阿帕替尼对食管鳞癌ECA-109细胞及其干性细胞辐射敏感性的影响及机制探讨

目的 探索阿帕替尼对食管鳞癌ECA-109细胞及其干性细胞辐射敏感性的影响及其分子机制。方法 采用无血清悬浮培养法富集细胞中富含肿瘤干性细胞群的球囊。将ECA-109及其干性细胞分为细胞对照组、单纯药物组、单纯照射组以及药物+照射组。CCK-8法测定细胞增殖的变化,酶联免疫吸附法（ELISA）测定血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的浓度,流式细胞术分析细胞周期及凋亡的变化;Western blot法测定细胞中CHK2、P-STAT3蛋白的表达。结果 阿帕替尼作用于ECA-109亲本细胞及干性细胞24、48和72 h后,ECA-109干性细胞的药物半数抑制浓度（IC₅₀）均较其亲本细胞的药物半数抑制浓度（IC₅₀）明显升高（t=8.17、9.29、18.85,P<0.05）,且其细胞抑制表达呈时间-剂量效应关系（亲本细胞：r²=0.94~0.97,P<0.05;干性细胞：r²=0.94~0.98,P<0.05）;不同浓度阿帕替尼（亲本细胞：10和20 μmol/L;干性细胞：30和40 μmol/L）联合不同剂量X射线（6和8 Gy）照射后,ECA-109亲本细胞及干性细胞的增殖抑制率均较单纯照射组明显增强（t=5.20~39.68,P<0.05）。ECA-109亲本细胞及干性细胞的VEGF蛋白水平差异具有统计学意义（t=7.45,P<0.05）,且单纯药物组（20 μmol/L）及药物+照射组（20 μmol/L,6 Gy）处理后,两种细胞VEGF蛋白水平均有所下降,其中亲本细胞差异具有统计学意义（t=14.51、26.40,P<0.05）。药物+照射组ECA-109亲本细胞的G₂/M期及凋亡细胞比例均较细胞对照组增高（t=8.83,11.59,P<0.05）;与细胞对照组（0 μmol/L）比较,单纯药物组的ECA-109亲本细胞CHK2、P-STAT3蛋白的表达水平显著下降（t=3.36、4.10,P<0.05）;与单纯照射组比较,药物+照射组ECA-109亲本细胞CHK2,P-STAT3蛋白的表达水平也显著下降（t=9.05、2.36,P<0.05）。结论 阿帕替尼能增强食管癌ECA-109亲本细胞及其干性细胞的放射敏感性,ECA-109干性细胞放射抵抗的原因可能与干性细胞更高表达VEGF蛋白有关。     

下调血管内皮生长因子A对食管癌ECA-109细胞的辐射增敏作用

目的 下调食管癌ECA-109细胞的血管内皮生长因子A（VEGFA）表达，观察其辐射敏感性的改变并初步探讨其发生机制。方法 将食管癌ECA-109细胞分成VEGFA转染组、空载组、X射线组和VEGFA转染组联合X射线组。运用qPCR法检测VEGFA基因的表达；Western blot法检测VEGFA蛋白的表达；细胞增殖实验（CCK8法）测定细胞的增殖变化；克隆形成法分析不同照射剂量（0、2、4、6、8 Gy）细胞的辐射敏感性；流式细胞术分析细胞凋亡变化；免疫荧光法检测γ-H2AX焦点的数量。结果 ECA-109细胞VEGFA转染组与空载组比较，VEGFA基因表达明显减少（t=11.98，P<0.05）、VEGFA蛋白表达显著下调（t=12.38，P<0.05）；ECA-109转染组细胞相较于空载组细胞，其增殖（A₄₅₀值）明显受到抑制（t=2.78、7.25、21.93、13.21，P<0.05）；与空载组比较，VEGFA转染组ECA-109细胞的D₀、D_q、SF₂值下降（t=5.83、8.56、7.68，P<0.05），放射增敏比SER_D0、SER_Dq分别为1.41、2.09，凋亡比例明显增加、且联合X射线后ECA-109细胞的凋亡比例进一步增加（t=17.63、22.48、33.87，P<0.05）；ECA-109细胞VEGFA转染组和空载组在X射线照射后2 h内细胞核形成的γ-H2AX焦点数量均明显增加，24 h后空载组细胞核的γ-H2AX焦点数量恢复照射前水平，而转染组中的γ-H2AX焦点数量仍高于照射前水平（t=7.00，P<0.05）。结论 下调VEGFA能抑制食管癌细胞的增殖，减少细胞集落形成并促进其凋亡，增加食管癌ECA-109细胞的辐射敏感性，其机制与DNA损伤修复密切相关。     

