有机介质中99TcmO4-非胶体还原产物的制备及其性质研究

目的 研究能在肿瘤中浓聚的99TcmO4-非胶体还原产物(99Tcm-Rs)的物理化学特性和生物学表现.方法 采用乙腈与Na99TcmO4洗脱液混合蒸发除去水,在各种有机溶剂中,用氯化亚锡还原Na99TcmO4.对99Tcm-Rs进行薄层层析(TLC)、纸电泳、液相分配系数、滤膜通过特性研究,对类似物非胶体还原铼(Re-Rs)做元素分析.并对H460细胞摄取99Tcm-Rs和99Tcm-Rs在SD大鼠体内分布、在肿瘤内分布及在缺血心肌内分布进行研究.结果 在乙腈中还原Na99TcmO4可以获得高产率的99Tcm-Rs(＞90%).99Tcm-Rs的物理、化学性质和生物学特征与99TcmO4-不同,而且不是有机化学反应产品.99Tcm-Rs对乏氧细胞和缺血组织有亲和作用.静脉注射99Tcm-Rs后2和18 h,在H460肿瘤中,肿癯/血液放射性比值分别为3.05±0.34和8.07±1.19,肿瘤/骨骼肌放射性比值分别为10.38±1.21和20.55±2.80.缺血心肌也明显摄取99Tcm-Rs.乏氧、pH值降低和钙离子累积浓度增加,H460细胞摄取99Tcm-Rs随之增加,乏氧和钙离子浓度增加能提高99Tcm-Rs对二巯丙磺酸钠的标记率.以乙腈为展开剂,硅胶TLC结果显示99Tcm-Rs有2种成分,Rf值分别为1.0和0.78,后者在正常和肿瘤组织中分布与99Tcm-O4-无差异.结论 99Tcm-Rs是99TcmO4-在有机溶剂中还原或歧化反应产生的无机化合物,其制备简便,是前景较好的乏氧显像剂.     

^99Tc^m标记亲肿瘤三肽的实验研究

目的 进行99Tcm-精氨酸-谷氨酸-丝氨酸（RES）的亲肿瘤实验研究.方法 采用标准Fmoc固相合成法合成RES,在不同的试剂和温度（100 ℃或室温）条件下,以氯化亚锡为还原剂进行RES的99Tcm标记,优化标记条件.进行荷A549肺癌裸鼠99Tcm-RES显像并测定%ID/g,研究99TcmRES在荷瘤裸鼠体内的分布.比较兔炎性反应和肿瘤模型显像结果.结果 （1）酒石酸钠及氢氧化钠为缓冲剂,氯化亚锡为还原剂,100 ℃水浴10 min,RES放化纯最高达到85%;99Tcm-RES性能稳定,室温下放置6 h,放化纯仍达75%.（2）注射后0.5 h,99Tcm-RES多分布于心、肝、肾等血供丰富脏器,2 h血液的放射性（0.36%ID/g）降幅明显,仅相当于0.5 h（2.35%ID/g）的1/7;心、肝、肺的放射性降幅稍慢,但明显快于肿瘤;注射后0.5 h肿瘤放射性摄取为2.32%ID/g,6 h为1.54%ID/g,6 h后仍有超过60%的放射性滞留.99Tcm-RES注射后6 h肿瘤/血、肿瘤/心、肿瘤/肝、肿瘤/肺、肿瘤/脾和肿瘤/骨骼肌放射性比值分别为5.31,1.88,1.57,3.58,4.16和5.92.（3）荷瘤鼠显像发现肿瘤部位明显浓聚99Tcm-RES,而201Tl、99Tcm-MIBI在肿瘤部位未见明显浓聚.（4）兔炎性反应和肿瘤模型显像示肿瘤部位放射性明显浓聚,而炎性反应部位放射性无明显浓聚,注药后6 h肿瘤/炎性反应部位放射性比值为3.12.结论 用放射性组合化学文库筛选出的小分子RES是一种与肿瘤高亲和力的多肽,有望成为一种肿瘤显像剂.     

