烧伤脓毒症患者血清Wnt5a水平变化及其临床意义

目的 观察烧伤脓毒症患者血清Wnt5a水平变化.方法 采集烧伤脓毒症患者的血清标本,采用Western blotting法检测Wnt5a水平,并比较轻、中、重度脓毒症患者血清Wnt5a水平.同期选取轻度烧伤的非脓毒症患者8例作对照.结果 烧伤脓毒症患者血清Wnt5a水平高于对照者.动态观察发现,脓毒症痊愈后患者血清Wnt5a水平降低,而随着脓毒症病情恶化血清Wnt5a水平持续升高.结论 Wnt5a参与了烧伤患者炎症的发病过程,且检测Wnt5a水平可作为炎症严重程度的诊断指标.     

腓肠神经营养动脉逆行皮瓣修复小腿远端残余创面

【目的】报道应用腓肠神经营养动脉皮瓣逆行修复小腿远端残余创面的临床效果。【方法】在应用解剖基础上,设计带筋膜蒂的腓肠神经营养动脉皮瓣,逆行应用修复下肢远端残余创面,其中最小皮瓣6 cm×8 cm,最大皮瓣13 cm×16 cm。【结果】临床应用8例修复下肢远端残余创面,全部成活。【结论】本手术成功率高,损伤小,操作简单,对小腿远端的残余创面修复不失为一项可供选用的较理想方法。     

烧伤血清诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α的规律

目的：探讨烧伤血清诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7细胞分泌TNF-α的规律及其在脓毒症中的作用。方法：烧伤血清的剂量效应组分别用含有0．5,1．0,1．5,2．0,2．5ml烧伤血清的培养基与小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7共培养6h,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量。采用流式细胞技术观察细胞的凋亡。烧伤血清的时间效应组以含有2．5ml烧伤血清的培养基,对照组以不含烧伤血清的培养基,另外以含有2．5ml烧伤血清和100mg／L LPS的混合组的培养基分别培养RAW264．7细胞0,2,4,6,8,10,12,24h,同上留取离心后的培养液上清,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量。结果：将烧伤血清加入到小鼠单核巨噬细胞RAW264．7培养液中能明显刺激TNF-α的分泌。在0．5ml～2．5ml范围内,烧伤血清诱导RAW264．7细胞的TNF-α分泌增加,呈显著的剂量依赖性关系,2．5ml烧伤血清能明显诱导RAW264．7细胞的凋亡;烧伤血清组和烧伤血清与LPS的混合组RAW264．7细胞的TNF-α分泌在0～24h间呈双相性规律。结论：烧伤血清能诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7的TNF-α分泌与凋亡,初步证实烧伤血清在脓毒症的发生、发展中发挥重要作用。     

转染TGF-β1的骨髓间充质干细胞移植对预构皮瓣存活影响的实验研究

目的:探讨TGF-β1转染骨髓间充质干细胞(MSC)移植对预构皮瓣存活的影响及机制。方法:分离并培养大鼠MSC,采用脂质体介导技术将真核表达载体pc DNA3.1(+)/TGF-β1转染至MSC,对转染后MSC的表型及体外成管进行鉴定;选取12只SD大鼠,于其背部两侧对称建立5 cm×1 cm随意皮瓣模型,于两侧皮瓣下分别注射转染后的MSC(实验侧)与溶媒(对照侧),观察皮瓣存活情况计算皮瓣存活率,免疫组化染色及HE染色检测皮瓣血管密度。结果:流式细胞仪分析表明,转染TGF-β1后MSC仍具有MSC的特性,且具有良好的体外成管功能。注射转染TGF-β1的MSC的实验侧皮瓣存活率明显高于对照侧(82.83%vs.61.33%,P0.05),同时皮瓣内毛细血管的密度明显也明显高于对照侧(19.69个vs.8.19个,P0.05)。结论:转染TGF-β1的MSC可以促进皮瓣内毛细血管生成,提高皮瓣的存活率。     

