骨髓腔内输注人造血干／祖细胞促进NOD-SCID小鼠体内造血功能的恢复

本研究比较经骨髓腔内输注（intra—bone marrow infusion,iBMI）及静脉输注（intravenous infusion,iVI）人脐血（cord blood,CB）造血千／祖细胞（HS／PC）对NOD～SCID受鼠体内造血重建的影响。将纯化的CB CD34^＋细胞移植到受亚致死剂量照射的NOD—SCID受鼠体内。受鼠随机分为3组：①iBMI组：骨髓腔内输注CD34^＋细胞5×10^5／只;②iVl组：尾静脉输注CD34^＋细胞5×10^5／只;③阴性对照组：输注PBS缓冲液。于异种移植后第3、5及第8周通过流式细胞术、聚合酶链式反应、免疫组织化学及造血祖细胞集落分析的方法比较人造血系统各系细胞植入率,通过二次移植实验比较NOD—SCID受鼠体内人HS／PC长期造血重建能力。结果表明：移植后第8周,iB—MI组受鼠骨髓、外周血及脾脏中人CD45^＋细胞比例均显著高于iVI组（P〈0．05）;iBMI组及iVI组移植的HS／PC均具有多向分化能力;移植后第8周,iBMI组受鼠骨髓中CD45^＋CD19^＋细胞、CD45^＋CD33^＋细胞、CD45^＋CD56^＋细胞及CD45^＋CD34^＋细胞比例均显著高于iVI组（P〈0．05）,CD45^＋CD14^＋细胞及CD45^＋CD41a^＋细胞比例亦高于iVI组（P〉0．05）。iVI组及iBMI组长期存活受鼠的肝脏、脾脏、肺脏、外周血、骨髓细胞中均可检测到人17号染色体α-卫星特异性片段。应用免疫组织化学法在移植后第8周的iBMI组受鼠的脾脏、肝脏和肺脏中均可检出人CD45抗原的表达.iBMI组受鼠的骨髓细胞各系集落总数于移植后第8周显著高于iVI组（P〈0．05）。二次移植后第6周,iVI组及iBMI组受鼠的各组织脏器中均可检出人17号染色体α-卫星特异性片段的表达。结论：与iVI相比,经iBMI移植人CBCD34^＋细胞至NOD—SCID受鼠可以促进HS／PC的造血重建及多向分化,提高植入率。     

基于LASSO回归筛选影响肺腺癌患者预后的糖酵解相关基因

  目的  确定用于评估肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）患者糖酵解相关基因的风险评分模型。  方法  使用公共数据库癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）中LUAD患者转录组数据,通过基因富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）、差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）分析和最小绝对收缩选择算子（least absolute shrinkage and selection operator,LASSO）回归分析构建风险预测模型。通过Kaplan-Meier分析、受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线、单因素及多因素Cox回归分析验证模型预测性能。使用CIBERSORT算法计算高、低风险两组免疫细胞浸润差异。构建用于临床预测患者预后的列线图。  结果  识别出3个糖酵解相关基因集,筛选出6个糖酵解相关基因构建风险评分模型。高风险组总生存率显著低于低风险组,验证性结果显示该模型有良好的预测性能。高、低风险两组的免疫细胞浸润情况存在显著差异。列线图的构建开发了一种可以预测LUAD患者生存率的定量方法。  结论  基于糖酵解相关基因构建的风险评分模型为早期LUAD患者预测预后提供了新型生物标志物。      

低体质量指数与老年危重患者术后并发症风险的相关性分析

目的评估老年患者术前体质量指数(BMI)与术后并发症发生风险的关系。方法本研究为对前期多中心随机对照研究中安慰剂组患者资料的二次分析。共纳入350例非心脏手术后入重症监护室(ICU)的老年患者(≥65岁)。主要终点是术后并发症发生情况。采用logistic回归模型分析术前BMI分级与术后并发症风险的关系。结果 350例患者中有35.1%(123例)发生术后并发症。logistic多因素回归分析显示,与正常体质量(BMI 18.5~23.9 kg/m~2)患者相比,体质量过低(BMI18.5 kg/m2)伴随术后并发症风险增加(OR=2.210,95%CI 1.069~4.570,P=0.032);而超重和肥胖(BMI≥24.0 kg/m2)对术后并发症风险无明显影响(OR=0.820,95%CI 0.497~1.354,P=0.438)。结论对于在全身麻醉下非心脏手术后入ICU的老年患者,体质量过低伴随术后并发症风险增加。     

