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[目的]探讨PI3KC3/Beclin1复合物在染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)自噬中的调控作用。[方法]常规培养NR8383细胞,随机分为4组:对照组,矽尘组,3-MA组和3-MA干预组,分别孵育1、3、6、12、20 h后收集样品。采用蛋白免疫印迹方法检测自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬底物蛋白p62以及自噬相关蛋白Beclin1、PI3KC3;采用激光扫描共聚焦显微镜观察孵育不同时间的自噬免疫荧光表达情况;采用免疫共沉淀检测Beclin1复合物表达。[结果]免疫荧光结果显示,矽尘组LC3点状聚集绿色荧光亮斑随时间先增强后减弱,在6 h时荧光最强,且各时间点较对照组和3-MA干预组荧光亮斑增强;3-MA干预组LC3荧光标记绿色亮斑先增强后减弱,弱于矽尘组,但强于对照组。加入溶酶体抑制剂二磷酸氯喹后,各组LC3绿色荧光信号随时间均呈现增强的趋势。Western blot结果显示,矽尘组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值呈先增加后减少趋势,且在各个时间点均高于对照组(P 0.05);在LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值达最高的6 h时间点,矽尘组的值是对照组的248%,是3-MA组的372%。3-MA干预组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值也呈先增加后减少趋势;除1 h时间点外,余各时间点均低于矽尘组,但高于对照组(P 0.05);在LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值达最高的6 h时间点,3-MA干预组的值是矽尘组的90%,是对照组的223%。Beclin1、PI3KC3蛋白表达趋势与LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值一致,p62蛋白表达趋势与LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值相反。免疫共沉淀显示,矽尘组Beclin1与PI3K结合增加,3-MA干预后两者结合减少。[结论]矽尘诱导NR8383细胞的自噬活动随时间发生不同程度的改变,3-MA可下调矽尘诱导的NR8383细胞自噬活动,推测PI3KC3/Beclin1信号通路参与矽尘诱导肺泡巨噬细胞的自噬过程。 相似文献
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目的 探讨新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)疫情常态化防控背景下,≤5岁儿童急性咳嗽就诊行为及影响因素。方法 2021年11月—2022年1月采用多阶段整群随机抽样的方法在浙江省义乌市全部14个乡镇/街道中抽取50个群,每个群至少调查10名居住满6个月的≤5岁儿童。采用logistic回归分析儿童就诊行为与咳嗽性质和伴随症状的关系。结果 共调查浙江省义乌市≤5岁儿童564人,年龄(2.6±1.4)岁,男童296人,女童268人。调查对象近1个月内有急性咳嗽(<2周)174例,就诊115例(66.09%),湿性咳嗽/咳痰可增加咳嗽儿童就诊率(OR=8.14,95%CI:2.99~22.12,P<0.01)。结论 在COVID-19疫情背景下,义乌市≤5岁儿童咳嗽就诊率与疫情前无明显变化,湿性咳嗽/咳痰可能会增加咳嗽儿童就诊率,咳嗽伴随症状对儿童就诊率影响并不明显。 相似文献
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