扩大切取范围的腓肠肌肌皮瓣的临床应用

目的探讨扩大切取范围的腓肠肌肌皮瓣存活的解剖基础及其临床应用。方法进行腓肠肌肌皮瓣的显微解剖研究,设计扩大切取范围的腓肠肌肌皮瓣,分析总结2003年～2005年我们改良腓肠肌肌皮瓣的切取范围后所行的35例腓肠肌内侧头肌皮瓣、17例腓肠肌外侧头肌皮瓣的切取范围及临床效果,验证改良切取范围的腓肠肌肌皮瓣的安全性及实用性。结果52例皮瓣成活良好,35例腓肠肌内侧头肌皮瓣中1例远端坏死,再行内踝上皮瓣修复;2例远端浅表坏死,其中1例再植皮修复,1例换药愈合;1例植皮失败后重新植皮成活。17例腓肠肌外侧头肌皮瓣中2例远端浅表坏死,其中1例再植皮修复,1例换药愈合。结论扩大切取范围的腓肠肌肌皮瓣的血运基础是包括腓肠动脉在内的多源性血供;腓肠肌肌皮瓣的改良扩大了皮瓣的切取范围,增加了皮瓣的切取面积,其适应证也相应扩大;改良的腓肠肌肌皮瓣血供可靠,成功率高,手术相对简便易行。     

Let-7b对人黑色素瘤细胞增殖及有氧糖酵解的影响

目的研究let-7b对人黑色素瘤细胞增殖及有氧糖酵解的影响。方法将人工合成的microRNA单核苷酸let-7bmimics及inhibitor通过脂质体转染人黑色素瘤细胞株A375,上调或抑制let-7b在细胞内的表达水平,不同时相点检测细胞葡萄糖消耗和乳酸产量,MTT法检测细胞增殖。运用单因素方差分析探讨let-7b表达水平与黑色素瘤细胞有氧糖酵解及增殖的关系。结果let-7bmimics组24、48h时相点检测MTr吸光度值分别为0．396±0．030、0．525±0．037,低于其他组（P〈0．05）,提示高表达let-7b抑制细胞增殖;各组黑色素瘤细胞24、48h葡萄糖消耗及乳酸产量差异无统计学意义（P〉0．05）,乳酸产量与葡萄糖消耗比值各组间差异无统计学意义（P〉0．05）,其中空白组在24h和48h内葡萄糖转化为乳酸效率约为57％和43％。结论黑色素瘤A375细胞具有显著的有氧糖酵解表型,过表达let-7b可抑制人恶性黑色素瘤细胞A375增殖,但对于细胞的有氧糖酵解效率,尚未发现let-7b对其有显著影响。     

HSF-1 抑制HMGB1 所致炎症反应的作用及机制

目的：探讨热休克转录因子1（HSF-1）抑制高迁移率族蛋白1（HMGB1）引起炎症反应的作用及机制。 方法：RAW264.7细胞分别转染含HSF-1的质粒（HSF-1过表达组）和空白质粒（阴性对照组）后,以无处理的RAW264.7细胞作为空白对照组,用Western blot法检测各组细胞HSF-1蛋白的表达;将以上3组细胞分别用HMGB1（1 μg/mL）刺激后,用ELISA法测定TNF-α水平、Western blot法检测丝裂原活化蛋白激酶家族（MAPK）通路和NF-κB通路相关蛋白的表达、非放射性凝胶阻滞（EMSA）检测NF-κB与DNA结合活性。 结果：Western blot结果显示,HSF-1过表达组HSF-1蛋白表达量较阴性对照组与空白对照组明显升高（均P<0.05）,而后两组间HSF-1蛋白表达量无统计学差异（P>0.05）;HMGB1作用4 h,HSF-1过表达组TNF-α水平较阴性对照组与空白对照组明显降低（均P<0.05）,而后两组间无统计学差异（P>0.05）;HMGB1作用不同时间后,各组细胞MAPK通路相关蛋白p-ERK、p-JNK、p-p38以及NF-κB通路相关蛋白p-IKα-B的表达均无统计学差异（均P>0.05）;EMSA结果显示,HMGB1作用1 h后,HSF-1过表达组NF-κB灰度值明显低于阴性对照组与空白对照组（均P<0.05）,而后两组间无统计学差异（P>0.05）。 结论：HSF-1过表达可以减少HMGB1引起的TNF-α表达,其分子机制与MAPK通路的活化无关,但与NF-κB和DNA的结合能力有关。     

