大鼠GAD65基因慢病毒载体的构建及其在MSCs中的表达

目的构建谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)重组慢病毒表达载体,感染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并进行鉴定。方法 PCR法扩增GAD65基因,构建LV5-GFP-GAD65慢病毒载体;与包装质粒共转染293T细胞包装病毒;将慢病毒感染大鼠MSCs,荧光显微镜鉴定转染率,Western blot检测GAD65的表达。结果双酶切及测序结果表明LV5-GFP-GAD65慢病毒载体构建成功;包装病毒产生的病毒液滴度为5×107TU/ml;慢病毒感染大鼠MSCs的转染率高于90%,Western blot结果显示GAD65蛋白表达比对照组明显升高。结论 GAD65重组慢病毒载体构建成功,包装得到高浓度病毒液,感染大鼠MSCs能稳定过表达GAD65蛋白,为进一步探索侧脑室注射基因化的MSCs治疗癫痫奠定实验基础。     

葛根素通过抑制背根神经节Nav1.7上调治疗神经根性疼痛

目的：探究传统中药葛根素(puerarin, PU)对腰椎间盘突出症引起的神经根性疼痛的作用及机制。方法：采用自体髓核(neucleus pulposus, NP)移植的方法复制大鼠腰椎间盘突出症的模型。实验一：20只大鼠用完全随机化分组法分成假手术组(sham, n=4)和NP组(n=16),NP组采用免疫荧光染色方法检测背根神经节(dorsal root ganglia, DRG)中电压门控钠通道Nav1.7的表达,ELISA法检测DRG和脑脊液(cerebrospinal fluid, CSF)中肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)的含量;Western blot方法检测DRG组织TNF-α的表达。实验二：40只大鼠分为五组(n=8):sham组;NP移植组;NP+PU组;NP+Veh组;NP+PU+TNF-α组,对NP移植大鼠连续7天腹腔注射葛根素(100 mg/kg,每日1次)观察镇痛效果;在术后0、3、5、7、14天进行疼痛行为学检测,机械刺激缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold, MWT...