抗CMG2单克隆抗体的制备及其初步应用

目的制备鼠抗人毛细血管形态发生基因2(CMG2)单克隆抗体,并将其初步应用于胃癌组织和细胞系中CMG2表达的检测。方法重组表达CMG2胞外区肽段,免疫Balb/c小鼠,常规制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法筛选目标克隆,制备小鼠腹水并经蛋白A亲和纯化获得相应抗体。间接ELISA法鉴定抗体的亚类类型及亲和力;抗原竞争性抑制实验鉴定抗体的特异性。用候选抗体建立流式细胞术、免疫荧光、免疫印迹及免疫组织化学方法,初步应用于胃癌组织和细胞系中CMG2表达的检测。结果共获得3株针对CMG2胞外区的杂交瘤细胞株,其中以8F3单克隆抗体的亲和力和特异性最好,亚型为Ig G1。8F3单抗能用于胃癌细胞株CMG2表达的流式细胞术和免疫荧光检测以及胃癌组织的免疫组织化学检测。结论成功制备出高效价高特异性的鼠抗人CMG2单克隆抗体,为CMG2的基础和临床应用研究提供了有用工具。     

功能基因组学研究--香港大学分子生物学研究所功能基因研究现状

人类基因组研究是21世纪生物学及医学发展的主流之一，它与人类疾病的预防及治疗有密切关系．因此，基因组学在整个生命科学中占有十分重要的地位．近年来，基因组测序工作迅猛发展，在许多常用生物实验模型中已有二十余种细菌、酵母菌、寄生虫、果蝇等生物的全部基因序列测定工作已告完成．     

小鼠模型与人类疾病（续）：癌症

许多控制改造小鼠基因组的新方法已经开发成功,这包括转基因技术、胚胎干细胞敲除技术,另外还有改良的遗传及物理连锁图谱。这些进步使我们制造人类疾病小鼠模型的能力有了革命性的飞跃。在本综述的前两部分中,我们详细地描述了有助于开发小鼠模型的各种技术及遗传资源。在今后各部分中,我们将重点介绍小鼠模型研发中的新进展并讨论小鼠模型在将来的可能用途,集中介绍人与小鼠的同源基因都有突变的疾病,并根据突变所影响的主要组织及器官来分别叙述疾病。我们还将例举约 100个疾病基因。基因在小鼠染色体中的位置可参见附图。每个小鼠…     

人细胞周期相关激酶(CCRK)启动子的分析和特征研究

目的：分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子。方法：采用5’-RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点；对启动子区3’端3个截短片段255bp(-367／-128)，210bp(-322／-128)和160bp(-272／-128)进行删除分析，双荧光素酶分析测出的最小活性片段作为核心启动子的上游位点。通过生物软件Matlnspector V2．2分析核心启动子区域，寻找并推测重要的转录因子，并对其核心序列进行定点突变分析，再通过电泳迁移率(EMSA)实验加以鉴定。结果：采用5‘-RACE技术，得到的PCR产物直接测序，定位-242“T”为转录起始点；通过启动子3’端小片段删除分析，255，210和160bp均无活性，由此判断3’端255个核苷酸不存在核心启动子序列，并定位一段74bp的区域为核心启动子(-441／-367)区域。通过Matlnspector软件分析，发现在这段核心启动子区域内有3个重要的结合位点：Delta EF-1，NF-κB和Spl。对这3个结合位点的核心序列进行定点突变后瞬时转染U373，经双荧光素酶分析发现Delta EF-1的活性明显升高，NF-κB没有变化，Spl的活性降低但不太明显。进一步通过电泳迁移率(EMSA)实验鉴定，Delta EF-1和NF-κKB能与U373核蛋白形成特异性的DNA-蛋白质复合体，表明Delta EF-1和NF-κB两个转录因子与人CCRK基因表达相关。结论：对人CCRK启动子的特性研究，为今后认识该基因的转录调控机制打下了基础，为揭示恶性神经胶质瘤的发生机制及防治措施的研究提供了新的思路。     

miR-137对U87胶质瘤细胞中EZH2表达和细胞增殖的影响

目的研究miR-137对U87胶质瘤细胞EZH2表达及细胞增殖的影响。方法先用双荧光素酶报告基因检测系统筛选靶向EZH2 3'-非翻译区(3'-UTR)的miRNA,然后采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测在胶质瘤细胞中作用最强的miRNA对EZH2 mRNA和蛋白表达的影响,再用MTT法检测该miRNA对U87胶质瘤细胞增殖的影响。结果胶质瘤细胞中低表达的9个miRNA被预测靶向EZH2的3'-UTR。双荧光素酶报告基因检测表明:miR-126、miR-137和miR-138能使荧光素酶活性显著降低,其中miR-137的作用最强(P<0.01)。RT-PCR和Western blot结果也显示miR-137能抑制EZH2 mRNA和蛋白的表达。MTT结果显示:miR-137能抑制U87胶质瘤细胞增殖,过表达EZH2基因可拮抗miR-137对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。结论 miR-137可抑制U87胶质瘤细胞增殖,可能与抑制EZH2基因表达有关。