PBL教学法在医学七年制临床MEBT/MEBO教学中的应用

烧伤湿性医疗技术(MEBT/MEBO)现已形成了较为系统的皮肤原位再生学术体系,由于PBL教学法强调培养学生分析问题和解决问题的能力,强调基础学科与临床医学的密切联系,通过尝试在七年制医学生外科学临床教学中引入PBL(Problem-based learning teaching method)教学法,以期达到提高学生的临床综合分析能力和临床操作技能之目的.作者从MEBT/MEBO教学目标、问题的设计及小组讨论方案各方面提出了具体需要解决的问题,对PBL应用于MEBT/MEBO教学就必要性、优越性、缺陷性及存在的问题等方面进行思考和分析,并提出了其发展展望.     

热休克因子1对白细胞介素-10的转录调控作用及其机制

目的 探讨热休克因子1(HSFl)对白细胞介素(IL)-10的转录调控作用及其机制.方法 合成IL-10基因启动子区含热休克元件(HSE)位点的寡核苷酸探针进行凝胶电泳迁移率实验(EMSA),分析HSF1与IL-10基因启动子区的HSE的结合情况,并构建IL-10基因启动子的萤光素酶报告基因质粒,与HSF1表达质粒共转染RAW264.7细胞,检测萤光素酶活性,观察HSF1转染对启动子活性的影响.结果 生物素标记的HSFl结合片段(-376～- 369 bp)和核蛋白提取物孵育后能观察到阻滞带,阻滞现象能够被自身非标记探针竞争,但不被非标记的突变探针竞争,加入HSFl单克隆抗体,可以观测到超阻滞带,表明HSF1可以特异性结合于"HSFI识别序列",HSE核心结合位点突变后,相对萤光素酶活性突变体(34.23±2.14)相对野生型(110.09±5.48)下降3.2倍(P<0.01),通过EMSA证实了IL-10启动子区域(-688～+64 bp)存在HSF1的结合位点HSE(-376～-369 bp);突变体双萤光素酶活性分析发现HSF1的结合位点核心碱基的突变,其转录活性下降.结论 HSF1可以特异性结合于IL-10启动子区HSE(-376～-369 bp),相对萤光素酶活性分析提示HSF1可以转录激活IL-10,上调其表达.     

热休克因子1基因转染对烧伤血清刺激的巨噬细胞炎性介质表达的影响

目的了解外源性热休克因子1（HSF1）对烧伤血清刺激的巨噬细胞中相关炎性介质基因表达的影响。方法制备严重烧伤和正常大鼠血清；构建pcDNA3．1／HSF1重组载体。将培养的RAW264．7巨噬细胞株转染（具体分为：未转染、转染空载体、转染重组载体）后再分别使用前述2种血清刺激。另取部分未行血清刺激的转染重组载体的巨噬细胞，用蛋白质印迹法检测其HSF1蛋白表达水平；反转录-PCR法检测经血清刺激的细胞中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和白细胞介素10（IL-10）基因表达水平。结果已转染重组载体的细胞株较稳定，检出有HSF1部分活化。反转录-PCR检测到，未转染的正常血清刺激的巨噬细胞中TNF—α、HMGB1、IL-10的基因仅有少量表达，而烧伤血清刺激能明显上调其基因表达（分别为0．910±0．100、0．860±0．020、0．430±0．010）；与转染空载体＋烧伤血清组（上述3项指标分别为0．800±0．050、0．880±0．030、0．420±0．010）比较，转染重组载体＋烧伤血清组可明显抑制巨噬细胞中TNF—α和HMGB1的基因表达并上调IL-10的基因表达（分别为0．130±0．100、0．450±0．020、0．450±0．020）。结论严重烧伤后给予HSF1可以抑制巨噬细胞产生的某些促炎介质的表达，适当上调某些抗炎介质的表达，对机体发挥保护作用。