登革2型病毒E蛋白免疫优势表位的筛选鉴定

目的 用噬菌体展示肽库筛选登革2型病毒(DEN2)E蛋白的抗原表位，并确定该抗原表位性质。方法 以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子，生物淘洗噬菌体随机12肽库，将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导，通过噬菌体展示肽序列与DEN2E蛋白的氨基酸一级结构的对比，初步确定E蛋白的抗原表位；用模拟该表位线性序列的合成十肽进行抗体结合试验、噬菌体竞争抑制试验及与DEN感染患者的血清学试验，确定其为免疫优势线性表位。结果 肽库淘洗获得的11个ELISA阳性的噬菌体克隆有相似的结构基序WFKKGSS，其展示肽与DEN2E蛋白390～398 AA序列有3～5个氨基酸相同。对应于DEN2E蛋白390～399AA的合成十肽能与淘洗单抗特异反应，并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。该合成肽与DEN2感染患者血清有较高的免疫反应性。结论 本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定的DEN2E蛋白(E390～398AA)线性序列为免疫优势表位，其对应的合成肽E10可望用于DEN2感染的快速诊断。     

Ⅱ型登革病毒E基因的克隆及其酵母表达

目的　克隆 2型登革病毒E基因并用酵母真核表达 ,获得全长的重组E蛋白 ,为其结构与功能的研究提供条件。方法　从感染DEN2 (NGC株 )后病变的C6 /36细胞上清中提取RNA ,通过RT -PCR扩增E基因片段 ,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒 ,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定 ,取Mut+菌诱导表达 ,SDS -PAGE、免疫印迹检测表达产物。结果　RT -PCR得到 1 5kb的E基因片段 ,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因 ;Mut+ 酵母转化菌可分泌表达约 6 9kDa的蛋白 ,与DEN2E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白。结论　成功将克隆的全长DEN2E基因在酵母菌中表达 ,获得的重组E蛋白具有免疫反应性。     

应用噬菌体随机肽库筛选2型登革病毒E蛋白的抗原表位

【目的】通过型特异性单抗与噬菌体随机 12肽库的生物淘洗 ,确定 2型登革病毒E蛋白分子的抗原表位。【方法】以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子 ,生物淘洗噬菌体随机 12肽库 ,将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导 ,通过展示肽序列与DEN2E蛋白的氨基酸一级结构的对比 ,确定E蛋白的抗原优势表位并用相应的合成肽验证。【结果】常规生物淘洗获得富含芳香族氨基酸并有aHWbW核心结构的克隆 ,确定为非特异的塑料结合噬菌体。改进淘洗方法后 ,肽库筛选的噬菌体阳性克隆有共同的结构模体WFKKGS ,与DEN2E蛋白分子的 390～ 397有 3～ 5个氨基酸相同。其对应的合成 10肽能与淘洗单抗特异反应 ,并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。【结论】本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定DEN2E蛋白 390～ 397氨基酸残基 (WFKKGSSI)存在一线性的B细胞抗原表位。     

肺炎衣原体PCR诊断盒的研制

肺炎衣原体ＰＣＲ诊断盒的研制广东省老年医学研究所广州５１００８０汪玎妍，蒋文玲，罗宪玲，李质怀，谭新洪，魏惠永，董婷肺炎衣原体是１９８９年版Ｂｅｒｇｅｙ＇ｓ系统细菌手册中正式命名的第三种衣原体，已于世界上多个国家和地区引起流行。主要引起急性呼吸道感染...     

115例非淋菌性尿道炎患者沙眼衣原体和三种支原体感染分析

为探讨非淋菌性尿道炎（ＮＧＵ）患者沙眼衣原体（ＣＴ）、解脲支原体（ＵＵ）、人型支原体（ＭＨ）和生殖支原体（ＭＧ）单种或混合感染情况,对１１５例ＮＧＵ患者进行了检测,结果如下。资料和方法　１１５例ＮＧＵ中男９１例,女２４例,年龄２０～６３岁,检测尿拭子或宫颈拭子中ＣＴ抗原用ＣＣ快速法,ＵＵ、ＭＨ用培养法,ＭＧ用ＰＣＲ法,其引物参照Ｊｅｎｓｅｎ的设计［１］。结果　见表１。表１　１１５例ＮＧＵ患者沙眼衣原体及三种支原体检测结果病原体检出阳性数男（ｎ＝９１）女（ｎ＝２４）合计（ｎ＝１１５）检出率（％）…     

奈替米星等对老年人肺部感染菌的敏感性

对２４０株老年人肺部感染临床分离菌用常规纸片法做定性药敏试验及Ｅ－ｔｅｓｔ法检测ＭＩＣ值定量药敏试验,两种方法结果基本一致。数据表明奈替米星地革兰氏阴性杆菌的抗菌活性接近阿米卡星和头孢他成于庆大霉素、妥布霉素与广谱青霉素;ＮＴＬ对葡萄球菌的作用为氨基糖苷类中最强的,也优于氟喹诺酮类与第三代头孢菌素。提示ＮＴＬ可用于老年人肺部革兰氏阴性杆菌与部分葡萄球菌感染。     

复合PCR同步鉴别葡萄球菌及其多重耐药基因的研究

葡萄球菌依然是当今医院与公共场所的一种主要病厦苗，在医院获得性感染中占重要地位。随着耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的流行及凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)致病作用的确定。加强对葡萄球菌致病机理与耐药机制的研究．巳成为控制其感染蔓延的当务之急。鉴于在临床微生物实验室中应用分子生物学技术对分离菌株进行快速耐药基     

登革2型病毒重组E蛋白的生物学特性分析

【目的】检测重组D2V全长E蛋白纯化后的免疫反应性与抗原性,为其亚单位疫苗研制奠定基础。【方法】酵母表达上清超滤浓缩后用金属螫合亲和层析(MCAC)法过柱,用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术观察蛋白条带。将纯化蛋白与组氨酸抗体、D2V E单抗进行斑点印迹和蛋白印迹,以确定纯化物是否为合组氨酸尾的D2V E融合蛋白,并用ELISA检测纯化E蛋白与不同DV抗体的结合反应。用纯化的重组D2V E蛋白免疫小鼠后测定其产生的抗体类型与滴度,以分析其抗原性。【结果】表达产物经MCAC柱纯化获得单一的相对分子质量为69×10~3的蛋白,组氨酸抗体与D2V E单抗的印迹试验证实该条带就是含多聚组氨酸尾型特异的重组E蛋白(rEgp),ELISA显示纯化的rEgp保留有免疫反应性及型特异性,内糖苷酶H消化证实其含有N联高甘露糖残基。接种rEgp可诱生针对D2V抗原与重组E蛋白的高效抗体。【结论】纯化的D2V全长E蛋白保留其免疫原性和免疫反应性,并具有型特异性。     

奈替米星等对老年人肺部感染菌株的敏感性

对２４０株老年人肺部感染临床分离菌用常规纸片法做定性药敏试验及Ｅ－ｔｅｓｔ法检测ＭＩＣ值定量药敏试验,两种方法结果基本一致。数据表明奈替米星（ｎｅｔｉｌｍｉｃｉｎ,ＮＴＬ）对革兰氏阴性杆菌的抗菌活性接近阿米卡星和头孢他啶,优于庆大霉素、妥布霉素与广谱青霉素;ＮＴＬ对葡萄球菌的作用为氨基糖苷类中最强的,也优于氟喹诺酮类与第三代头孢菌素。提示ＮＴＬ可用于老年人肺部革兰氏阴性杆菌与部分葡萄球菌感染。