SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立

.学者论坛·在动物实验中解决临床难题···························，·······································································……顾玉东(3)基因〕:程     

基因工程蛋白质产物的纯化

DNA重组技术的出现,开创了一门新的蛋白质纯化技术,即基因工程蛋白质纯化技术。其原理是将易于纯化的“标签”加在目的蛋白上构成融合蛋白,利用所加标签特性,来纯化目的蛋蛋,最后将标签去掉,达到纯化目的蛋白质的目的。本文将简要地说明该技术基本原理,介绍几种标签类型及其发展方向。     

诱导性基因打靶的原理及有关应用

诱导性基因打靶是一种借助于 Cre/ lox P系统的作用、利用控制重组酶 Cre表达的启动子或 Cre酶活性的可诱导性、或重组酶 Cre定位表达的基因转移系统的宿主细胞特异性等特性 ,从而在一定的发育阶段和一定的组织细胞中对特定基因进行遗传修饰的基因打靶技术     

未知人Na( )-K( )-Exchanging ATPase α1亚基基因第一内含子的获得及鉴定

目的研究人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因胞外区约８０～１３０位氨基酸编码序列的未知基因组结构。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对人基因组ＤＮＡ及ｃＤＮＡ文库进行扩增,限制性酶切分析扩增产物,并进行荧光测序,对测序结果进行同源性分析及剪接位点的搜索并对得到的核苷酸序列进行分析。结果人基因组ＤＮＡ和ｃＤＮＡ经扩增后分别得到８３３和１９５ｂｐ两种不同大小的片段Ｆｇ,Ｆｃ。分析序列发现Ｆｇ与Ｆｃ相比在１３８～７７５ｂｐ处含有一６３８ｂｐ的插入片段,此片段与ＧｅｎＢａｎｋ中的任何已知序列均无明显同源性。结论本研究发现了一段全新未知的人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因的内含子全序列,并得到了第一外显子同第二外显子之间的相对位置和序列,其在Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ的基因检索号为Ｌ７６９３８。序列分析表明该内含子可能具有潜在的调控基因表达的功能,并含有一个可能的编码序列。     

抗艾滋病毒HIV的CD_4V1-V2区段的PCR扩增和克隆表达(简报)

据报道,辅助T淋巴细胞表面的CD_4可溶性糖蛋白制剂可结合艾滋病毒HIV表面糖蛋白gp120从而中和HIV,是一公认的可应用于临床治疗艾滋病的有效药物。实际上,真正起作用的是CD_4基因的V1-V2区段.1989年9月,我们独立设计并改进了PCR(聚合酶链扩增技术)以获得CD_4基因的V1-V2区段.改进之点在于:在PCR前端引物的5端引入了必要的酶切位点和蛋白质表达的起始密码ATG;在PCR末端引物     

人心钠素的蛋白质工程研究——Ⅰ.一种人心钠素衍生物RH-1的基因合成及克隆表达

在心钠素结构改造的蛋白质工程研究中,本工作首次提出以“分子嵌合法”构建心钠素衍生物的设计思想,并设计了系列心钠素衍生物RH-1、RH-2和RH-3。为阻止羧肽酶对心钠素的降解,羧肽酶抑制剂SQ20881被串联于α-bANP的N端,二个脯氨酸被串联于C端,从而形成杂合的心钠素衍生物分子RH-1,衍生物RH-2仅在α-hANP的N端嵌合SQ20881,衍生物RH-3则只在α-hANP的C端嵌合二个脯氨酸。用DNA合成仪合成RH-1基因的全部10个片段,经纯化拼接成全基因,并经核苷酸序列分析得以确认。克隆RH-1基因于表达性载体pLSD-13,构成pRHL-1重组体,并经限制性内切酶分析和Southern杂交证明了RH-1基因的正确插入。用大肠杆菌N6405菌株表达该基因,SDS/PAGE分析证实了衍生物RH-1基因的表达。凝胶扫描表明,表达蛋白量约占细胞可溶性蛋白的11％。     

β-地中海贫血基因治疗研究——Ⅰ.以逆转录病毒作载体将人β-珠蛋白基因转移至Friend细胞

用重组人β-珠蛋白基因的逆转录病毒载体转染单向性的ψ-2包装细胞系,继而感染双向性的PA317包装细胞系,分离到能产生重组逆转录病毒载体的细胞系PIWβ,其分泌的重组载体滴度达1.1×10~5CFU/ml。利用这种缺失性病毒粒子,将人β-珠蛋白基因高效地转移到Friend细胞,Southern印迹杂交结果证实,人β-珠蛋白基因可以完整、稳定地整合到靶细胞的基因组上。以上结果为人β-地中海贫血的基因治疗研究提供了有用的参考途径。     

质粒pBR32与pCRI体外重组的研究

质粒已被广泛用作把特定的基因片段从一种有机体细胞转移到另一种有机体细胞中去的运载体。本文研究两株大肠杆菌的质粒PBR322与PCRI的体外重组及其对受体菌的转化和表达。材料与方法(一)菌种和酶大肠杆茵C600(Leu~-,Thr~-,V_81~-)受体菌;大肠杆菌8021,所含质粒如pBR322带有抗氨基苄青霉素和四环素(AP～r,Tc~r)的基因标记。上述菌株由中国科学院生物物理所提供;大肠杆菌C600所含质粒pCRI带有抗卡那霉素(Km~r)的基因标记,中国科学院微生物所提供;噬菌体T4DNA连接酶,4000单位/毫升,中国科学院生物物理所提供;限制性内切酶EcoRI自制。     

链霉素对制霉菌素产生菌——Act.noursei Hazen A.Brown的作用

链霉素对微生物的作用的研究表明,链霉素有可能作为选育的诱变因子。本文研究制霉菌素产生菌153(Act.noursei 153)菌株经链霉素处理后在形态和产制霉菌素能力方面的变异。实验结果表明,随着抗菌素浓度的提高,制霉菌素产生菌153的孢子存活率下降。当链霉素浓度为10单位/毫升时,存活率为39.9%;剂量为80单位/毫升时,存活率仅为0.043%。存活率同剂量的关系表现为递减的指数特点。在淀粉-氨琼脂培养基上研究了制霉菌素产生菌153的2000多个菌落,并按其大小、形状、颜色、     

0营养缺陷型在抗肿瘤抗菌素Carminomycin菌种选育中的应用

本文旨在通过诱发突变获得抗肿瘤抗菌素carminomycin的高产变株,并研究各种营养缺陷型合成抗菌素的能力。出发菌株 Actinomadura car-minata 4281为硫胺素和蛋氨酸缺陷型。诱变因素是γ-射线(功率为195R/分,剂量为200KR)和 N-甲基-N′-硝基-N 亚硝基胍(pH 6.0缓冲液稀释至浓度1毫克/毫升)。