利用PCR方法获得shRNA抑制内外源性基因的表达

目的探讨PCR法获得的shRNA对外源性基因和内源性基因表达的抑制效果。方法选择绿色荧光蛋白(GFP)和大鼠肾脏系膜细胞高丰度表达的纤维连接蛋白(FN)分别作为外源性和内源性基因的靶基因,设计特异性引物,利用PCR扩增获得shGFPRNA和shFNRNA。前者与pEGFP质粒共转染至293T细胞,48h后进行激光共聚焦检测细胞表达GFP阳性率;后者转染至大鼠系膜细胞(RMC)中,48h后提取总RNA逆转录成cDNA,经realtimeRTPCR检测FN的mRNA表达水平,提取细胞总蛋白进行Westernblot检测FN蛋白表达水平。结果PCR获得的shGFPRNA产物能有效抑制外源性基因GFP的表达,抑制效率可达70%±3.2%;shRNA转染组内源性基因FN的表达水平明显下降,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论PCR方法可快速简单、廉价地获得shRNA,对内源性或外源性基因进行特异性抑制。     

输精管结扎术并阴囊内巨大血肿1例

<正> 资料:李某,男,32岁,2002年3月28日在本站行输精管结扎术。手术顺利,受术者无不适,术后20min 查无出血,离站。7天后回站,自述受术当日晚感阴囊轻微胀痛,次日用炒砂热敷,后感胀痛加剧,未予以重视,继续活动。至4月4日感疼痛加剧,不能行走,来站诊治。查体:T36.5℃.BP18/13kPa;一般情况可,神志清,痛苦貌,心肺(-).肝脾未扪及。     

同种异体大鼠移植肺中转录因子T-bet和GATA结合蛋白3的定量表达

背景：急性排斥反应的发病机制主要是T细胞介导的免疫应答，Th1，Th2细胞及其分泌的细胞因子互相调节、交叉作用在其中起重要作用。研究表明，原始Th细胞向Th1或Th2细胞分化受转录因子T—bet和GATA结合蛋白3的表达所调控。 目的：在前期实验基础上，应用实时荧光定量聚合酶链反应法测定大鼠移植肺组织中转录因子T-bet和GATA结合蛋白3的mRNA表达，初步分析转录因子T-bet和GATA结合蛋白3在肺移植急性排斥反应中的作用及其意义。设计、时间及地点：单一样本观察的随机对照动物实验，于2003-08/2008-04在瑞士苏黎世大学医院胸外科实验室和深圳市人民医院临床研究中心完成。 材料：纳入LBNFI大鼠10只和Lewis大鼠30只，以建立大鼠左侧原位肺移植模型。方法：将大鼠按随机数字表法分为5组，以肺移植后3，5d作为观察急性排斥反应的时间点：①空白对照组（n=5）：取正常Lewis大鼠左肺组织。②冷缺血对照组（n=5）：冷低钾右旋糖酐液灌注后取Lewis大鼠右侧肺组织。③同系移植组（n=5）：Lewis-Lewis大鼠肺移植后5d，取移植左肺组织。④同种异体移植3d组（n=4）：LBNF1-Lewis大鼠肺移植后3d，取移植左肺组织。⑤同种异体移植5d组（n=6）：LBNF1-Lewis大鼠肺移植后5d，取移植左肺组织。 主要观察指标：应用实时荧光聚合酶链反应法，定量检测各组大鼠肺组织中转录因子T—bet和GATA结合蛋白3的表达。 结果：①T—bet在同种异体移植5d组中的表达有所增高，但与其他各组间差异均无显著性意义（P〉0．05）。②GATA结合蛋白3在同种异体移植5d组中的表达水平低于空白对照组、冷缺血对照组及同系移植组（P〈0．05）。③同种异体移植5d组中T-bet／GATA结合蛋白3比值高于其他各组（P〈0.05），其他各组间差异均无显著性意义（P〉0．05）。 结论：移植肺组织中GATA结合蛋白3比T-bet的改变更敏感．起主导作用；T—bet／GATA结合蛋白3比值可作为评价肺移植急性排斥反应的客观指标之一。     

硝苯地平与氨氯地平治疗原发性高血压的疗效对比

目的：观察并对比临床中硝苯地平以及氨氯地平治疗原发性高血压的临床效果。方法：我院近年来共收治原发性高血压患者100例,以随机平均分组的方式分为观察组与对照组,分别给予氨氯地平以及硝苯地平药物进行治疗,观察治疗效果。结果：采用氨氯地平治疗的观察组,总有效率为96.0%,采用硝苯地平治疗的对照组,总有效率为76.0%,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：临床中运用氨氯地平对原发性高血压实施治疗,效果较为显著,治疗过程安全可靠,值得推广。     

