微血管内皮细胞诱导骨髓间充质干细胞向心肌样分化及其移植的可行性

背景:骨髓间充质干细胞通过再生心肌细胞在心肌损伤性疾病治疗方面突显较大潜力,但目前仍未找到一种理想的诱导方式.目的:探讨微血管内皮细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的潜能,并分析其移植的可行性.设计、时间及地点:细胞学体外观察及体内移植实验,于2008-07/2009-02在重庆市神经病学重点实验室完成.材料:清洁级二三月龄健康雄性SD大鼠16只,购自重庆医科大学实验动物中心方法:孔径0.4 μm的transwell小室,置入培养板孔构成双室培养体系.取SD大鼠1只,Ficoll密度梯度+贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞,组织块法分离培养微血管内皮细胞.培养瓶中融合至50%生长良好的微血管内皮细胞,每3 d更换培养液,收集更换液过滤即制成条件培养液.体外实验分为4组:直接接触组、双室培养组、条件培养液组、培养液对照组,观察各种培养条件对骨髓间充质干细胞的心肌诱导效应.取SD大鼠15只建立心肌梗死模型,冠状动脉结扎后第6天任取1只大鼠明确心肌梗死建模是否成功,其余大鼠随机分为细胞移植组8只、模型对照组6只.造模1周后,细胞移植组将在双室模型中与微血管内皮细胞共培养5 d的骨髓间充质干细胞调整浓度为109L-1通过鼠尾静脉缓慢注入1 mL,模型对照组予等量DMEM,观察4周.主要观察指标:体外实验通过免疫荧光染色检测心肌标志物Tnl、α-actin的表达;采用心电图、荧光镜检、苏木精-伊红染色等方式评价体内移植的安全性及可行性.结果:直接接触组、双室培养组、条件培养液组部分骨髓间充质干细胞心肌标志物Tnl、α-actin阳性表达,荧光镜下胞浆发绿光(或红光),前2组诱导率基本相似(P>0.05),且均明显高于条件培养液组(P<0.05);培养液对照组细胞未向心肌样细胞分化.细胞移植后两组大鼠均存活良好,未出现死亡及恶性心律失常,4周后细胞移植组心脏冰冻切片荧光镜检显示心肌内有少量胞核蓝染的细胞,提示干细胞成功归巢,结合苏木精-伊红染色,归巢细胞位于心肌梗死灶周边区域,呈单个或小团聚集;而模型对照组心肌切片未见胞核蓝染的细胞.结论:微血管内皮细胞能够通过旁分泌途径诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,经微血管内皮细胞预处理过的骨髓间充质干细胞移植入大鼠体内是安全的,可成功归巢到大鼠心肌梗死灶及周边区.     

微血管内皮细胞诱导骨髓间充质干细胞向心肌样分化及其移植的可行性

背景：骨髓间充质干细胞通过再生心肌细胞在心肌损伤性疾病治疗方面突显较大潜力,但目前仍未找到一种理想的诱导方式。 目的：探讨微血管内皮细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的潜能,并分析其移植的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察及体内移植实验,于2008-07/2009-02在重庆市神经病学重点实验室完成。 材料：清洁级二三月龄健康雄性SD大鼠16只,购自重庆医科大学实验动物中心 方法：孔径0.4 µm的transwell小室,置入培养板孔构成双室培养体系。取SD大鼠1只,Ficoll密度梯度+贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞,组织块法分离培养微血管内皮细胞。培养瓶中融合至50%生长良好的微血管内皮细胞,每3 d更换培养液,收集更换液过滤即制成条件培养液。体外实验分为4组：直接接触组、双室培养组、条件培养液组、培养液对照组,观察各种培养条件对骨髓间充质干细胞的心肌诱导效应。取SD大鼠15只建立心肌梗死模型,冠状动脉结扎后第6天任取1只大鼠明确心肌梗死建模是否成功,其余大鼠随机分为细胞移植组8只、模型对照组6只。造模1周后,细胞移植组将在双室模型中与微血管内皮细胞共培养5 d的骨髓间充质干细胞调整浓度为109 L-1,通过鼠尾静脉缓慢注入1 mL,模型对照组予等量DMEM,观察4周。 主要观察指标：体外实验通过免疫荧光染色检测心肌标志物TnI、α-actin的表达;采用心电图、荧光镜检、苏木精-伊红染色等方式评价体内移植的安全性及可行性。 结果：直接接触组、双室培养组、条件培养液组部分骨髓间充质干细胞心肌标志物TnI、α-actin阳性表达,荧光镜下胞浆发绿光(或红光),前2组诱导率基本相似(P > 0.05),且均明显高于条件培养液组(P < 0.05);培养液对照组细胞未向心肌样细胞分化。细胞移植后两组大鼠均存活良好,未出现死亡及恶性心律失常,4周后细胞移植组心脏冰冻切片荧光镜检显示心肌内有少量胞核蓝染的细胞,提示干细胞成功归巢,结合苏木精-伊红染色,归巢细胞位于心肌梗死灶周边区域,呈单个或小团聚集;而模型对照组心肌切片未见胞核蓝染的细胞。 结论：微血管内皮细胞能够通过旁分泌途径诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,经微血管内皮细胞预处理过的骨髓间充质干细胞移植入大鼠体内是安全的,可成功归巢到大鼠心肌梗死灶及周边区。     

