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fas基因与bcl-2反义RNA转导胃癌耐药细胞的药敏上调效应 总被引:7,自引:4,他引:7
目的比较fas基因和bcl-2基因在胃癌耐药细胞与非耐药细胞表达的差异,将fas基因和bcl-2反义核酸导入胃癌耐药细胞,并分析转导前后的细胞在mRNA与蛋白的表达水平,研究转导株与非转导株对化疗药物敏感性的区别.方法采用分子克隆技术将fas 基因和反义bcl-2片段分别插入真核表达载体pBK-CMV和pDOR-SV40的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将两个重组表达载体分别转染受体细胞SGC7901/ VCR,G418筛选克隆细胞,Northern blot, Western blot检测耐药细胞与非耐药细胞以及转导细胞中fas基因和bcl-2基因mRNA及其蛋白的表达,MTT法药敏实验检测转导细胞与非转导细胞对VCR、顺铂、5-FU 的敏感性.结果真核表达载体pBK-fas cDNA和pDOR-bcl-2 cDNA转导胃癌耐药细胞后,分别从2×105细胞中筛选出大约80和120个抗性克隆,转导率各为0.4‰和0.6‰,随机各挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,均获得了稳定的抗性细胞,我们将此命名为SGC7901 fas/ VCR cell和SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell. 杂交结果表明,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR与非耐药细胞相比,bcl-2基因的表达明显较高,而fas基因表达极其微弱. 转导株SGC7901 fas/ VCR cell的fas mRNA及其蛋白水平的表达显著高于非转导株,SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell中bcl-2蛋白的表达明显低于非转导株. 2株转导细胞对VCR、顺铂、5-FU的敏感性明显高于非转导株.结论胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比,bcl-2基因处于高表达状态,而fas基因处于极其低弱的表达状态. 通过脂质体介导的基因转染,有效地阻断了bcl-2蛋白在SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell的表达,明显增强了fas mRNA及其蛋白在SGC7901 fas/ VCR cell的表达. bcl-2反义核酸和fas基因转导胃癌耐药细胞后,对化疗药物的敏感性明显增加. 相似文献
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目的研究钙通道阻滞剂硝苯啶(NFP)长期口服对32例肝硬变门脉高压患者肝血流及肝功的影响.方法采用无创伤性核多功能仪首次通过法观察肝血流,同时记录服药前后体循环及肝功等变化.结果NFP口服4周以上,总体患者及Child_Pugh分级的各级患者均显示可明显减少门脉血流(kv),使肝动脉血流(ka)增加,而不影响肝脏的总血流(ka+kv);对平均动脉压(MAP)及心率(HR)等体循环的影响甚小,并可改善血清白蛋白、胆红素及ALT水平.结论NFP可长期用于临床降低肝硬变门脉高压,预防食管曲张静脉破裂出血 相似文献
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抗独特型抗体的制备与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
内影像抗独特型抗体可模拟外部抗原,刺激机体的免疫反应。其制备的关键步骤包括动物的选择,免疫原的制备、免疫的剂量及方法以及独特型抗体的鉴定。 相似文献
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HSP90β在细胞中的表达水平及化疗敏感性的相关研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:了解胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞SGC7901/VCR中HSP90β蛋白的表达,与化疗药物敏感性的关系及降低细胞HSP90β蛋白的表达是否影响化疗药物的敏感性。方法:用免疫组化法检测胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞SGC7910/VCR中HSP90β蛋白的表达,MTT法测定SGC7901/VCR细胞及其相的HSP90β蛋白低表达细胞AH-SGC7901和AH-SGC7901/VCR对 相似文献
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胃癌多药耐药研究新进展 总被引:4,自引:0,他引:4
胃癌为一常见肿瘤,在我国及日本发病率极高,危害着人民的生命。早期胃癌以手术为主,辅以化疗药物。晚期肿瘤则以化疗为主要手段。但由于耐药的产生,疗效往往不佳。因而促使人们对胃癌多药耐药性(multidrugresistance,MDR)问题进行深入研究。目前研究发现的与耐药有关的机制可归纳为以下几个方面:1.发生在细胞膜水平的药物摄取减少和外排增多,引起细胞内药物的绝对浓度降低,如由Pgp引起的耐药;2.发生在细胞质和细胞器水平的药物亚细胞分布的改变,使药物无法接近其作用靶点,引起药物有效浓度降低,如由多药耐药相关蛋… 相似文献
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前列腺E1的肝保护作用 总被引:11,自引:0,他引:11
刘宪玲 《国外医学:消化系疾病分册》2000,20(3):161-171
动物实验表明PGE1对实验动物肝损害有保护作用。临床研究表明,PGE1对急性爆发性及亚急性爆发性肝炎等重症肝炎,可使ALT降低、胆红素降低、PT缩短从而改善肝功能。PGE1通过增加肝血流,加速线粒体呼吸功能的恢复,稳定细胞膜微粘度的稳定性,降低细胞介导的肝细胞毒性,刺激肝组织cAMP的产生,增加ATP的水平,促进DNA的合成而实现其肝保护作用。PGE可引起多系统的不良反应,这些反应可在减量或停药后 相似文献
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Fas基因转导胃癌细胞的表达 总被引:6,自引:3,他引:6
目的将Fas基因导入胃癌细胞,建立Fas基因表达株,并比较转导前后mRNA与蛋白的表达水平.方法采用分子克隆技术将Fas基因插入真核表达载体pBKCMV的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞SGC7901,用G418筛选克隆细胞;以Southernblot,Northernblot,Westernblot检测Fas基因的表达.结果成功地构建了真核表达载体pBKFascDNA.转导细胞后,从1×105细胞中筛选出100个抗性克隆以上,转导率大于01%,随机挑选2个克隆扩增培养,获得了1株稳定的抗性细胞,从而有效地建立了Fas基因表达株(SGC7901Fascels).杂交结果表明,转导株与非转导株均有cDNA的表达,但转导株在mRNA及蛋白水平的表达均明显高于非转导株.结论Fas基因在胃癌细胞中处于低表达状态;通过真核表达载体的介导,Fas基因导入胃癌细胞后,能有效地表达FasmRNA及其蛋白. 相似文献