稳定转染靶向bcl-2的shRNA对胃癌SGC-7901细胞株增殖影响

目的探讨稳定转染靶向bcl-2的小发夹RNA（shRNA）对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响。方法构建针对bcl-2的shRNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞,筛选稳定转染的细胞克隆继续压力培养。RT-PCR方法检测稳定转染后SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达以及对细胞增殖和凋亡的影响。结果稳定转染shRNA后,SGC-7901细胞的bcl-2 mRNA表达明显下降;细胞增殖能力及凋亡率无明显变化。结论稳定转染shRNA能长效抑制SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达,为后续基因治疗研究提供了实验依据。     

稳定转染靶向bcl-2的shRNA对胃癌SGC-7901细胞株增殖影响

目的 探讨稳定转染靶向bcl-2的小发夹RNA(shRNA)对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响.方法 构建针对bcl-2的shRNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞,筛选稳定转染的细胞克隆继续压力培养.RT-PCR方法检测稳定转染后SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达以及对细胞增殖和凋亡的影响.结果 稳定转染shRNA后,SGC-7901细胞的bcl-2 mRNA表达明显下降;细胞增殖能力及凋亡率无明显变化.结论 稳定转染shRNA能长效抑制SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达,为后续基因治疗研究提供了实验依据.     

全自动洗片机胶片干燥不良的原因分析

随着我国经济和科技的发展，以及医院管理水平的不断提高，自动洗片机得到了广泛的应用，它既减轻了放射工作人员的劳动强度，提高了工作效率和影像质量，同时又为摄影条件的标准化、规范化、启动化提供了基本保证。但是由于自动洗片机的管理水平要求较高，在使用过程中难免出现这样那样的问题，常见的问题之一就是胶片干燥不良，甚至出现胶片粘贴现象，影响诊断，更不易长期保仔。我院向2001年10月使用自动洗片机以来，时常遇到这个问题，我们分析原因如下，以便同行借鉴。     

Bcl-2shRNA稳定转染联合γ射线对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响

目的 观察Bcl-2shRNA稳定转染联合γ线照射对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.方法 构建针对Bcl-2基因的干扰质粒pGPH1/GFP/Neo,经脂质体介导转染SGC-7901细胞,G418筛选稳定表达的细胞株,γ线照射后形成4组细胞,分别命名为SGC-7901(A组)、照射/SGC-7901(B组)、Bcl...     

稳定转染Bcl-2 shRNA对胃癌细胞SGC-7901化疗敏感性的影响

目的:探讨稳定转染靶向Bcl-2基因的短发夹RNA(shRNA)对胃癌细胞株SGC-7901化疗敏感性的影响.方法:筛选出稳定转染Bcl-2 shRNA质粒的胃癌SGC-7901细胞株,将其与不同浓度的氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂(DDP)作用,未转染的细胞作为对照.RT-PCR法检测稳定转染前后SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达水平,MTT法检测5-FU或DDP的IC50,流式细胞仪分析细胞的凋亡率.结果:稳定转染shRNA的胃癌SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达明显下降;shRNA联合5-FU的IC50为(14.36±1.63)mg/L,对照组为(35.62±1.95)mg/L,t=2.57,P＜0.05;shRNA联合DDP的半数抑制浓度(IC50)为(2.53±0.46)mg/L,对照组为(6.89±0.52)mg/L,t=2.52,P＜0.05;流式细胞术检测显示,shRNA联合化疗明显提高SGC-7901细胞的凋亡率,t=2.60,P＜0.05.结论:稳定转染Bcl-2 shRNA的胃癌SGC-7901细胞株,其Bcl-2 mRNA的表达能够在较长时间内受到抑制,并提高对化疗药物5-FU及DDP的敏感性.     

