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目的 探讨张力反应性增强因子结合蛋白(tonicity-responsive enhancer binding protein, TonEBP)基因对巨噬细胞活性、迁移、增殖及吞噬功能的影响。方法 利用TonEBP-shRNA慢病毒感染Raw 264.7细胞,筛选稳定细胞株,Real time-PCR、Western blot评估干扰效率,选取干扰效率最高的慢病毒感染组及空载慢病毒感染组用于后续实验。各组细胞同步培养,孵育24 h后CCK-8法测定细胞活性,transwell实验观察细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞周期及吞噬功能。结果 成功建立并筛选出干扰TonEBP稳定细胞株,与正常细胞组相比,mRNA和蛋白的干扰效率均高于70％,差异具有统计学意义(P＜0.05);下调TonEBP表达可使细胞活性明显下降[24 h (0.39±0.02 vs 0.46±0.01),48 h(0.57±0.02 vs 0.63±0.02),72 h(0.71±0.02 vs 1.01±0.11),96 h(0.93±0.06 vs 1.42± 0.04),120 h(1.26±0.06 vs 1.56±0.09) ](P＜0.05),同时显著降低细胞迁移(88±7.00 vs 356±35.23)、增殖[(38.73±2.57)％ vs (50.20±2.29)％]及吞噬[(2.26±0.10)％ vs (5.63±0.42)％]能力,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论 干扰TonEBP的表达可有效抑制巨噬细胞活性,降低其迁移、增殖及吞噬能力,为继续探究与巨噬细胞相关的疾病提供实验依据。 相似文献
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目的研究曲美他嗪(trimetazidine TMZ)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)体外诱导中性粒细胞胞外核酸网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的影响及其与自噬的关系。方法密度梯度离心法提取小鼠骨髓中性粒细胞,ox-LDL体外干预建立NETs诱导模型;采用TMZ、LY294002、Rapamycin干预ox-LDL对NETs的诱导;免疫荧光法观察NETs标志物MPO-DNA的释放;PicoGreen试剂盒定量检测cfDNA/nets含量;Western blot检测髓过氧化物酶(MPO)、自噬相关蛋白Beclin-1、LC3b的表达。结果 ox-LDL以浓度-时间依赖的方式刺激中性粒细胞释放MPO-DNA复合物,使上清cfDNA/nets含量明显增高;细胞自噬相关蛋白LC3b、Beclin-1及MPO的蛋白水平亦随ox-LDL浓度增加上调; TMZ预处理能抑制NETs释放,降低LC3b、Beclin-1及MPO的蛋白表达,该结果可被PI3K通路阻断剂LY294002模拟,... 相似文献
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<正>近年来,随着医学以及诊疗技术的不断发展,心血管疾病的总体患病率和病死率较前些年有所降低~([1])。但女性患者的病死率始终居高不下,其中急性冠状动脉综合征(ACS)患者占有非常高的比例。ACS属于冠心病中急危重的临床类型,主要包括不稳定性心绞痛(UAP)、非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)、ST段抬高型心肌梗死(STEMI),罕见的类型还有自发性冠状动脉夹层引起的急性心肌缺血。研究 相似文献
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