帕金森病细胞模型中维生素C调控SIRT3影响自噬水平的研究

目的探讨维生素C(Vit C)通过调控沉默信息调解转录因子3(SIRT3)影响帕金森病模型中PC12细胞自噬的意义和作用机制。方法培养拟神经元PC12细胞株,随机分组为:正常对照组(Control组)、单纯Vit C组(Vit C组)、帕金森病组(MPP~+组)和Vit C治疗组(Vit C+MPP~+组),在含有Vit C组中分别加入400μmol/L Vit C孵育6 h后,在含有MPP~+组中均加入700μmol/L MPP~+,模拟帕金森病的神经细胞损伤,孵育48 h后,利用细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)检测细胞存活率;利用小鼠乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH变化; Western blot(WB)检测PC12细胞中SIRT3、微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)的表达变化情况,免疫荧光检测细胞SIRT3、LC3-Ⅱ的表达变化情况。结果 CCK-8和LDH检测结果提示,Vit C能改善细胞生存环境,明显减轻帕金森病PC12细胞损伤,提高细胞活力;同样的,WB结果提示,与MPP~+组比较,Vit C上调SIRT3和LC3-Ⅱ的表达,促进神经元自噬的发生,组间差异有统计学意义(P 0. 05);同样的,免疫荧光结果显示,Vit C+MPP~+组中SIRT3和LC3-Ⅱ荧光强度均较MPP~+组增加。结论 Vit C可以激活SIRT3表达,并提高细胞自噬,发挥一种内源性的神经保护作用,拮抗MPP~+对PC12细胞的损伤。     

RP-HPLC同时测定维吾尔药材无花果叶中芦丁和补骨脂素含量

目的:建立维吾尔药材无花果叶薄层色谱鉴别及HPLC含量测定方法。方法:采用薄层色谱法鉴别无花果叶;使用Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.4%磷酸(40∶60);流速:1.0mL·min-1;检测波长:245nm;柱温:25℃;同时测定无花果叶中芦丁和补骨脂素含量。结果:薄层色谱法鉴别色谱斑点清晰,专属性强;芦丁和补骨脂素含量测定线性范围分别为0.1024～1.024μg,r=0.9998,n=5;0.041～0.7175μg,r=0.9999,n=5。芦丁平均回收率为103.7%(RSD=0.89%,n=6),补骨脂素平均回收率为90.9%(RSD=1.67%,n=6)。结论:该方法简便、准确,专属性强,可用于无花果叶药材的质量控制。     

莫让您的“健康引擎”失灵

男人都爱车，知道对爱车进行定期保养的重要性。其实，男性生殖健康的保养与汽车维护十分相似，如果不定期检查和维护，同样会出大问题。[第一段]     

HPLC法测定维吾尔药理血奇朗糖浆中没食子酸的含量

目的:建立高效液相色谱法测定维吾尔药理血奇朗糖浆中没食子酸的含量测定方法。方法:采用色谱柱为VP-ODS(4.6mm×250mm,5μm);流动相为0.4%磷酸:乙腈(97:3);流速1 mL·min-1;检测波长270nm;柱温;40℃。结果:没食子酸进样量在0.0506μg～0.4060μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为100.95%,RSD=3.9%。理血奇朗糖浆中没食子酸的平均含量为0.83 mg·mL-1。结论:本方法简便、准确,可用于理血奇朗糖浆的质量控制。     

PINK1介导的线粒体自噬在小鼠皮层神经元氧糖剥夺后表达和意义

目的探究不同时长氧糖剥夺(OGD)后小鼠皮层神经元中线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)表达的时空动态改变。方法 C57BL/6J小鼠皮层神经元原代培养7 d,以OGD不同时长(0 h、2 h、4 h、6 h、8 h)作为观察时间点。倒置显微镜下观察神经元形态变化;MTT比色法检测神经元存活率;蛋白印迹法(Western blot,WB)观察LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin表达的时间变化;免疫荧光观察PINK1OGD后表达的空间改变。结果 OGD严重损伤神经元活性,且随着时间延长细胞活性呈进展性下降趋势;OGD后自噬标志性分子LC3-Ⅱ和PINK1开始升高(4 h达到峰值)(P0.05),后进行性下降,而Parkin表达逐渐下降(P0.05);PINK1在胞浆可见均匀表达,在OGD后荧光强度短暂增高,并随OGD时间逐渐减弱。结论不同时长OGD可造成不同程度神经元损伤,并激活PINK1介导的线粒体自噬,PINK1可能通过影响线粒体在脑缺血损伤的病理生理过程中发挥作用。