TRAIL 基因转染对人宫颈癌 Hela 细胞凋亡的影响

目的：探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡配体（ TRAIL）基因对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法将构建的真核表达质粒pEGFP-TRAIL用Lipofectamine2000转染试剂盒转染到Hela细胞中,共聚焦显微镜下观察质粒的表达,分别用DAPI细胞核染色法和四甲基偶氮唑蓝（ MTT）比色法细胞染色法检测Hela细胞凋亡率。结果真核表达质粒pEGFP-TRAIL构建成功且能在Hela细胞中持续表达;转染真核表达质粒pEGFP-TRAIL的Hela细胞、转染空载体pEGFP-C1的Hela细胞凋亡率分别为12．1％、61．2％,两组比较,P＜0．05。结论外源性TRAIL基因可诱导Hela细胞凋亡。     

外源性TRAIL基因转染联合氯喹诱导胶质瘤U251细胞凋亡

目的探讨外源性肿瘤坏死因子凋亡相关诱导配体(TRAIL)联合氯喹对U251细胞凋亡的作用。方法构建稳定表达TRAIL的质粒p EGFP-TRAIL,然后转染到胶质瘤细胞系U251细胞中(TRAIL组),以p EGFP-C1质粒为阴性对照,以不转染质粒为空白对照;将氯喹(50μmol/L)加入到转染p EGFP-TRAIL质粒U251细胞培养基中,作为联合组。共聚焦显微镜检测GFP-TRAIL蛋白表达,MTT法检测细胞抑制率,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,免疫印迹法检测GFP-TRAIL和Cleaved caspases-8蛋白表达。结果质粒转染后,共聚焦荧光显微镜检测结果显示,p EGFP-C1在细胞质中成弥散分布;而GFP-TRAIL在细胞质中成聚点分布,且荧光表达可以持续48 h以上;免疫印迹法分析结果显示TRAIL组TRAIL蛋白表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P0.05)。联合组细胞增殖抑制率[(47.22±0.15)%]明显高于阴性对照组[(3.21±0.04)%,P0.05]和TRAIL组[(23.88±0.22)%,P0.05]。联合组细胞凋亡率[(41.62±0.44)%]明显高于空白对照组[(2.14±0.09)%,P0.05]、阴性对照组[(3.46±0.17)%,P0.05]和TRAIL组[(22.48±0.43)%,P0.05]。联合组Cleaved caspases-8蛋白表达水平明显高于阴性对照组、TRAIL组(P0.05)。结论外源性TRAIL基因转染后可以在细胞中稳定表达并诱导细胞凋亡,与氯喹联合应用可以增强TRAIL诱导的细胞凋亡,其机制可能是氯喹抑制细胞自噬。     

氯喹通过抑制自噬促进TRAIL诱导的胶质瘤细胞凋亡

目的探讨氯喹对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的胶质瘤细胞凋亡的影响。方法体外培养人脑胶质瘤细胞U251和Hela细胞,分为对照组、氯喹组、重组人TRAIL蛋白(rhTRAIL)组和联用组(氯喹与rhTRAIL联合应用);MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,共聚焦显微镜检测GFP-LC3的分布判断细胞自噬水平,Western Blot检测cleaved caspase-8的表达水平。结果氯喹和rhTRAIL均显著增加U251细胞和Hela细胞自噬水平,而且联用较单独应用自噬水平更高,Hela细胞自噬水平明显高于U251细胞。U251细胞和Hela细胞增殖抑制率和细胞凋亡率:氯喹组与对照组均无统计学差异(P0.05),rhTRAIL和联用组均明显高于氯喹组(P0.05),联用组明显高于rhTRAIL组(P0.05)。氯喹组和对照组Cleaved caspases-8水平无统计学差异(P0.05),rhTRAIL和联用组均明显增高(P0.05),联用组明显高于rhTRAIL组(P0.05)。结论氯喹能通过抑制细胞自噬,增强TRAIL诱导的U251细胞凋亡。