心房颤动患者血清BNP、hsCRP、CK-MB的变化及意义

目的 探讨血清腩钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、高敏c一反应蛋白(high sensitive C-reactive protein,hsCRP)及肌酸激酶同工酶(MB isoenzyme of ereatine kinase,CK-MB)在心房颤动(AF)患者血清巾的浓度变化及临床意义.方法 入选72例患者按照心电图诊断将其分为持续性房颤组(房颤组,n=32)和窦性心律组(窦律组,n=40),按照美国纽约心脏病学会(New York Heart Association,NYHA)心功能的分级标准,义分为心功能II级、心功能Ⅲ级、心功能Ⅳ级3个亚组.采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、胶乳增强免疫透射比浊法、酶速率法分别测定BNP、hsCRP、CK-MB在各组血清中的浓度变化,对其结果进行统计分析.结果 ①房颤组血清BNP、hsCRP水平明显高于窦律组(P<0.05).在相同心功能亚组中房颤组血清BNP、hsCRP水平明显高于窦律组(P<0.01).在2组的心功能亚组中m清BNP、hsCRP水平随着心功能NYHA分级增加而增高(P<0.01).②房颤绀血清CK-MB水平与窦律组血清CK-MB水平无明显差别(P>0.05),其心功能业组之间亦无明显差别(P>0.05).③房颤组BNP、hsCRP、CK-MB 3者之间无相关关系(P>0.05).结论 BNP、hsCRP与心房颤动的发生和持续可能相关,可作为房颤病情的相对独立的检测指标.CK-MB与房颤的发牛和发展可能无关.     

心电图、超声心动图、SPECT、冠状动脉造影诊断冠心病的比较

目的 :研究冠心病 (CAD)时 ,心电图 (ECG)、超声心动图 (UCG)、单光子发射型计算机断层显像(SPECT)、冠脉造影 (CAG)的敏感性、特异性、准确性和互补性。方法 :对来院的 6 7例疑诊冠心病患者分别进行ECG、UCG、SPECT和CAG检查。结果 :以CAG和手术结果为标准 ,ECG、UCG和SPECT的敏感性分别为 71.7% ,71.2%和 90 .3% ;特异性分别为 78.6 % ,85 .7%和 80 % ;准确性分别为 73.1% ,73.1%和 88.1%。结论 :ECG、UCG、SPECT、CAG对冠心病的诊断各有特点 ,有较高的互补性 ,根据不同的特点选择应用 ,有利于提高诊断水平 ,使患者得到及时有效的治疗     

血脂康抑制单核细胞粘附的分子水平研究

本文就调脂药血脂康临床治疗高血脂病例,在发挥降脂作用的同时,对外周血单核细胞、淋巴细胞粘附分子CD11b的表达,以及单核细胞与内皮细胞粘附的影响进行研究,探讨了该药的“非降脂作用”;同时尝试为临床提供新的动脉粥样硬化危险因素指标。     

心电图、超声心动图、SPECT、冠状动脉造影诊断冠心病的比较

目的:研究冠心痛(CAD)时,心电图(ECG)、超声心动图(UCG)、单光子发射型计算机断层显像(SPECT)、冠脉造影(CAG)的敏感性、特异性、准确性和互补性.方法:对来院的67例疑诊冠心病患者分别进行ECG、UCG、SPECT和CAG检查.结果:以CAG和手术结果为标准,ECG、UCG和SPECT的敏感性分别为71.7%,71.2%和90.3%;特异性分别为78.6%,85.7%和80%;准确性分别为73.1%,73.1%和88.1%.结论:ECG、UCG、SPECT、CAG对冠心痛的诊断各有特点,有较高的互补性,根据不同的特点选择应用,有利于提高诊断水平,使患者得到及时有效的治疗.     

急性重症胰腺炎的早期肠内营养临床观察

目的 探讨早期肠内营养对急性重症胰腺炎的影响。方法 经鼻空肠管滴注肠内营养制剂能全力500－1500ml/d。结果 腹痛，腹胀，腹部压痛逐渐减轻，血，尿淀粉酶无反复，9例中2例轻度腹泻，1例并发肺部感染。结论 对于有一定肠功能的重症胰腺炎经鼻空肠管早期肠内营养，不会增加胰腺负担，也不影响胰腺的自然病程，可改善机体免疫力及营养状况，减少并发症，降低医疗费用。     

大扶康治疗真菌感染12例疗效分析

自1990年6月以来,我们用大扶康(氟康唑,fluconazole)治疗重症监护病房(ICU)住院后真菌感染12例。取得良好效果,报道如下。