转录因子RORγt对小鼠急性肺损伤Thl7／Treg平衡的影响

目的：探讨转录因子维甲酸相关孤儿受体γt（RORγt）在急性肺损伤中对Thl7辅助细胞（Thl7）和T调节细胞（Treg）的比值Thl7／Treg平衡的影响。方法：选择40只雄性SPF级昆明小鼠，随机分为4组，静脉注射生理盐水组10只（对照组）、内毒素尾静脉注射2h后观察组10只（实验组1）、内毒素尾静脉注射6h后观察组10只（实验组2）、内毒素尾静脉注射12h后观察组10只（实验组3）。分析支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数及分类计数，取肺组织行病理学检查，采用流式细胞仪检测外周血Thl7和Treg细胞的比例并计算Thl7／Treg比值，ELISA法测定外周血白介素一17（IL一17）、白介素一23（IL一23）、干扰素一7（IFN-7）、ROR7t含量，RT—PCR法检测前述因子在肺组织中的表达。以及实时定量PCR法检测肺组织中ROR^γt的表达，分析ROR7t对TM7／Treg平衡的影响。结果：外周血标本中，实验组1、2、3Thl7细胞比例比对照组升高，差异具有统计学意义（P〈0．01）；Treg细胞比对照组降低，差异具有统计学意义（P〈0．05），Thl7／Treg比值上升。实验组1、2、3IL一17、II。一23及RORγt含量均高于对照组，IFN一7含量低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组2肺组织RORγt蛋白的表达明显高于实验组1、3和对照组，后两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：Thl7及ROR7t表达参与了急性肺损伤的发生发展，RORγt表达降低可使Thl7分化和增殖功能受抑，转录因子ROR7t的测定有可能作为反映急性肺损伤严重程度的指标。     

血管铸型技术检测组织工程多孔支架血管化的实验研究

目的　探索利用血管铸型技术观察组织工程多孔支架体内再血管化情况的可行性。　方法　将DegraPol多孔管状支架置入SD大鼠腹腔大网膜包埋1周,应用解剖学中的血管铸型技术,观察组织工程支架体内形成新生血管的情况。　结果　大网膜包埋后在DegraPol支架外部发现有较多的蓝色显影微细血管环绕,在微孔支架内部,蓝色显影穿透支架并沿支架内孔分布。　结论　血管铸型适合用于微血管检测,可作为组织工程人工器官再血管化检测的一种新方法。     

三七粉和多磺酸基粘多糖联合微波理疗预防内瘘并发症的疗效观察

目的观察三七粉和多磺酸基粘多糖联合微波理疗对预防血液透析患者动静脉内瘘并发症的疗效。方法选取240例在我院采用动静脉内瘘接受维持性血液透析治疗的患者,按数字表法随机分为3组,每组各80例。三七粉联合微波组(A组),在血液透析结束后于瘘口及静脉血管处涂抹三七粉,同时联合微波理疗;多磺酸基粘多糖联合微波组(B组),在瘘口周围涂抹多磺酸基粘多糖,同时采用微波理疗;三七粉和多磺酸基粘多糖联合微波理疗组(C组),在A组治疗基础上,于治疗结束1 h后再用多磺酸基粘多糖软膏外敷,同时加用微波理疗。3组患者的治疗均是每日一次,疗程14 d,连续治疗2个疗程。观察3组患者内瘘在1年期间形成血栓、闭塞、血管硬化、感染以及出血的发生率。结果 A组与B组比较,内瘘血管并发症的发生率无明显差异(P0.05);C组内瘘发生血栓、闭塞、血管硬化、感染、出血等并发症的发生率明显低于另外两组(P0.05)。结论三七粉和多磺酸基粘多糖联合微波理疗能够有效预防动静脉内瘘相应并发症的发生。     

支气管肺囊肿临床治疗分析

目的探讨支气管肺囊肿诊断方法及临床疗效。方法选择于2011年6月—2012年6月到该院进行治疗的32例支气管肺囊肿患者的临床资料进行回顾性分析。32例患者中包括男18例,女17例,年龄在12～67岁之间。其中有20例患者单肺叶切除,4例患者双肺叶切除,3例患者左全肺切除,3例患者右全肺切除,2例患者囊肿切除。结果所有患者的手术均成功,没有死亡病例。手术后患者的平均住院时间为14d,无明显术后并发症。对患者进行随访7～13个月,均恢复良好,没有出现复发病例。结论手术治疗支气管肺囊肿有肯定的临床疗效,若经诊断,要根据患者的具体病情尽早选择进行手术。     

大网膜与颈部皮下包埋DegraPol支架促进体内再血管化的比较

背景:如何解决工程化器官植入体内时快速血管化问题是组织工程取得成功的关键问题.目的:比较大网膜与颈部皮下两种方法包埋促进组织工程支架材料DegraPol血管化的差异,为工程化组织体内快速再血管化寻找有效方法.方法:应用解剖学中的血管铸型技术,比较DegraPol支架置入大鼠颈部皮下和腹部大网膜包埋新生血管形成的不同.结果与结论:DegraPol支架外部发现大网膜包埋组比颈部皮下包埋组有更多的蓝色显影微细血管环绕,在微孔支架内部,也有相对丰富的新生血管形成.颈部皮下包埋组在微孔支架内部未发现新生血管形成.大网膜包埋组再血管化程度高于颈部皮下组,差异有显著性意义(P<0.05).提示大网膜包埋有效地促进血液循环建立,可作为组织工程化组织再血管化的可行方法.