132例胆道闭锁Kasai术后患儿生存率及影响因素分析

目的：探讨影响胆道闭锁（biliary atresia,BA）患儿Kasai术后生存率的因素,为临床治疗方案选择及预后判断提供依据。方法：2007年1月至2014年1月间胆道闭锁行肝门空肠吻合术（Kasai术）且资料完整的患儿共132例,随访至2015年1月。所有数据录入SPSS19.0进行统计分析,运用寿命表法计算生存率,分别采用Kaplan-Meier法及COX比例风险回归模型对132例患者的手术时年龄、巨细胞病毒感染、术中病检肝硬化程度、术后是否应用激素与生存率间关系进行单因素和多因素综合分析。结果：132例患儿存活35例,死亡97例;存活患儿中位随访时间为53.3（12~86.17）个月。BA患儿Kasai 术后1年预计生存率为（32.0±6.0）%,2年及5年预计生存率分别为（26.0±4.0）%及（24.0±4.0）%;术后未应用激素组存活率为18.7%（17/91）,应用激素组存活率为43.9%（18/41）;肝硬化组存活率为18.9%（14/74）,非肝硬化组存活率为36.2%（21/58）,经Log-rank检验,术后应用激素及非肝硬化为影响患儿长期生存的重要因素（P=0.027,P=0.037）;经COX回归分析发现,术后激素应用是影响患儿生存率的重要独立因素（RR=0.602,95%CI=0.377~0.964,P=0.034）。结论：Kasai术为提高胆道闭锁患儿生存率的有效治疗方式。术后合理应用激素治疗可能是提高术后生存率的重要措施之一。     

基因芯片分析Wnt刺激后小鼠多潜能分化干细胞C3H10T1/2的差异基因表达

目的 探讨Wnt信号传导系统对诱导干细胞向神经系统分化的基因表达的影响.方法 采用最新的含有22000多个已知基因及EST克隆的小鼠基因芯片U74Av2,检测了Wnt刺激后的小鼠多潜能分化干细胞C3H10T1/2中目标基因表达的变化,并进行实时定量PCR,验证了基因芯片结果.结果 Wnt刺激后小鼠多潜能分化干细胞C3H10T1/2中Wnt信号传导系统各主要组成基因表达有不同程度增加;对干细胞向神经系统发育有潜在调节作用的基因表达也有增加或减少.结论 表达谱芯片分析成功筛选出wnt刺激引起表达改变且可能与神经发生有关的基因.     

β-catenin过表达对骨肉瘤细胞TE85迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 探讨β-catenin对骨肉瘤细胞TTE85迁移、侵袭及凋亡的影响.方法 RT-PCR及Western blot检测β-catenin在不同骨肉瘤细胞中的表达情况,重组腺病毒Adβ-catenin感染TE85细胞,RT-PCR及荧光素酶报告基因检测感染Adβ-catenin后β-catenin mRNA的表达及活性,划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力,DAPI染色和流式细胞技术检测细胞凋亡情况.结果 TE85细胞内源性β-catenin表达相对较低(P＜0.05),Adβ-catenin能显著增加TE85细胞外源性β-catenin基因表达及活性,β-catenin组细胞迁移能力明显减慢(P＜0.05),β-catenin组侵袭能力明显低于对照组(P＜0.05).结论 β-catenin能抑制肿瘤细胞TE85的迁移及侵袭能力,对凋亡无影响.     

肝母细胞瘤患儿及其母亲孕期特点回顾性分析

目的 探讨肝母细胞瘤发生的危险因素,包括婴儿出生以及孕产妇分娩相关的特征.方法 采用病例-对照研究设计,收集肝母细胞瘤患儿及其母亲的病历资料,用Logistic回归模型对婴儿特征指标、母亲怀孕与分娩有关指标进行多因素统计检验. 结果发生肝母细胞瘤风险中低出生体质量儿的比值比为26.0(95%可信区间为14.0～65.7).母亲≤20岁和≥30岁的比值比分别为1.5(95%可信区间为0.6～4.6)和2.6(95%可信区间为1.0～6.7).超重和肥胖母亲的比值比为3.2(95%可信区间为1.0～6.7).孕妇吸烟的比值比为2.9(95%可信区间为1.1～4.2),对>2岁及H{生体质量正常儿童影响较大. 结论肝母细胞瘤的发生与患儿出生体质量及孕妇超重、吸烟等因素有关,应重视围产期卫生保健.     