~（99）Tc~m-REG的制备及其在正常小鼠体内分布和药代动力学研究

目的研究99Tc^m-精氨酸-符氨酸-片氨酸（99Tc^m-REG）与肺癌细胞结合及其在正常小鼠体内分布和约代动力学。方法采用99Tc^m直接法标记REG,行99Tc^m-REG与非小细胞肺癌细胞A549和H1299的结合实验。正常小鼠尾静脉注射99Tc^m-REG后不同时间处死,取主要脏器或组织,测定其每克组织百分注射剂照牢（％ID／g）。另取尾静脉注射99Tc^m-REG后不同时间小鼠血液,测量放射性计数并计算药代动力学参数。尾静脉注射99Tc^m-REG后,测定不同时间荷H1299细胞肿瘤裸鼠肿瘤％ID／g及肿瘤／肌肉比值。结果 99Tc^m直接标记REG的标记率为（92．90±2．86）％。99Tc^m-REG与非小细胞肺癌细胞A549和H1299的最高结合率分别为（1．29±0．16）％和（2．324-0．31）％。体内分布提示99Tc^m-REG在小鼠血液中清除迅速,2h时放射性仪为注射5min时的20．26％,肝脏内放射性浓聚较多,且旱缓慢下降．肾脏、心、肺放射性摄取随时间逐渐下降,其余组织放射性警低水平。2h肿瘤％ID／g为2．02±0．67,肿瘤／肌肉比值为3．50±1．27。结论99Tc^m-REG具有亲肺癌细胞的特性,有可能成为一种亲肺癌肿瘤显像剂。     

^99Tc^m-精氨酸-谷氨酸-苏氨酸在荷人肺癌H1299裸鼠体内分布和显像

目的通过研究^99Tc^m-精氨酸-谷氨酸-苏氨酸（RET）在荷人肺癌H1299裸鼠体内的分布及显像,探讨其用于肺癌显像的可行性。方法采用^99Tc^m-直接法标记RET,再行^99Tc^m-RET与NSCLC细胞H1299的结合实验。荷人肺癌H1299裸鼠尾静脉注射^99Tc^m-RET后,行不同时间（15、30min,1、2．4、8、24、48h组各4只鼠）体内分布实验,分别测定组织放射性摄取（％ID／g）;另取荷瘤鼠3只,注射4．81MBq^99Tc^m-RET后于0．5、1、2、4．5、5、6h行γ显像。结果^99Tc^m-直接标记RET的标记率为（93．15±2．02）％,与H1299细胞的最高结合率为（3．56±0．37）％。荷瘤裸鼠尾静脉注射^99Tc^m-RET后4h肿瘤放射性摄取达（4．96±1．05）％ID／g,肝脏、脾脏有较多放射性摄取[（15．89±1．84）％ID／g和（10．83±1．66）％ID／g];而心脏和血液的放射性摄取较少,相应的T／NT分别为5．70±0．21和12．40±0．11。注射^99Tc^m-RET后4．5～6．0h肿瘤显影清晰。结论^99Tc^m-RET具有亲肺癌的特性,有可能成为一种亲肺癌显像剂。     

建立99Tcm标记联肼尼克酰胺多肽"显像剂"纤维膜组合文库

目的证明^99 Tc^m标记联肼尼克酰胺（HYNIC）多肽“显像剂”文库是^99 Tc^m显像剂研制中的有效方法。方法八肽组合文库采用人工点阵方式合成。HYNIC多肽通过C末端以及双B丙氨酸（连接体）共价连接在纤维膜上。用阻断剂阻断非特异结合位点后，将膜文库和人重组热休克蛋白70（HSP70）温育，冲洗。用生物素-亲和素法和抗体法筛选文库。对筛选阳性多肽化合物进行再合成、^99 Tc^m标记（以三羟甲基甘氨酸为辅助配体）以及体内分析。将人肺癌细胞株A549和H460接种于雌性裸鼠胸壁皮下，用于体内研究。结果^99 Tc^m标记文库显示，“显像剂”文库的质量较好。由于天冬酰胺-亮氨酸-亮氨酸-精-氨酸-亮氨酸-苏氨酸-甘氨酸多肽（NLLRLTG）对HSP70家族蛋白具有高度特异性，因此，采用^99 Tc^m-HYNIC—NLLRLTG为对照组。经筛选获得的15种阳性多肽化合物中，有8种^99 Tc^m化合物在体内肿瘤中的分布优于对照组，其中^99 Tc^m HYNIC-谷氨酰胺-甘氨酸-缬氨酸-亮氨酸-苏氨酸．甘氨酸-苏氨酸-精氨酸多肽（QGVLTGTR）在体内肿瘤中的分布最佳。活性肽NLLRLTG替代实验和肿瘤热疗研究表明，^99 Tc^m HYNIC—QGVLTGTR具有HSP70结合肽活性。结论^99 Tc^m标记HYNIC八肽化合物“显像剂”文库的设计可能为多肽显像剂的研制提供一种模式。     

