99mTc-Annexin V检测早期凋亡多巴胺能神经元的实验研究

目的 研究放射性核素标记的膜联蛋白V(Annexin V)与凋亡的多巴胺能神经元的结合特性,探讨使用凋亡显像剂99mTc-Annexin V早期活体显像诊断帕金森病的可行性.方法 采用不同浓度的1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP+)处理大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)和人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)以诱导其凋亡(PC12 0～200 μm/L, SH-SY5Y 0～500 μm/L),FITC -Annexin V及碘化吡啶(propidiumiodide, PI)双染进行流式细胞仪凋亡检测.以99mTc-Annexin V与凋亡的细胞进行饱和结合实验及细胞摄取实验,研究凋亡细胞与Annexin V的亲和力及其摄取99mTc-Annexin V的动力学.结果 MPP+可诱导PC12细胞及SH-SY5Y细胞发生凋亡,并有明显的量效关系.凋亡细胞可特异性与99mTc-Annexin V结合,亲和力可达(7.16±1.78)nmol/L,每个凋亡的多巴胺能神经元表面的结合位点可达到(179±33)fmol/106cells (PC12)及(220±26)fmol/106cells (SH-SY5Y),且神经元的凋亡水平与其膜结合的99mTc-Annexin V放射性强度有相关性(P＜0.001).结论 凋亡的多巴胺能神经元与99mTc-Annexin V有高度亲和力,其所结合的99mTc-Annexin V放射性强度与细胞的凋亡水平相关,99mTc-Annexin V可用于检测多巴胺能神经元的早期凋亡.     

线粒体脑肌病伴乳酸酸中毒和卒中样发作综合征

线粒体病是一组线粒体基因或细胞核基因突变导致线粒体结构和功能异常,并由此引起多系统损害的疾病,以需氧量较高的脑和肌肉受累为主[1,2]。其临床表现多样,主要有线粒体脑肌病伴乳酸酸中毒和卒中样发作(MELAS)综合征、慢性进行性眼外肌瘫痪(CPEO)、肌阵挛性癫疒间伴肌肉破碎红纤维(MERRF)综合征、亚急性坏死性脑脊髓病(Leigh病)和以眼     

3-磷酸甘油醛脱氢酶与神经变性疾病

3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是糖酵解中的一个关键酶,它催化3-磷酸甘油醛脱氢氧化成为1,3-二磷酸甘油酸,并最终将能量转移给ADP生成ATP.     

RNA干扰靶向抑制三磷酸甘油醛脱氢酶表达对鱼藤酮所致神经毒性的影响

目的研究RNA干扰（RNAi）技术能否有效抑制三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）的表达以及对鱼藤酮所致神经毒性的影响。方法体外化学合成针对GAPDH基因的小干扰RNA（siRNA）,通过脂质体Lipofectamine2000瞬时转染后采用实时荧光定量PCR（real—time PCR）和蛋白免疫印迹分析（Western blot）进行干扰效果的鉴定;使用激光共聚焦荧光显微镜观察干扰对鱼藤酮诱导的GAPDH定位和结构改变的影响;用流式细胞仪检测线粒体膜电位变化。结果实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹分析显示,化学合成的siRNA可有效抑制细胞内GAPDH mRNA和蛋白水平的表达;激光共聚焦荧光显微镜观察显示,干扰GAPDH表达的细胞可减少鱼藤酮所致的GAPDH的聚集及核转位;流式细胞仪检测发现干扰GAPDH的表达可部分抵抗鱼藤酮所致的细胞线粒体膜电位的下降。结论下调GAPDH的表达可以减少鱼藤酮所致的细胞内GAPDH的聚集和核转位,减少线粒体膜电位的下降,提示GAPDH可能是鱼藤酮所致神经毒性的重要分子靶点。     

丁基苯酞对帕金森病细胞模型保护作用的初步研究

目的探讨丁基苯酞(dl-3-n-Butylphthalide,NBP)对鱼藤酮诱导的帕金森病细胞模型的保护作用及其机制。方法分别使用终浓度为0.1、1、10、100μM NBP和溶剂二甲基亚砜(DMSO)预处理SH-SY5Y细胞24h后,加入终浓度为200nM的鱼藤酮处理24h建立多巴胺能细胞损伤模型,观察各组细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率(Annexin V-FITC/PI)、线粒体膜电位(JC-1)、细胞内活性氧水平(DCFH-DA)。结果200nmol/L鱼藤酮处理SH-SY5Y细胞24h能够诱导细胞活性下降和细胞凋亡,NBP预处理后SH-SY5Y细胞存活率明显升高,细胞凋亡率降低,线粒体膜电位显著升高(P0.05),细胞内活性氧水平显著降低(P0.05),且随NBP浓度的增加对SH-SY5Y细胞的保护作用增强。结论NBP对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有良好的保护作用,线粒体保护可能是其作用机制之一。     

急慢性铊中毒一家六例临床特点及治疗

目的 探讨铊中毒患者的临床表现和治疗方法.方法 对2008年5月就诊于我院的6例确诊急慢性铊中毒患者的临床表现和治疗经过进行回顾性分析.结果 6例患者中男性4例,女 性2例,年龄12～50岁,来自同一家庭(为一对姐妹和各自的丈夫及儿子).其中5例患者[3例为急性中毒,2例为慢性中毒(半年内第2次中毒)]均以多发性周围神经炎起病,表现为肢体末端麻木、疼痛、感觉异常,伴或不伴消化道症状;1例为12岁男性患儿,尿铊浓度超过中毒量,却无相关的临床表现.治疗上采用补钾、利尿、导泻、口服普鲁士蓝(氰化铁合亚铁)、肌注二巯基丙磺酸钠等措施,其中2例同时采用血液灌流治疗.最后2例患者好转出院,2例转专科医院进一步治疗,另2例慢性铊中毒患者病情进展迅速,最后昏迷,因多器官功能衰竭而死亡.结论 铊中毒临床表现主要包括多发性周围神经炎、胃肠道症状和皮肤损害,对于出现类似症状的患者应高度警惕铊中毒的可能性,避免漏诊、误诊.治疗上除传统的普鲁士蓝效果肯定外,血液灌流亦可能是疗效更加肯定的措施.