结缔组织生长因子对胰腺癌细胞增殖和转移的影响

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和转移的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组化方法,分别检测胰腺癌细胞株PANC-1和50例胰腺癌组织中CTGF的表达.采用重组腺病毒介导的CTGF转染PANC-1细胞使CTGF高表达,以RNA干扰方法使CTGF表达缺失,分别通过四甲基偶氮唑蓝(MMT)法、划痕实验、体外侵袭实验观察PANC-1细胞增殖和转移能力的变化.结果 实时定量PCR和免疫组化检测均显示,CTGF在PANC-1细胞及胰腺癌组织中高表达.CTGF转染后,CTGF转染组PANC-1细胞比空载体对照组增殖能力和修补划痕能力明显增强,200倍显微镜视野下的穿膜细胞数为34个,比空载体对照组(11个)明显增多.干扰CTGF后,siCTGF转染组细胞比空载体对照组增殖能力和修补划痕能力明显降低,200倍显微镜视野下的穿膜细胞数为6个,比空载体对照组(15个)明显减少.结论 CTGF在胰腺癌中高表达,其表达的高低对胰腺癌细胞的增殖和转移有显著影响.     

多药耐药基因转染脐血单个核细胞及其表达与功能的体外研究

目的：为克服白血病化疗中的骨髓抑制，采用含人多药耐药（MDR1）基因全长cDNA逆转录病毒载体转染入脐血单个核细胞，探索一种MDR1基因导入脐血造血细胞稳定、有效的方法，评价MDR1基因转染脐血细胞及其功能的表达，为体内转染MDR1基因保护骨髓免受大剂量化疗药物损伤提供条件。方法：采用含有MDR1基因表达质粒pHaMDR1/A的包装细胞PA317传代培养产病毒法，通过浓缩病毒上清液将MDR1基因导入人脐血单个核细胞，应用聚合酶链反应（PCR）方法、免疫组化法、流式细胞学等方法从基因、蛋白质、功能及细胞生物学特性等不同水平检测MDR1基因在脐血单个核细胞的表达、转染率及其与转染时间的关系和功能的表达；转染行为是否影响脐血细胞生物学特性。结果：（1）建立了一种安全可行、稳定高效的MDR1基因体外转染脐血造血细胞的体系和方法；（2）PCR方法证实外源性MDR1基因可有效性地体外整合到脐血单个核细胞中；（3）免疫组化法测得2日、4日、6日转染率分别为18.0%、29.8％、34.7%;(4)柔红霉素排出试验证实导入的MDR1基因表达产物P-gp有正常的生物学功能；（5）转染后的脐血细胞周期生物学特异性无异常。结论：MDR1基因体外转染脐血造血细胞是安全可行的，且在体外有稳定、有效的表达。这一方法为进一步在化疗骨髓保护的体内实验提供了有利的依据。     

幼儿心脏死亡肝脏捐献一例

在供肝日益紧张的情况下,儿童心脏死亡器官捐献(DCD)可以成为供肝来源之一,但关于儿童DCD肝移植的报道较少.2011年11月,我院成功完成1例幼儿心脏死亡肝脏捐献,现报告如下.     

