人胚肾培养细胞poly(A)~ RNA在兔网织红细胞无细胞系统中的转译

建立了兔网织红细胞溶胞物(RRL)体外转译系统。此系统对兔珠蛋白mRNA有良好转译活性,合成的肽链完整。用此系统对人胚肾培养细胞poly(A)~ RNA进行转译,以~(14)C-亮氨酸进行掺入,50μl反应混合物的cpm值为1.5～3.6×10~3,对本底的转译倍数为5.1～7.6倍,用竞争性免疫沉淀鉴定转译产物,表明转译产物中含尿激酶。     

人尿激酶原全长cDNA基因的克隆

人尿激酶原(pro-UK,又称单链尿激酶)由于具有较好的选择性溶血栓作用而又不引起全身系统性出血,近年来受到国内外学者重视。但自尿中提取含量极少,较有希望的途径是通过基因工程手段来制备,pro-UK含411个氨基酸加上20个氨基酸的信号肽,全长基因编码序列为1293bp。要获得这样较大的cDNA基因有一定难度。国外虽已有几家公司报道他们克隆了pro-UK cDNA基因,但国内尚无报道。1988年我     

低分子量单链尿激酶基因在大肠杆菌中的表达

高分子单链尿激酶(Scu-PA)被认为是一种溶栓效果好、副作用小的溶栓药物。Stump等于1986年在从人肺腺癌细胞培养物分离纯化Scu-PA过程中发现了低分子量单链尿激酶(Scu-PA-32k),它的分子量为32kDa,氨基酸序列相当于Scu-PA的第144～411aa。研究证明,它对血栓溶解具有选择性,溶栓效果与Scu-PA相似,可望成为一种新型溶栓剂。     

一种高比放 DNA 探针的制备方法及其应用

随机引物法标记 DNA 探针是一种高比放、高灵敏度的 DNA 探针标记法。DNA 标记比放可达9.0×10~8cpm/μg DNA,比缺口平移法标记的比放高约9倍。因此法标记的 DNA 探针在分子杂交试验中均获得良好的结果。     

培养细胞分泌的血纤维蛋白溶酶原激活物的研究

建立了测定血纤维蛋白溶酶原激活物(PA)活性的溶解圈法。敏感性能测出0.01IU尿激酶(UK)活性。在0.02IU至1IU之间UK浓度的对数与溶解圈直径呈线性关系。本法操作简单、敏感、不需特殊仪器,尤其适用于同时检测多份低含量PA样品。本工作证明20种(25株)细胞中有5种能分泌UK,有5株人黑色素瘤细胞能分泌tPA。其中A549、IB-RS-1及LLCMK_2能分泌UK;MM96L、MM253及MM138能分泌t-PA为我们首次确定。     

M13φX174RFDNA及其HaeⅢ片段的制备

M13及φX174噬菌体均为单链DNA噬菌体。在大肠杆菌繁殖时有一个合成双链的复制型DNA(Replicative form DNA,简称RFDNA)的阶段,然后以滚环方式合成单链DNA,再组装成含单链DNA的成熟噬菌体释放到菌体外。在DNA重组研究中,常用它们的复制型DNA经特定的限制性内切酶酶介(如HaeⅢ),获得特定的已知分子量的线状DNA片段,作为测定未知分子量DNA片段的标准物。国外RFDNA的提取主要应用氯化铯密度梯度超离心的方法。国内关于M13及φX174噬菌体的培养及其DNA的提取尚未见有报导。考虑到国内超速     

亲和层析纯化尿激酶的实验研究

制备了抗尿激酶血清,并由此抗血清提取抗尿激酶IgG.将此IgG偶联到CNBr活化的Sepharose4B上,对尿激酶(UK)粗品进行纯化.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,纯化的UK样品显示3条蛋白带,高分子量尿激酶(H-UK),低分子量尿激酶(LUK)及分子量为1.8×10~4道尔顿的UK肽链.纯化UK样品的比活为79143～101710 IU/mg蛋白,从层析柱上的回收率为51～82%.未纯化UK粗品于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示9～10条带.     

兔珠蛋白mRNA的简易提取方法

建立了一种提取兔珠蛋白mRNA的简易方法,省去了提取核糖体的步骤,提取的mRNA制品在酸性脲素琼脂糖凝胶电泳上显示9S带(珠蛋白mRNA),其体外转译产物中含珠蛋白。     

用ELISA和生物素-亲和素-ELISA检测尿激酶

制备了高效价特异兔抗尿激酶血清,由此抗血清制备了抗尿激酶IgG.建立了ELISA和生物素-亲和素-ELISA(BA-ELISA)检测尿激酶方法.两种方法均具有良好的特异性.ELISA方法检测尿激酶的敏感性为0.1～0.06IU/100μl;BA-ELISA方法检测尿激酶的敏感性为0.01IU/100μl.以酶激尿标准品做参照物可进行定量测定.     

pBR_(325)质粒DNA与克隆HBVDNA体外重组及环丝氨酸富集重组子的研究

DNA 体外重组技术是基因工程的基础,比较常用和简便的方法是将载体 DNA 及外源 DNA 均以同一核酸内切酶酶切,利用酶切后两种 DNA 均具有相同的“粘性末端”,在 T_4连接酶的作用下使两种 DNA 连接起来形成重组子。一般常利用具有两个或两个以上抗药标志的质粒 DNA 为载体,当外源DNA 插入至某一抗药基因中就产生所谓插