Abstract：

Objective To further investigate clinical manifestations and management for thallium poisoning. Methods Clinical data of 6 patients who were hospitalized in Union Hospital of Tongji Medical College in May 2008 with diagnosis of acute or chronic thallium poisoning,were retrospectively analyzed.Results Six patients (4 male and 2 female) ,aged from 12 to 50,came from one family (two sisters with their husbands and sons). Five of them (3 acute and 2 chronic,for the second time in half a year,thallium poisoning) initiated with peripheral neuritis,represented with severe burning pain,numbness,paresthesia in the lower limbs,accompanied with or without gastrointestinal symptoms. A 12 year-old boy with obviously elevated urinary thallium concentration was asymptomatic. Blood and urinary thallium concentrations of the patients were determined by atomic absorption spectrophotometry and were all significantly elevated.Treatment was initiated using potassium supplementation,diuresis,oral laxatives,Prussian blue and intramuscular injection of dimercaptopropansulfonate sodium.Meanwhile two of them were treated with hemoperfusion. Finally,two of them recovered,another two were transferred to a specialized hospital for continuous treatment,and the rest two deteriorated rapidly with occurrence of unconsciousness and died of multiple organ failure. Conclusions The main clinical manifestations of thallium poisoning are multiple peripheral neuritis,gastrointestinal symptoms and dermatological changes. In order to avoid missed diagnosis and misdiagnosis,a high suspicion should be arose for thallium poisoning when a patient suffering from the above symptoms.Prussian blue was considered traditionally as an effective therapeutic strategy for the condition,and hemoperfusion may be a more effective treatment for acute thallium poisoning.     

99Tcm-HYNIC-Annexin V的制备及其与多巴胺能神经元凋亡模型的结合特性

目的 研究凋亡显像剂99Tcm-人膜联蛋白V(Annexin V)的制备及其与多巴胺能神经元凋亡模型的体外结合特性.方法 运用双功能螯合剂联肼尼克酰胺(HYNIC)进行99Tcm标记Annexin V,形成99Tcm-HYNIC-Annexin V,经Sephadex G-25柱层析分离纯化,采用快速薄层层析(ITLC)法检测放化纯.将99Tcm-HYNIC-Annexin V与经过1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理制模的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞进行体外细胞量及时间-温度结合实验、饱和结合实验和竞争结合实验,得到99Tcm-HYNIC-Annexin V与多巴胺能神经元凋亡模型的结合特性,并比较其与正常细胞及不同凋亡水平下细胞模型的结合特性.结果 ①99Tcm-HYNIC-Annexin V标记率(64.56±6.23)%,比活度(3.7～74)×105kBq/mg,放化纯(93.6±2.48)%,室温放置4 h后放化纯仍大于90%.②99Tcm-HYNIC-Annexin V与多巴胺能神经元凋亡模型的结合具有特异性、可饱和性,Scatchard图示平衡解离常数(Kd)为(7.16±1.78)nmol/L,最大结合容量(Bmax)为(178.73±32.62)fmol/106细胞.结论 多巴胺能神经元凋亡模型对99Tcm-HYNIC-Annexin V有良好的摄取,可进一步行动物体内研究.     

快速眼动睡眠期行为障碍与神经变性病发病机制研究进展

快速眼动睡眠期行为障碍系指快速眼动睡眠期肌肉失弛缓,并出现梦境(通常是暴力梦境)相关肢体运动(梦境演绎行为)。其人群发病率为0.38%~2.01%,在神经变性病尤其是α-突触核蛋白病患者中的发病率明显增加。快速眼动睡眠期行为障碍可早于α-突触核蛋白病数十年出现,因此可以作为预测神经变性病的早期标记。本文拟就近年来关于快速眼动睡眠期行为障碍发病机制及其与神经变性病之间的关系进行简要综述。     

在医学课程教学中建立首席教师负责制的思考

探索在医学课程教学中建立首席教师负责制。设置首席教师对医学教师队伍建设、医学整合课程建设及青年教师教学能力提升十分必要。首席教师应该拥有一定职业素养、学术威望,具备一定的管理经验,投入足够时间与精力;承担组建课程教学团队,明确教学目标,制定课程教学计划与学习指南,评价、反馈与优化课程等责任;在课程教学全过程中发挥核心、示范、督导的重要作用,推进教学改革与创新,保障医学课程教学质量,最终实现卓越医学人才培养目标。     

华中地区汉族人群SREBF1基因多态性 与帕金森病的相关性分析

目的：探索华中地区SREBF1基因突变位点SNP rs11868035与帕金森病（PD）的相关性。方法：本研究 纳入 471 例华中地区原发性 PD 患者和 536 例健康对照者，均为汉族。检测 PD 组和对照组及各亚组间 rs11868035位点等位基因和基因型频率。行文献检索及Meta分析，进一步探索rs11868035位点变异与中国 人群PD易患性的关联。结果：SNP rs11868035位点共3种基因型（AA/AG/GG）；PD组与对照组、各亚组之间 等位基因频率差异、基因型差异无统计学意义（P＞0.05）。Meta分析结果示该位点与中国人群PD发病可能 无明显相关性。结论：华中地区汉族人群SREBF1基因突变位点rs11868035与PD发病可能无相关性。