血管内皮生长因子在高原脑水肿形成中作用的实验研究

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在高原脑水肿形成中的作用。方法:建立大鼠模拟高原模型,应用脑干湿重比率法定量脑水肿情况、应用荧光素钠透过率测定BBB通透性、应用实时荧光定量RT-PCR法检测脑组织VEGF mRNA含量以及应用蛋白印迹法半定量脑组织VEGF含量。结果:大鼠在高原24 h后脑组织含水率明显增高(P<0.05),荧光素钠透过率显著增加(P<0.01);VEGF mRNA转录及其表达显著增高(P<0.001)。结论:VEGF表达在高原脑水肿形成中起重要作用。     

canstatin基因转染对肺癌A549细胞和血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

背景与目的　肿瘤的生长和转移需要大量新血管的生成,人血管能抑素(canstatin)是新近发现的高效内源性血管生成抑制剂,其抑制血管内皮细胞的作用已引起人们广泛关注。本研究的目的是探讨can statin基因在人肺癌A549细胞和人脐静脉内皮细胞HUV ECC中的表达及意义。方法　将canstatin基因通过电穿孔的方法转染人肺癌细胞A549和人脐静脉内皮细胞HUV ECC,行G418筛选获得转基因细胞克隆。用SDS PAGE电泳检测canstatin蛋白在转基因细胞培养上清液中的表达,以流式细胞仪分析细胞周期,并比较转基因和未转基因细胞的生长特性。结果　canstatin在转染组A549 细胞和ECC细胞表达并分泌至上清液中。canstatin基因转染组ECC的凋亡率(16.04%)显著高于空载体组(0.43%)和亲代细胞组(2.92%)(P<0.01),转染细胞生长明显受抑(P<0.01)。而转染组A549细胞的凋亡率(0.19%)与空载体组(0.13%)及亲代细胞组(0.07%)比较无显著性差异(P>0.05),细胞生长也未受明显影响。结论　canstatin能特异地抑制内皮细胞增殖,并诱导内皮细胞凋亡。     

耐药肺腺癌细胞株A549/CDDP生物学特性及染色体核型分析

目的 建立氯氨顺铂诱导肺腺癌耐药细胞株A549／CDDP。分析A549／CDDP生物学特性及染色体核型，为肺腺癌的治疗提供实验依据。方法 采用氯氨顺铂（Cis—diaminodichloroplatin，CDDP）大剂量冲击加逐步诱导法建立肺腺癌耐药细胞株A549／CDDP，MTT法检测细胞耐药指数．生物发光法测定细胞能量代谢，流式细胞仪测试细胞周期，染色体G显带技术和光谱核型分析（spectral karyotyping，SKY）技术分析染色体变化。结果 MTT检测结果表明。A549／CDDP对7种不同的化疗药物表现了不同的耐药性，其ATP、ADP、AMP含量显著降低，细胞周期无明显变化。G显带结果表明A549／CDDP染色体为亚三倍体，SKY分析出现数条衍生染色体。结论 CDDP可以成功诱导肺腺癌耐药细胞株A549／CDDP，A549／CDDP衍生染色体可能与肺腺癌耐药有关。     

HSV1-TK/GCV系统对人肺腺癌细胞A549生物学特性的影响

目的　观察转TK基因肺癌细胞对丙氧鸟苷 (GCV)的敏感性及TK GCV系统杀灭肿瘤细胞机制。方法　观察转TK基因、转空载体A5 49细胞 (下分别简称A5 49 TK、A5 49 pLXSN)和A5 49细胞形态学改变、生长增殖特性。GCV对 3种细胞生长抑制 (MTT法 )。电镜、流式细胞仪观察A5 49 TK、A5 49细胞经 5 0μmol LGCV作用 3d后细胞凋亡。 结果　转基因细胞变为不规则 ,呈多角型 ,透亮度下降 ,体外增殖能力下降 ,A5 49 TK ,A5 49 pLXSN ,A5 493种细胞倍增时间分别为 42 .3 5、41.75、3 6.18h。依据IC5 0 ,A5 49 TK细胞对GCV敏感性比A5 49细胞提高 46倍 ,电镜发现A5 49 TK细胞有凋亡小体 ,核呈半月征等 ,流式细胞仪发现A5 49 TK、A5 49细胞亚G0 G1 期分别为 ( 12 .2 1± 1.76) %、( 1.3 2± 0 .47) % ,两者比较P <0 .0 1。结论　A5 49 TK细胞获得了对GCV敏感性 ,TK GCV杀灭肿瘤细胞与诱导凋亡有关。     

核转录因子κB在TNF-α诱导人气道上皮细胞hBD-2表达中的作用

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人气道上皮细胞人β防御素-2(hBD-2)的表达及核转录因子κB(NF-κB)在hBD-2表达中的作用.方法用TNF-α和或NF-κB抑制剂PDTC处理体外培养人气道原代上皮细胞,RT-PCR法检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot检测细胞质IκB-α蛋白活性变化,凝胶迁移试验(EMSA)检测不同时相NF-κB活性的变化.结果TNF-α刺激0.5 h后可见人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达,并呈时间依赖性;PDTC可抑制hBD-2mRNA表达;NF-κB在TNF-α刺激1 h后明显活化,抗体超迁移率实验结果显示p65-p50异型二聚体NF-κB参与了NF-κB的活化.结论一定剂量的TNF-α可诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达,NF-κB在TNF-α诱导气道上皮细胞hBD-2mRNA起重要的调控作用.     