颅内病灶特征与初诊脑转移癌患者认知功能水平的相关性研究

目的 探讨初诊脑转移癌患者颅内病灶特征与认知功能水平的相关性。 方法 以2015—2016年间收治的 51例初诊脑转移癌患者为研究对象,利用CT和(或) MRI确定患者颅内病灶特征,用蒙特利尔认知评估量表评估患者认知功能水平。组间比较采用Mann-Whitney U检验,等级资料相关性采用Spearman法分析。 结果 51例初诊脑转移癌患者中 47例(92%)存在认知功能障碍,其中轻度认知功能障碍 31例(61%),痴呆 16例(31%)。单独左、右半球受累的患者认知功能水平无统计学差异(P=0.425),双侧半球受累较单独左侧半球受累的患者认知功能水平下降(P=0.042)。病灶累及≥3个脑叶较单个或2个脑叶受累的患者认知功能水平下降(P=0.015、0.024)。颅内病灶体积及水肿带体积对患者总体认知功能无影响(P=0.077、0.178)。颅内病灶个数>3个的患者较病灶个数为 1~3个的患者认知功能水平下降(P=0.010)。 结论 90%以上的初诊脑转移癌患者存在认知功能障碍,认知功能障碍主要与病灶部位、累及脑叶、病灶个数相关,而与病灶及水肿带体积无相关性。     

大鼠WBI后海马区NFATc4/3信号通路相关因子改变的研究

目的 探讨SD大鼠WBI后海马区NFATc4/3信号通路相关因子的改变。方法 将120只1个月龄雄性SD大鼠随机分为5个组,采用4 MeV电子线进行0、2、10、20 Gy单次WBI,在照射后6 h、12 h、1 d、3 d、1周、2周,用蛋白印迹法和RT-PCR方法检测海马区CaN、NFATc4/3、p-NFATc4/3、GSK-3β表达量变化。结果 照射后6、12 hNFATc4/3、p-NFATc4/3表达无变化,照射后1 d随照射剂量增加p-NFATc4/3表达水平与0 Gy相比明显升高(2 GyP=0.014、10 GyP=0.011、20 GyP=0.000),而NFATc4/3的表达水平无变化;照射后3 d、1周和2周NFATc4/3表达水平与0 Gy相比显著下降(3 d 2 GyP=0.040、10 GyP=0.000、20 GyP=0.000、1周2 GyP=0.692、10 GyP=0.032、20 GyP=0.021、2周2 GyP=0.001、10 GyP=0.000、20 GyP=0.000),而p-NFATc4/3表达均无变化。各剂量组间CaN、GSK-3β的表达未随照射时间、剂量变化而变化。结论 电离辐射对海马NFATc4/3信号通路有抑制作用,推测放射性认知功能障碍可能与NFATc4/3信号通路相关。     

阿帕替尼对食管癌Kyse-150细胞放射敏感性影响的实验研究

目的 观察阿帕替尼对食管癌Kyse-150细胞放射敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法 将食管癌Kyse-150细胞分为空白对照组、阿帕替尼组、单纯照射组、阿帕替尼联合照射组。CCK-8法检测不同浓度阿帕替尼（0、5、10、20、30、40 μmol/L）对细胞增殖的影响;克隆形成法检测不同浓度阿帕替尼（0、10、20、40 μmol/L）对细胞放射敏感性的影响;流式细胞术分析阿帕替尼（20 μmol/L）联合射线（4 Gy）对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果 阿帕替尼能抑制Kyse-150细胞的增殖,且呈剂量-时间依赖性（r=0.89~0.96,P<0.05）;随着阿帕替尼浓度的增加,Kyse-150细胞的放射生物学参数D₀、D_q、SF₂值逐渐减小,而放射增敏比SER_D0值逐渐增加。阿帕替尼联合照射组分别与空白对照组、单纯照射组及阿帕替尼组比较,细胞凋亡率均显著增加,差异具有统计学意义（t=12.36、5.99、15.47,P<0.05）。与空白对照组比较,阿帕替尼组、单纯照射组及阿帕替尼联合照射组G₂/M期比例均增高,差异均具有统计学意义（t=8.81、39.69、20.61,P<0.05）。阿帕替尼组、阿帕替尼联合照射组分别与空白对照组及单纯照射组相比,S期比例均增高,差异均具有统计学意义（t=6.06、3.82、8.81、6.24,P<0.05）。而阿帕替尼组与阿帕替尼联合照射组相比,S期比例差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 阿帕替尼能增加食管癌Kyse-150细胞的放射敏感性,其机制可能与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡及诱导细胞周期再分布有关。     