99Tcm—HYNIC—A（D）A（D）APRPG的肿瘤与炎性反应兔模型显像研究

目的将抗肿瘤血管化显像剂99Tcm-联肼尼克酰胺-非天然型丙氨酸-非天然型丙氨酸-天然型丙氨酸-天然型脯氨酸-天然型精氨酸-天然型脯氨酸-天然型甘氨酸[HYNIC—A（D）A（D）APRPG]进行肿瘤与炎性反应的动物实验研究,评估其显像特异性。方法分别在10只新西兰兔左、右上肢建立炎性反应和肿瘤模型,按完全随机设计法将兔分为2组,每组分别静脉注射99Tcm-HYNIC—A（D）A（D）APPd与与99TcmRGD,分别在0．5,1,2,3,6和8h进行γ显像;前-组5只兔先进行18F—FDGPET／CT显像,24h后再注射”RmHYNIC—A（D）A（D）APRPG进行显像。采用SPSS10．0软件对数据行方差分析或t检验。结果99Tcm-HYNIC—A（D）A（D）APRPG显像只显示肿瘤组织清晰致密、血供丰富的区域,坏死区域不显影;炎性反应区域基本不显影。99Tcm-HYNIC—A（D）A（D）APRPG注射后2h肿瘤／炎性反应比值最高,为3．25±0．171,高于99Tcm-RGD的2．37±0．076（F=15．63,P〈0．01）;在0．5～6h99TcmHYNIC—A（D）A（D）APRPG和99Tcm-RGD、18F—FDG的肿瘤／炎性反应比值组间差异均有统计学意义（F：13．83—26．41,t=23．84和12．75,P均〈0．01）。结论99Tcm-HYNIC—A（D）A（D）APRPG有望成为-种能区分肿瘤和无菌性炎性反应的抗肿瘤血管化显像剂。     

99Tcm标记亲肿瘤三肽的实验研究

目的 进行99Tcm-精氨酸-谷氨酸-丝氨酸(RES)的亲肿瘤实验研究.方法 采用标准Fmoc固相合成法合成RES,在不同的试剂和温度(100 ℃或室温)条件下,以氯化亚锡为还原剂进行RES的99Tcm标记,优化标记条件.进行荷A549肺癌裸鼠99Tcm-RES显像并测定%ID/g,研究99TcmRES在荷瘤裸鼠体内的分布.比较兔炎性反应和肿瘤模型显像结果.结果 (1)酒石酸钠及氢氧化钠为缓冲剂,氯化亚锡为还原剂,100 ℃水浴10 min,RES放化纯最高达到85%;99Tcm-RES性能稳定,室温下放置6 h,放化纯仍达75%.(2)注射后0.5 h,99Tcm-RES多分布于心、肝、肾等血供丰富脏器,2 h血液的放射性(0.36%ID/g)降幅明显,仅相当于0.5 h(2.35%ID/g)的1/7;心、肝、肺的放射性降幅稍慢,但明显快于肿瘤;注射后0.5 h肿瘤放射性摄取为2.32%ID/g,6 h为1.54%ID/g,6 h后仍有超过60%的放射性滞留.99Tcm-RES注射后6 h肿瘤/血、肿瘤/心、肿瘤/肝、肿瘤/肺、肿瘤/脾和肿瘤/骨骼肌放射性比值分别为5.31,1.88,1.57,3.58,4.16和5.92.(3)荷瘤鼠显像发现肿瘤部位明显浓聚99Tcm-RES,而201Tl、99Tcm-MIBI在肿瘤部位未见明显浓聚.(4)兔炎性反应和肿瘤模型显像示肿瘤部位放射性明显浓聚,而炎性反应部位放射性无明显浓聚,注药后6 h肿瘤/炎性反应部位放射性比值为3.12.结论 用放射性组合化学文库筛选出的小分子RES是一种与肿瘤高亲和力的多肽,有望成为一种肿瘤显像剂.     

一种新的用于靶向化合物研发的体内高通量筛选方法

目的建立组织靶向化合物的体内完全随机高通量筛选模型：方法以氨基酸为原料，采用固相合成法合成C端氯化三肽组合文库。^99Tc^m-标记文库的结构通量为8000，即含有8000种不同化学结构的^99Tc^m-标记三肽化合物：体内筛选采用定位扫描和重复模式：实验动物采用SD大鼠和A549肺癌荷瘤裸鼠．通过测定每克组织百分注射剂量率（％ID／g）或显像，测定^99Tc^m-标记文库或单肽的组织分布。结果通过无创伤性显像或组织放射性计数测定组合文库的组织分布和代谢，实现体内完全随机高通量筛选，可用于发现、优化和设计具有组织特异性分布的（标记）化合物。这种组织靶向性分布有很高的化学结构特异性，在整个体内筛选过程中，非靶组织放射性本底同时受到监测。结论标记组合文库体内示踪技术是一种可靠、简易、灵敏的体内完全随机高通量药物筛选技术，可用于组织靶向药物（特别是放射性药物）的研究。