去甲肾上腺素在高原大鼠脑水肿形成中作用的实验研究

目的 探讨去甲肾上腺素（noradrenalin,NA）在高原脑水肿形成中的作用。方法 建立大鼠模拟高原7000m低氧低压模型。NA对照组大鼠分别给予NA 0mg／kg（生理盐水0．2m1）（正常对照）、1mg／kg（LNA）、2mg／kg（MNA）及5mg／kg（HNA）腹腔注射;NA高原组大鼠分别给予NA0mg／kg（生理盐水0．2m1）（高原对照）、1mg／kg（hLNA）、2mg／kg（hMNA）及5mg／kg（hHNA）腹腔注射后迅速置入低压舱内。应用脑干湿重比率法定量脑水肿情况,应用荧光素钠透过率测定BBB通透性。结果 正常对照、LNA、MNA及HNA组之间脑含水率差异无统计学意义（P〉0．05）。高原对照组脑含水率与正常对照组相比有明显增高,差异有统计学意义（P〈0．05）,hLNA、hMNA及hHNA组与相应LNA、MNA及HNA组相比脑含水率差异有统计学意义（分别为P〈0．01,P〈0．01,P〈0．05）。hLNA组脑含水率与高原对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）,hMNA及hHNA组脑含水率与高原对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。正常对照、LNA及MNA之间NaF1差异无统计学意义（P〉0．05）,HNA NaF1与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。高原对照组NaF1与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）,hLNA、hMNA及hHNA组与相应LNA、MNA及HNA组相比,NaF1均差异有统计学意义（分别为P〈0．01,P〈0．001,P〈0．001）。hLNA组NaF1与高原对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）,hMNA及hHNA组NaF1与高原对照组相比差异有统计学意义（分别为P〈0．05,P〈0．01）。结论 在高原状态下去甲肾上腺素可使血脑屏障通透性显著增高,诱发高原脑水肿加重。     

重组人源MPG基因真核表达载体构建及转染非小细胞肺癌多药耐药细胞的研究

目的构建人N甲基化嘌呤DNA糖基化酶(NmethylpurineDNAglycosylase,MPG)基因真核表达载体,并研究其在稳定转染的人非小细胞肺癌多药耐药细胞中的表达情况。方法应用分子克隆技术构建pCMVScript/MPG重组真核表达载体;应用脂质体介导的基因转染技术将其导入人非小细胞肺癌多药耐药细胞株A549/CDDP内;应用G418筛选稳定表达的转染细胞;应用PCR检测pCMVScript载体上的NEOr基因,应用RTPCR及Westernblot检测MPG基因的表达。结果构建产物经限制性酶切分析及基因序列测定证实为pCMVScript/MPG重组表达载体;转染pCMVScript/MPG载体组(MP组)及转染pCMVScript载体组(P组)细胞内检测到NEOr基因,未转染组(C组)则未检测到;MP组细胞内MPGmRNA水平较P组及C组细胞显著增高(P<0.01);MP组细胞内MPG蛋白质水平较P组及C组细胞显著增高(P<0.01)。结论成功地构建了人MPG基因表达载体,并在人非小细胞肺癌多药耐药细胞A549/CDDP获得了稳定、高效的表达。     

一条肺癌多药耐药相关基因的功能鉴定及染色体定位

目的 进一步分析从肺癌多药耐药细胞株(SPC-A-1／CDDP)克隆出的差异表达基因染色体的定位,并鉴定其耐药相关功能。方法 登录美国国家生物技术信息中心网(www.ncbi．nlm．nih．gov),根据克隆的目的基因序列数据,查询人类基因库,分析确定该基因在人类染色体上的位置。以DNA重组技术构建该目的基因的反义表达载体。电穿孔法将其转染多药耐药细胞株SPC-A-1／CDDP,采用半定量RT-PCR研究该基因表达受抑情况,并以MTT法分析转染细胞对几种化疗药物的敏感性改变。结果 电子信息学确定该目的基因定位在人类染色体的19q13．3～19q13．4位点上。成功构建该基因的反义表达载体,转染反义表达载体的SPC-A-1／CDDP细胞的目的基因mRNA含量明显减少,即基因表达受抑。MTT药敏测试发现转染了反义表达载体的SPC-A-1／CDDP细胞对顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、长春新碱、足叶乙苷和丝裂霉素6种化疗药物的耐药指数分别是3．87、3．28、6．71、2．65、2．11、5．02;对前五种化疗药物的耐药指数与对照细胞相比分别下降了2～3倍。表明该基因与肿瘤细胞的化疗敏感性密切相关。结论 该差异表达基因是一条肺癌耐药相关新基因,其在人类染色体的位置为19q13．3～19q13．4。     

大鼠γ—干扰素基因转染大鼠气道上皮细胞的实验研究

目的 探讨大鼠γ-干扰素基因转染大鼠气道上皮细胞的可行性。方法 构建重组大鼠γ-干扰素真核表达载体,将其转染大鼠气道上皮细胞,检测外源质粒的整合和培养上清液中γ-干扰素浓度和活性。结果 构建的重组载体中γ-干扰素的基因序列与Genebank中大鼠的γ-干扰素cDNA序列相同。转染后气道上皮细胞基因组DNA的PCR产物电泳可见转染的基因片段条带,培养上清液中γ-干扰素浓度和活性显著高于对照组。结论 本研究构建的重组大鼠γ-干扰素真核表达载体可成功地转染大鼠气道上皮细胞,整合入基因组DNA,并分泌有活性的γ-干扰素。     

医学进修生临床教学中的因材施教策略

大批的进修生已成为当今大型综合教学医院的重要人员组成,因此对进修生的培养不仅是衡量临床教学质量的重要指标,而且与临床医疗水平直接相关。通过对不同来源、不同知识背景以及不同进修目的进修生的研究,发现对不同层次进修生采用不同的培养策略是提高效率、增进临床带教质量的有效方法。