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一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶对血液活性的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的研究蛇毒类凝血酶Agacutin的止血效果。方法新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果。结果静脉注射Agacutin0.01~0.05U·kg-1剂量后,各剂量组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%~60.5%),给药后30min药效达高峰,药效持续24h。与给药前比较,各实验组兔血纤维蛋白原含量和血黏度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致。试验结果显示,Agacutin对活化部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性。腹腔注射Agacutin0.5~2.0U·kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%~66%)。结论Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白和不激活凝血因子Ⅱ和,当有伤口时,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成不溶性纤维蛋白和血栓的形成。所有实验结果显示,Agacutin是一个有效的潜在止血剂。 相似文献
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蛇毒是蛇毒腺分泌的天然毒液,含有多种蛋白质、多肽、酶类和其它小分子物质,它们参与蛇的捕食消化和防御功能。蛇毒中含有许多种影响血液系统功能的蛋白质或酶,因其显著的生物功能和药用活性,受到广泛关注。本文就对蛇毒中影响血液系统的丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、磷脂酶A2、L-氨基酸氧化酶和5'-核苷酸酶等蛋白酶的最新研究进展进行了综述。 相似文献
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尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin的亚基的拆分和氨基酸残基测序 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 测定Agacutin两个相近亚基的N端15个氨基酸残基序列,酶分子的2个亚基需拆分以获得亚基单肽链并测序.方法 通过生物化学方法获得高纯化Agacutin,经SDS-PAGE电泳分离、亚基胶条回收及PVDF膜电转移技术等方法制备了可供鉴定和测序的单亚基样品,后者通过Edman降解法,测定了亚基N端15个氨基酸残基序列.结果 大亚基(16 kDa)的序列为:DCSSGWSSYEEHQYY,小亚基(15kDa)序列为DSSGWSSYEGHEYYV.结论 测序结果经NCBI数据库检索发现,Agacutin为新的蛇毒类凝血酶. 相似文献
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目的:探讨miR-139-5p在小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义,阐明miR-139-5p在小细胞肺癌发生发展中的作用。方法:采用细胞生长、凋亡及周期实验检测miR-139-5p的生物学功能;实时荧光定量PCR法检测50例小细胞肺癌患者癌组织及癌旁正常组织中miR-139-5p的表达,结合临床资料分析其在临床中的作用。结果:miR-139-5p在小细胞肺癌组织中的表达水平低于正常肺组织(P<0.01);转染miR-139-5p mimics后能够明显上调细胞中miR-139-5p的表达,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,上调miR-139-5p的表达后细胞的增殖能力降低(P<0.01),G1期细胞明显增多(P<0.05),细胞周期发生G0/G1期阻滞。单因素分析,miR-139-5p的表达与患者的性别和年龄无关(P>0.05),miR-139-5p在局限期(LD)患者中的表达较广泛期(ED)患者低,两者的miR-139-5p表达率比较差异有统计学意义(χ2=10.546,P=0.001);miR-139-5p在耐药患者中的表达较化疗敏感患者增高(χ2=7.025,P=0.008)。miR-139-5p在存活患者中的表达较死亡患者降低(χ2=7.697,P=0.006);Cox回归分析,疾病分期和miR-139-5p的表达可作为小细胞肺癌独立的预后因子。结论:miR-139-5p通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡及诱导细胞周期阻滞参与调节小细胞肺癌发生发展,可作为评估小细胞肺癌患者临床预后的靶基因。 相似文献
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新的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin止血作用的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研究类凝血酶Agacutin的止血效果。方法:新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射Agacutin,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果。结果:静脉注射Agacutin 0.01~0.05 U.kg-1后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%~60.5%),给药后30 min药效达高峰,药效持续24 h。与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血粘度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致。试验结果显示,Agacutin对部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性、血小板体外聚集、优球蛋白凝固时间均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性。腹腔注射Agacutin0.5~2 U.kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%~66%)。结论:Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白且不激活凝血因子II和XIII,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成血栓形成。 相似文献
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目的 探讨原蛋白转变酶2基因(proprotein convertase,PC2)对不同肿瘤细胞增殖的影响,为肿瘤治疗提供新的研究方向.方法 PC2重组质粒pcDNA3.1-PC2单独或与其分子伴侣7B2重组质粒pcDNA3.1-7B2混合转染小鼠乳腺癌细胞4T1、人肝癌细胞HepG2、小鼠黑色素瘤细胞B16、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF-7和小鼠肥大细胞瘤细胞P815,以pcDNA3.1(+)空载体为对照,通过PC2酶活性测定法、Western blot检测野生型和转染后的4T1细胞的PC2酶活性和表达,MTT法检测肿瘤细胞增殖率的变化.通过DAPI染色检测转基因细胞和TUNEL染色检测荷瘤模型瘤组织中癌细胞的凋亡情况.结果 1:1比例的PC2:7B2共转染显示了在4T1细胞中的最高PC2活性和表达,在荷瘤小鼠瘤组织中显示明显的凋亡现象.该共转染对4T1、HepG2、B16、A549和MCF-7细胞半数抑制剂量分别为128.3、97.8、137.3、51.5、214.3μg/mL,呈剂量依赖性,P815细胞的抑制率与基因剂量之间没有关系.结论 PC2上调可以抑制多种肿瘤细胞的增殖,呈现凋亡现象. 相似文献
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大肠杆菌外源基因表达产物的下游技术 总被引:9,自引:0,他引:9
以大肠杆菌作为工程菌的外源基因产物常以包涵体形式存在,这使得这类基因工程下游工艺具有不同于其它蛋白质纯化的特点,下游工艺包括包涵体提取,重组蛋白变性、复性、纯性、活性检测等复杂技术环节。 相似文献
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Objective
To observe the change of the neuropeptide pro-protein processing system in the ischemic retina ganglion cell-5 (RGC-5) cells, pro-protein convertase-2 (PC2), carboxypeptidase-E (CPE) and preproneuropeptide Y (preproNPY) protein levels in the ischemic RGC-5 cells and conditioned medium were analyzed.Methods
The RGC-5 cell was differentiated in 0.1 μmol/L staurosporine for 24 h and then stressed by different doses of oxygen and glucose deprivation (OGD). The acute or chronic OGD-induced cell death rates were obtained by using PI or TUNEL staining. The protein expression levels were determined by using the Western blot method and PC2 activity analysis.Results
The ischemia caused substantial cell death in an OGD dose-dependent manner. In the cells, proPC2 and preproNPY protein levels gradually increased whereas proCPE gradually decreased. After OGD, PC2 activity was decreased. In the conditioned medium, proPC2 and PC2 proteins gradually decreased whereas proCPE, CPE, and preproNPY proteins gradually increased.Conclusion
These results demonstrated that OGD inhibited the neuropeptide pro-protein processing system by reducing PC2 activity and the maturation of proPC2. The aggregation of the pro-proteins and the increase of the active CPE excision adversely exacerbated the cell injury. The pro-protein processing system might play a critical role in the ischemic stress of RGC-5 cells. 相似文献10.