结缔组织生长因子的克隆及其真核表达载体的构建

目的结缔组织生长因子(CTGF)在肿瘤发生,胚胎发育、骨折愈合、细胞增殖和分化、血管形成等众多领域都有着重要的作用,对结缔组织生长因子进行克隆及构建其真核表达载体,对其在功能上的进一步研究及应用有积极意义.方法以含有鼠CTGF基因序列的EST克隆为模板,通过PCR的方法克隆出目的基因CTGF,再以分子克隆学的方法将CTGF克隆入真核表达载体pAdTrack-CMV,进一步以PCR、酶切、DNA测序的方法筛选出正确的真核表达质粒.并通过Western-Blotting的方法对质粒的表达功能进行研究.结果 PCR、酶切、DNA测序的方法均证实已经成功克隆获得序列正确的目的基因CTGF,并将CTGF克隆入真核表达载体pAdTrack-CMV.Western-Blotting的结果表明构建的表达CTGF的真核表达载体高表达CTGF蛋白质.结论成功克隆目的基因CTGF并构建其真核表达质粒,证实在蛋白质水平获得了表达.     

垂盆草苷对幼龄肝内胆汁淤积大鼠的作用机制

研究垂盆草苷(sarmentosin,SA)对幼龄肝内胆汁淤积大鼠的干预和调节作用。将48只SD幼龄大鼠随机分为正常组(Control)、α-萘异硫氰酸酯(ANIT)组(Model)、熊去氧胆酸(UDCA)阳性对照组、垂盆草苷低、中、高剂量组,每组8只,除正常组外,各组大鼠连续1周分别灌胃给予相应药物,每日1次。在第5 d灌胃给予80 mg/kg ANIT造模。在造模后48 h测定大鼠的胆汁流量;测定大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的活性和总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)的含量;检测肝脏组织病理变化和组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量;测定血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达;Western blot法分析胆汁酸转运蛋白与合成蛋白。与正常组相比,模型组胆汁流量受到明显的抑制;大鼠肝组织出现明显的病理损伤;血清中ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA水平显著升高;组织匀浆中MDA含量显著升高,SOD和GSH-Px含量显著降低;炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的表达升高(P<0.05,P<0.01);FXR、SHP-1、SHP-2、MREP2、BSEP、NTCP蛋白表达下降,CYP7A1、CYP27A1蛋白表达升高。与模型组相比,垂盆草苷各剂量组大鼠的胆汁流量呈现不同程度的增加;大鼠肝脏组织的病理损伤有所改善;血清中ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA水平降低;肝脏组织匀浆中MDA的含量降低,SOD、GSH-Px的含量升高(P<0.05,P<0.01);TNF-α、IFN-γ、IL-1β的表达降低(P<0.05,P<0.01);结果表明垂盆草苷对于胆汁淤积有一定的治疗效果,其中垂盆草苷高剂量的作用效果与UDCA组相当,同时垂盆草苷可上调FXR、SHP-1、SHP-2、MREP2、BSEP、NTCP蛋白表达,下调CYP7A1、CYP27A1蛋白表达,说明垂盆草苷通过调控相关蛋白发挥作用。垂盆草苷对ANIT所致的SD幼龄大鼠肝内胆汁淤积有明显的干预和调节作用。可能是通过参与胆汁酸的转运与合成发挥其治疗作用。     

肝母细胞瘤患儿及其母亲孕期特点回顾性分析

目的 探讨肝母细胞瘤发生的危险因素,包括婴儿出生以及孕产妇分娩相关的特征.方法 采用病例-对照研究设计,收集肝母细胞瘤患儿及其母亲的病历资料,用Logistic回归模型对婴儿特征指标、母亲怀孕与分娩有关指标进行多因素统计检验. 结果发生肝母细胞瘤风险中低出生体质量儿的比值比为26.0(95%可信区间为14.0～65.7).母亲≤20岁和≥30岁的比值比分别为1.5(95%可信区间为0.6～4.6)和2.6(95%可信区间为1.0～6.7).超重和肥胖母亲的比值比为3.2(95%可信区间为1.0～6.7).孕妇吸烟的比值比为2.9(95%可信区间为1.1～4.2),对>2岁及H{生体质量正常儿童影响较大. 结论肝母细胞瘤的发生与患儿出生体质量及孕妇超重、吸烟等因素有关,应重视围产期卫生保健.