肿瘤相关抗原MART-1蛋白原核表达载体的构建、表达纯化和活性鉴定

目的构建编码肿瘤相关抗原MART-1融合基因的原核表达载体,在大肠埃希菌中表达His-MART-1融合蛋白,并对蛋白进行纯化和免疫原性鉴定。方法采用PCR法扩增编码MART-1的基因片段,将该基因片段克隆到含有His标签的pET-28b原核表达载体上,重组质粒经双酶切、PCR及测序鉴定正确后转化大肠埃希菌,IPTG诱导融合蛋白表达,用镍离子亲和层析法纯化融合蛋白并进行脱盐,SDS-PAGE电泳和Western blotting法鉴定。通过ELISA法检测经树突状细胞提呈后的His-MART-1融合蛋白对特异性CD4+T细胞的刺激作用。结果重组质粒经双酶切、PCR和测序鉴定证明载体构建成功。His-MART-1融合蛋白经表达纯化后,分子量约13kD,与预期值相符。Western blotting证实该融合蛋白可与抗His单克隆抗体发生特异性结合。His-MART-1融合蛋白经树突状细胞提呈后能刺激MART-1特异性CD4+T细胞分泌IFN-γ。结论成功构建了编码MART-1基因原核表达载体pET-28b-MART-1,表达及纯化获得该融合蛋白,并证实其具有良好的免疫原性。     

造血干/祖细胞归巢的生物学特征

造血干/祖细胞(HS/PC)归巢为多种黏附分子、趋化因子及其受体和基质蛋白裂解酶介导的HS/PC与血管内皮细胞/基质细胞间相互作用的多步骤过程.本文就HS/PC归巢过程的生物学特征.以及促进HS/PC归巢潜能的可行性临床策略作一综述.     

肺癌相关异常脂代谢的研究进展

在对肺癌发生、发展及治疗的研究中发现，其脂代谢与上述过程均有密切关系。分析脂代谢与肺癌的关系，可能有助于准确诊断肺癌、预测疗效及评估预后，并开发基于肿瘤脂代谢的治疗药物。对肺癌患者的血脂表现特点、与疗效的关系及可能影响脂代谢的药物进行了综述，以期为临床工作提供参考。     

SM-PCR技术检测血浆ctDNA在晚期肺腺癌患者治疗中的应用

  目的  探讨单分子PCR（single molecule-PCR，SM-PCR）技术检测血浆ctDNA在晚期肺腺癌患者治疗中的应用。  方法  分析2017年6月至2018年5月就诊于天津医科大学肿瘤医院的晚期肺腺癌患者30例，使用SM-PCR技术富集血液样本目标基因（EGFR、KRAS、BRAF、ALK、HER2、TP53）区域的ctDNA片段，构建测序文库，进行高通量测序；使用基于扩增阻滞突变系统（amplication refractory mutation system，ARMS）实时荧光PCR法进行肿瘤组织样本EGFR检测，比较血浆与组织表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）突变检测结果的一致性。  结果  SM-PCR与ARMS-PCR两种方法检测结果一致性较好（Kappa= 0.867，P < 0.001）；McNemar检验亦提示检测结果差异无统计学意义（P=0.500）。  结论  SM-PCR技术可用于血浆EGFR突变检测，其目标检测位点更全面，且可同时检测多种突变，分析结果更为精细，可实现绝对定量。      

PAP动态监测血浆cfDNA在进展期非小细胞肺癌患者治疗中的应用

  目的  探讨焦磷酸化激活聚合反应（pyrophosphorolysis-activated polymerization,PAP）动态监测血浆cfDNA在进展期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者治疗中的应用。  方法  收集2016年3月至2017年6月就诊的进展期NSCLC患者85例,采用PAP核酸扩增实时荧光PCR法与扩增阻滞突变系统（amplication refractory mutation system, ARMS）实时荧光PCR法检测血浆cfDNA的EGFR突变状况,比较组织与血浆及PAP法与ARMS-PCR检测结果的一致性;对突变阳性的38例患者采用PAP动态监测血浆基因突变状况。  结果  血浆与组织突变检测结果差异无统计学意义（P=0.092）。PAP与ARMS-PCR突变检测结果差异亦无统计学意义（P=0.210）。血浆cfDNA EGFR基因突变的检出率,在疾病进展者中较未进展者中高（62.5% vs. 21.3%,P < 0.001）。  结论  PAP可用于血浆cfDNA突变检测及动态监测以提前获得疾病进展的信息。