TLR5干涉慢病毒颗粒制备及稳定细胞系建立

目的 制备Toll样受体5(TLR5)的慢病毒干涉颗粒,建立稳定下调MyD88的HEK293细胞系.方法 将携带不同特异性干涉序列的DNA片段插入干涉质粒pSicoR中,并制备慢病毒颗粒.将慢病毒颗粒感染HEK293细胞,建立稳定细胞系,通过RT-PCR和报告基因分析的方法确定不同干涉序列对TLR5表达的下调及信号通路启动的阻断作用.结果 成功制备携带干涉序列的慢病毒颗粒,并建立稳定感染慢病毒的HEK293细胞系.与对照组相比,感染2325位序列的细胞TLR5 mRNA表达水平下降为0.32,对CBLB502的启动作用下降为0.36.结论 成功制备TLR5的慢病毒干涉颗粒,并建立TLR5稳定下调的细胞系.     

CBLB502对放射性肺炎和肺纤维化的防护作用研究

目的研究CBLB502对放射性肺炎和放射性肺纤维化的防护作用，从而证实CBLB502作为临床抗放射药物的可行性。方法C57BIM6J小鼠20Gy单次照射后24h、1个月、3个月和5个月取肺组织用TUNEL方法对肺泡上皮细胞和血管内皮细胞的凋亡进行检测，HE染色观察纤维化病理变化，免疫组织化学方法检测特异性指标表达，以及受照部位皮毛和皮肤的病理变化。结果CBLB502抑制了照射后小鼠肺泡上皮细胞和血管内皮细胞的凋亡，减缓了肺纤维化进程，同时减少层黏连蛋白表达，维持表面活性蛋白B表达量，受照皮肤的炎症反应也明显减轻。结论CBLB502对照射后放射性肺炎和放射性肺纤维化的发生和进程有防护作用。     

MyD88干涉慢病毒颗粒的包装和鉴定

目的制备MyD88分子的慢病毒干涉颗粒,建立稳定下调MyD88的HEK293细胞系。方法将携带特异性干涉序列的DNA片段克隆入干涉质粒pSicoR中,并制备携带不同干涉序列的慢病毒颗粒。将慢病毒颗粒感染HEK293细胞,建立稳定细胞系,经RT-PCR和报告基因分析方法确定不同干涉序列对MyD88表达的下调及信号通路激活的阻断作用。结果成功制备携带干涉序列的慢病毒颗粒,并获得稳定感染慢病毒的HEK293细胞系,经鉴定发现感染912位序列的细胞MyD88mRNA表达水平下调为对照组的28%,对CBLB502的激活作用下降为对照组的24%。结论成功制备MyD88的慢病毒干涉颗粒,可用于建立MyD88稳定下调的细胞系。     

S100A4 siRNA对人胰腺癌BxPc-3细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的观察利用小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）技术下调人胰腺癌BxPc-3细胞中钙结合蛋白S100A4表达后对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法设计合成针对S100A4的特异性siRNA,转染至人胰腺癌BxPc-3细胞,以Western印迹检测转染前后S100A4蛋白表达变化;克隆形成率实验检测转染前后BxPc-3细胞增殖能力;Transwell小室模型检测转染前后BxPc-3细胞迁移和侵袭能力变化。结果 Western印迹结果显示BxPc-3细胞转染S100A4siRNA48h后,S100A4蛋白表达明显下调;Transwell小室验证转染S100A4siRNA后细胞的迁移和侵袭能力明显降低。结论本研究结果表明,S100A4表达下调后可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,提示S100A4可以作为一个潜在的肿瘤治疗靶标。     

TLR5-NF-κB信号通路及其在放射医学领域的应用前景

Toll Like Receptor家族(TLRs)是一类介导微生物先天免疫的受体家族.1996年Lemaitre等[1]首先在果蝇体内发现了Toll蛋白,在果蝇体内研究发现该蛋自在真菌感染引起的免疫反应中发挥重要作用.目前,在哺乳动物细胞中发现了13种与果蝇同源的Toll蛋白,其中,人体存在10种Toll样受体,分别命名为TLR1～TLR10[2].研究表明,TLRs家族成员主要参与微生物引起的机体免疫反应.作为Toll样受体家族成员之一,TLR5能够与细菌鞭毛蛋白结合,参与细菌感染引起的免疫反应.近年来,相继报道鞭毛蛋白能够通过结合TLR5,激活NF-κB信号通路,调节多种细胞因子分泌,对电离辐射及其他刺激引发的细胞凋亡具有保护作用[3-4].本文将对TLRs家族成员结构、分布和信号通路及TLR5在电离辐射损伤中作用的研究进展作一综述.