鼠股骨骨髓细胞，利用免疫磁性细胞分选系统，通过两步法分选纯化c-Kit^＋lin^-：将获取的lin^-细胞悬液8℃条件下1500r/min离心10min，弃上清，按80μL/10^7加入Buffer重悬细胞。按20μL/10^7加生物素抗体磁珠，混匀，4℃冰箱孵育15min，按1 mL/10^7加入Buffer洗细胞1次，8℃条件下1500r/min离心10min，弃上清，按500μL/10^8加入Buffer重悬细胞。Buffer 500μL润MS柱，悬液过柱后，Buffer 500μL/次洗柱3次，柱子脱离磁场，加1mL Buffer，用配套柱塞推出柱中的c-Kit^＋lin^-细胞，收集到c-kit^＋lin-细胞，细胞计数。取2．0x108个细胞分成10等份，流式细胞仪分析c-Kit^＋lin^-细胞纯度，计算回收率，评估纯化效率，苔盼兰染色检测纯化前后的细胞活力。计算活细胞的百分率。细胞纯度和细胞回收率的计算：细胞纯度：分离产物中的阳性细胞数，分离细胞的总细胞数×100％，细胞回收率：分离产物中的阳性细胞数，起始标本阳性细胞总数×100％。结果：10只小鼠均进入结果分析。利用免疫磁性细胞分选系统分选出的骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit^＋lin^-细胞纯度和回收率分别为（77．98±2．34）％，75．40％，纯化前后细胞活力不受影响。结论：免疫磁性细胞分选系统能有效分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit^＋lin^-，纯度和回收率高，且不影响细胞活力.     

善得定预防腹部多器官联合移植术后移植胰胰腺炎

1996年6月我们成功地完成一例临床腹部多器官联合移植(AMVT),在治疗过程中采用善得定预防移植胰胰腺炎,效果良好。现报告如下。 临床资料 1.一般资料:患者男性,38岁。1991年12月在我科行肝右后叶肝癌切除术,病理诊断为低分化型肝细胞癌。1996年5月因肝区疼痛、消瘦再次人院,经B超、CT、骨扫描等全身检查发现肝癌术后复发并占据全肝,门静脉主干和右支有癌栓,胰头后、下腔静脉旁有肿大之淋巴结,但未发现腹腔以外的远隔转移。术前肝功能Child B级,其他脏器功能和代谢状态正常。 2.手术和治疗:用气管内插管全麻复合硬膜外阻滞麻     

小鼠骨髓源性肝干细胞筛选及其分化潜能的研究

目的从骨髓细胞中筛选肝干细胞。方法供体为纯系BALB／C雄性小鼠，从其骨髓细胞中分离CD34^＋Lin^-、CD90^＋Lin^-、CD117^＋Lin^-、Sca-1^＋Lin^-细胞。受体为35Gy全肝照射预处理的同龄同系BALB／C雌性小鼠，A、B、C、D组分别为CD34^＋Lin、CD90^＋Lin^-、CD117^＋Lin^-、Sca-1^＋Lin^-细胞移植。术后30d活杀小鼠，取肝作小鼠Y染色体性别决定基因Sry的原位分子杂交和白蛋白的免疫组化染色，镜下观察并记录双阳性细胞数量。结果A、B、C、D组小鼠肝组织中均检测到双阳性细胞，其中C组的双阳性细胞数量显著多于其它各组。结论CD34^＋Lin^-、CD90^＋Lin^-、CD117^＋Lin^-、Sca-1^＋Lin^-细胞都含有骨髓源性肝干细胞、都有分化形成肝细胞的潜能，但CD117^＋Lin^-细胞分化形成肝细胞潜能最大。     

巨大肝癌并肝硬化患者的围手术期处理

74例巨大肝癌合并肝硬化患者实施半肝或肝左三叶切除,围手术期处理包括①纠正贫血和低蛋白血症及低氧血症,纠正水与电解质平衡失调;②手术前后肠外营养支持;③术前按结肠手术的要求准备肠道;④术中不阻断肝门血流;⑤术后适当限制水盐摄入量及利尿治疗。结果:71例半肝切除患者中,术前肝功A级58例,B级13例,术后1～2周评定肝功A级22例,B级30例,C级12例(其中1例于术后17天死于消化道出血);术后3～4周评定肝功A级43例,B级23例,C级4例,3例肝左三叶切除的术前肝功均为A级,但3例均于术后1个月内死于肝衰竭。表明在充分的围手术期处理下,绝大多数肝功能处于代偿期的肝癌合并肝硬化患者可以安全耐受半肝切除术,但不能耐受肝三叶切除手术。     

肝内胆管结石的外科治疗

肝内胆管结石在我国属常见病 ,病因至今仍未阐明。在治疗方面 ,现有治疗方法的疗效均不够理想 ,手术治疗后的结石残留率在 30 %以上 ,再次手术率也高达 37%。本文结合作者在这方面的诊治体会 ,对肝内胆管结石在治疗过程中的几个问题进行讨论。1　术前诊断的目标与方法目前 ,作出肝内胆管结石的诊断已无困难 ,但这样的诊断远远不能满足对肝内胆管结石进行治疗的要求。从治疗的角度来考虑 ,术前诊断至少应达到如下几个目标 :1明确结石在肝内的分布情况 ,确定结石是在肝脏的哪一叶、哪一段、哪一级胆管。 2明确肝内胆管病变情况 ,尤其要确定有…