大鼠肺泡巨噬细胞吞噬煤尘颗粒的实验研究

本实验用相差显微电影、溶酶体荧光定位和透射电镜等方法,研究了大鼠离体肺泡巨噬细胞吞噬煤尘的作用,并用二氧化矽和酵母菌作实验对照。结果表明,煤尘颗粒同二氧化矽类似,经过附着,迅速以吞噬体形式被摄入胞浆,而酵母菌呈典型的伪足包围和缓幔吞噬过程。实验证明,用吖啶橙作活细胞溶酶体定位是有效的。被标记的溶酶体发出强橙色荧光。当煤粒吞噬体进入胞浆后,常被多个溶酶体接触包围,形成次级溶酶体。电镜观察提示,煤尘可引起次级溶酶体膜的损害。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对二氧化硅致大鼠肺成纤维细胞基质金属蛋白酶表达升高的抑制

目的 探讨N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）对染矽尘大鼠肺成纤维细胞（LFb）基质金属蛋白酶（MMPs）MMP-2、MMP-9动态表达的影响.方法 将75只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和干预组.每组25只,模型组和干预组经气管注入SiO2粉尘悬液复制矽尘中毒模型,干预组在注入SiO2粉尘悬液前用NAC预处理;对照组给予同体积生理盐水.注射后1、3、7、14和28d分别获取LFb,用免疫细胞化学方法和逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法观察MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA的动态变化.结果 （1）模型组LFb各时间点MMP-2蛋白表达高于对照组,分别是对照组的1.343、2.198、3.492、2.834和1.405倍,mRNA表达分别是对照组的2.015、4.889、7.364、3.406和2.277倍,差异均有统计学意义（P＜0.01）;在1、3、7 d MMP-9蛋白表达分别是对照组的1.372、1.286和1.306倍,在1、3 dmRNA分别是对照组的1.797和1.698倍,差异均有统计学意义（P＜0.01）.（2）干预组在各时间点MMP-2蛋白表达低于模型组,在3、7、14、28 d高于对照组（分别是对照组的1.628、2.485、2.072和1.190倍）,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）;在各时间点mRNA表达低于模型组,高于对照组（分别是对照组的1.612、3.062、3.930、1.976和1.419倍）,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.在1、3、7 d MMP-9蛋白表达低于模型组,在3、7d高于对照组,在1、3 d mRMA表达低于模型组,高于对照组,分别是对照组的1.304和1.331倍,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 NAC能抑制SiO2所致大鼠LFb的MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA表达的升高.     

脑创伤后神经细胞凋亡与ERK信号传导途径

脑作为高级中枢其伤后自我修复能力差,伤残率、病死率高,使创伤性脑损伤(traum atic brain in jury,TB I)成为影响家庭安定、社会经济发展的公害之一。因此,研究创伤性脑损伤的发生发展机制具有重要的社会意义。脑创伤后除可直接导致神经细胞坏死外,各种有害因素还可通过一定的途径,将信号转导到核内引起细胞核反应,启动许多基因表达的变化,发挥持久性作用,最终导致迟发性神经细胞死亡,即凋亡(apop-tosis)。即使这些有害物质得以清除,但所激活的信号分子仍会继续发生级联反应,即产生放大效应,因此,深入探讨脑创伤后神经细胞死亡的信号传导…     

依达拉奉对脑缺血再灌注损伤后p-ERK1/2表达的影响

目的:研究依达拉奉对脑缺血再灌注细胞损伤的影响及p-ERK1/2在此过程的作用。方法:将180只雄性ICR小鼠随机分为假手术组、生理盐水治疗组和依达拉奉治疗组。各组于缺血再灌注后分为30min、3h、6h、24h、48h等5个亚组。采用线栓法建立小鼠局灶性脑缺血再灌注模型。治疗组于脑缺血开始及再灌注后12h分别腹腔注射依达拉奉3mg/kg或等量生理盐水,于24h后进行小鼠神经功能学评分;应用免疫组织化学及Westernblot检测p-ERK1/2蛋白表达水平的变化;利用原位缺口末端标记法(TUNEL法)研究神经细胞凋亡的变化。结果:与生理盐水治疗组相比,依达拉奉治疗组小鼠神经行为学评分明显减少(P<0.05);p-ERK1/2免疫阳性细胞及蛋白表达明显减少(P<0.05);凋亡细胞也减少(P<0.05)。结论:依达拉奉能通过抑制与氧化应激有密切关系的p-ERK1/2信号通路显著减轻脑缺血再灌注损伤后神经细胞损伤。     

海马区c-fos基因表达在大鼠脑创伤后认知功能障碍中的作用

目的 探讨大鼠脑创伤后海马区c-fos基因表达及对学习记忆功能的影响.方法 建立Marmarou大鼠脑创伤模型,采用分子原位杂交技术和Morris水迷宫分别观察大鼠伤后海马区c-fos基因表达变化及空间学习记忆能力的改变. 结果 伤后30 min海马区神经元即出现c-fos mRNA的表达,1～3 h达高峰,伤后24 h表达基本消失;Morris水迷宫实验,大鼠伤后存在空间学习记忆功能障碍.结论 脑创伤可引起c-fos基因在海马区的表达上调,通过介导延迟性神经元细胞死亡,影响细胞间的信息传递,参与认知功能的损害.     

改良的眼球火棉胶——石蜡双重包埋法

眼球切片是组织学实习课中不可缺少的标本,但它的制作过程却相当复杂繁琐。传统的制作方法,大多采用火棉胶包埋,滑动式切片机切片。但存在着周期长、切片厚、造价高、步骤繁琐等一系列问题,加上我室又短缺火棉胶切片机,因此眼球标本的制作,一直是困扰我们的一个难题。经过我室技术人员不断的摸索和实践,探讨出一种在现有设备条件下,能够生产出完全符合教学要求的眼球标本制作技术。方法简单可靠,现报告如下。1　材料与方法1.1　取材固定　取人或动物新鲜眼球,保留视神经1cm左右,以便于固定。将眼球固定于AGFD固定液中,1周后将原液倒去一半…     

微管相关蛋白1轻链3及Beclin-1在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达

目的观察自噬相关蛋白——微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、Beclin-1在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达,从细胞自噬角度探讨硅沉着病形成的分子机制。方法 50只成年雄性SD大鼠随机分为2组(n=25):对照组和硅沉着病模型组,每组再分5个时相组。采用非暴露气管灌注二氧化硅(SiO2)粉尘混悬液法(50g/L)建立大鼠硅沉着病模型。分别于造模后1、3、7、14及28 d分批处死5只大鼠,进行原位支气管肺泡灌洗,获取肺泡巨噬细胞,进行培养纯化和富集后用于后续研究。HE染色及透射电子显微镜观察肺泡巨噬细胞形态学改变;免疫细胞化学法检测LC-3、Beclin-1的表达及分布;免疫印迹法检测LC-3、Beclin-1的蛋白表达量。结果与对照组相比模型组肺泡巨噬细胞体积较大,胞质丰富,部分细胞内可见硅沉着吞噬颗粒,电镜下可见自噬体形成;模型组LC-3、Beclin-1在各时间点的表达较对照组均增多(P0.05),1 d即开始增多,随着时间的延长表达逐渐增多,至14 d时达高峰(P0.05),28d时回落,但仍高于对照组的表达。结论在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中有自噬的激活,肺泡巨噬细胞自噬参与了大鼠硅沉着病的病理进程。