经载瘤动脉化疗栓塞联合射频消融治疗中晚期肝癌的疗效分析

目的探讨经载瘤动脉化疗栓塞（TACE）联合B超引导下射频消融（RFA）综合治疗中晚期肝癌的临床疗效。方法分析81例中晚期肝癌患者的治疗结果,其中36例采用TACE联合B超引导下RFA的综合治疗（综合组）,45例仅应用TACE治疗（单纯组）,两组皆随访3年,分析比较两组临床获益率及1、2、3年生存率。结果临床获益率（CR＋PR＋NC）综合组73．30％（26／36）,单纯组46．50％（21／45）,两组差异有统计学意义（P=0．047）。1、2、3年生存率综合组为94．4％（34／36）、77．8％（28／36）、58．3％（21／36）,单纯组为73．3％（33／45）、51．1％（23／45）、24．4％（11／45）,两组差异有统计学意义（P0．05）。结论经载瘤动脉化疗栓塞联合射频消融综合治疗中晚期肝癌疗效肯定,临床获益率高,患者1、2、3年生存率高,是一种有效的联合治疗方法。     

中晚期肿瘤患者导尿管伴随尿路感染的细菌学监测及抗菌药物应用

目的:探讨中晚期肿瘤患者导尿管伴随尿路感染的细菌分布以及抗菌药物的敏感性。方法:选取我院收治的中晚期肿瘤患者留置导尿期间发生尿路感染者183例,取尿液进行细菌培养和药物敏感试验。结果:183例患者共分离得到细菌菌株177株,以革兰阴性菌为主,检出104株,占58.76%,其中大肠埃希菌、克雷伯杆菌分别检出49株（27.68%）和31株（17.51%）;革兰阳性菌检出较少,检出73株,占41.24%,其中金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌分别检出29株（16.38%）和21株（11.86%）。以大肠埃希菌、克雷伯菌为代表的革兰阴性菌普遍对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦敏感,敏感性分别为100.00%、97.12%、97.12%,而对氨苄西林、哌拉西林以及头孢唑林的敏感性较低,仅为9.62%、23.08%和27.88%。以金黄色葡萄球菌和表皮葡挞球菌为代表的革兰阳性菌普遍对万古霉素、丁胺卡那敏感性较高,分别达到98.63%、91.78%,而对庆大霉素、红霉素敏感性较低,仅为6.85%、26.03%。结论:引起中晚期肿瘤留置导尿患者发生尿路感染的细菌多样,在早期可根据经验给予氨苄西林和万古霉素联合应用,并根据随后的药物敏感试验对治疗方案及时进行调整,合理应用抗菌药物。     

靶向bcl-2基因短发卡RNA干扰真核质粒表达稳定株筛选和建立

目的构建针对bcl-2基因的短发卡RNA(shRNA)干扰真核质粒表达载体,转染到bcl-2基因高表达的胃癌细胞株SGC-7901中,并筛选出稳定低表达bcl-2基因的细胞株。方法针对bcl-2基因的mRNA序列设计、合成4对寡核苷酸序列,插入质粒载体pGPH1/GFP/Neo中,经脂质体介导转染SGC-7901细胞。RT-PCR检测bcl-2基因在mRNA水平的变化,MTT法检测bcl-2基因沉默后胃癌SGC-7901细胞的增殖情况。基因沉默效果最好的一组,经G418筛选以得到稳定表达株。结果与对照组相比,转染成功后的细胞bcl-2基因在mRNA水平均显著下降,细胞增殖速度明显降低(t=2.41,P<0.05);并筛选出稳定表达shRNA2质粒的阳性克隆。结论本研究成功利用针对bcl-2基因的shRNA质粒载体筛选出稳定低表达bcl-2基因的SGC-7901细胞,为胃癌的基因治疗研究奠定了基础。     

人Bcl—2基因短发夹样RNA真核表达载体的构建和鉴定

目的构建人Bcl-2基因序列特异性的短发夹样RNA（Short Hairpin RNA，shRNA）质粒载体。方法根据Bcl-2基因序列及shRNA设计原则，化学合成4段编码短发夹RNA的寡核苷酸序列，将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGPH1／GFP／Neo中H1启动子的下游，重组构建RNAi质粒，同时设立阴性对照，并对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定。结果限制性内切酶PstⅠ和BamH Ⅰ酶切显示设计合成的shRNA编码序列被成功插入pGPH1／GFP／Neo质粒中，测序结果证实插入片断与设计序列完全一致。结论针对人Bcl-2的shRNA真核表达载体成功构建及鉴定为进一步研究Bcl-2功能奠定了良好的基础。