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制研究

目的 观察聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂尼拉帕利及帕米帕利对乳腺癌MCF-7及MDA-MB-436细胞放射敏感性的影响,并对其机制进行探讨。方法 将乳腺癌MCF-7及MDA-MB-436细胞分为空白对照组、尼拉帕利组、帕米帕利组、单纯照射组、尼拉帕利联合照射组、帕米帕利联合照射组。CCK-8法检测药物对细胞增殖的影响,克隆形成实验检测药物对细胞放射敏感性的影响,流式细胞术分析药物联合照射对细胞周期和凋亡的影响,免疫荧光法检测细胞内γ-H2AX焦点数量的变化,qPCR法及Western blot实验检测细胞中FANCG、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结果 尼拉帕利及帕米帕利均能抑制乳腺癌MCF-7及MDA-MB-436细胞的增殖,呈时间-剂量依赖性。随着照射剂量的增加,两种细胞的放射生物学参数D₀、D_q、SF₂逐渐减小,而放射增敏比SER_D0、SER_Dq逐渐增大。尼拉帕利联合照射组及帕米帕利联合照射组与空白对照组相比,G₂/M期比例增加(t_MCF-7=41.66、44.08,P<0.05;t₄₃₆=24.69、18.91,P<0.05); G₀/G₁期比例减少(t_MCF-7=8.67、29.61,P<0.05;t₄₃₆=26.39、29.12,P<0.05);细胞凋亡率显著增加(t_MCF-7=11.17、11.71,P<0.05;t₄₃₆=42.68、15.89,P<0.05)。与空白对照组相比,MCF-7细胞的单纯照射组、尼拉帕利联合照射组在射线照射后2 h,细胞核内γ-H2AX焦点数量显著增加(t=8.89、21.72,P<0.05);照射后24 h单纯照射组细胞核内γ-H2AX焦点数量基本恢复照射前水平,而尼拉帕利联合照射组细胞核内γ-H2AX焦点数量仍大量存在(t=8.82,P<0.05)。 尼拉帕利联合照射组与空白对照组比较,MCF-7细胞的FANCG、Bcl-2 mRNA表达明显减少(t_FANCG=14.07,P<0.05;t_Bcl-2=29.21,P<0.05);Bax mRNA表达明显增多(t=8.90,P<0.05);与空白对照组相比,尼拉帕利联合照射组MCF-7细胞的FANCG、Bcl-2蛋白水平显著下降(t_FANCG=7.09,P<0.05;t_Bcl-2=10.24,P<0.05);Bax蛋白水平显著升高(t=2.90,P<0.05)。结论 PARP抑制剂尼拉帕利及帕米帕利能增加乳腺癌MCF-7及MDA-MB-436细胞的放射敏感性,其机制可能与下调FA-BRCA通路中FANCG的表达,调节凋亡相关基因,抑制DNA损伤修复有关。     

WBRT对肺癌脑转移者认知功能及生活质量影响前瞻性研究

目的 评估WBRT对肺癌脑转移患者认知功能及生活质量的影响。方法 以 2015年收治的 41例行WBRT的肺癌脑转移患者为研究对象,以蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、简易精神状态量表(MMSE)为认知评估工具,以阿尔茨海默病协作研究日常能力量表(ADCS-ADL)为生活质量评估工具。独立样本t检验WBRT前后认知功能和生活质量水平。结果 WBRT前与后经MoCA、MMSE评估认知功能障碍比例分别为96.55%、48.28%和94.29%、31.43%。WBRT前与后相比MoCA、MMSE各量表总分分别为 18.24±0.95与 19.37±0.70(P=0.341),23.51±0.88与 24.54±0.71(P=0.375)。WBRT前与后ADCS-ADL得分分别为 57.44±2.59、59.37±2.27(P=0.583)。结论 WBRT对肺癌脑转移患者总体认知功能及日常生活质量水平无明显影响。MoCA对脑转移癌患者认知功能障碍筛查时较MMSE具有更高敏感性。