脑肿瘤干细胞壁龛与肿瘤微血管

脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,占神经系统原发肿瘤的50％以上。尽管目前在外科手术、放疗和化疗等多种治疗方法上有了很大的提高,但多数患者的预后仍不理想。其原因主要为脑胶质瘤组织中的脑肿瘤干细胞(brain tumor stem cell,BTSC)拥有高度的自我更新和增殖的潜能,对于常规治疗手段有着较强的耐受性[1]。     

PiB对胶质瘤细胞增殖与侵袭能力的影响

目的探讨PIN1抑制剂Pi B对U87胶质瘤细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法人胶质瘤细胞系U87常规培养,取对数生长期细胞进行试验,以1.0μmol/L Pi B处理U87细胞48 h为实验组,未经任何处理的U87细胞作为对照组。RT-PCR和Western blotting检测PIN1基因的m RNA和蛋白表达。免疫荧光检测阳性细胞数。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的改变。MTT比色法检测Pi B对细胞增殖的抑制作用。结果与对照组相比,实验组细胞PIN1基因的m RNA和蛋白表达水平明显下调,PIN1阳性细胞数明显减少,细胞抑制率明显,且与药物剂量和作用时间成相关性,细胞迁移和侵袭能力下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Pi B可靶向抑制PIN1基因的m RNA和蛋白水平表达,进而抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

七厘散外敷治疗褥疮

七厘散出自《良方集腋》一书,有活血散瘀、通经定痛、止血、生肌敛疮之效,既能内服,又能外用,常用于治疗跌扑损伤、闪腰岔气、骨折、创伤出血等所致的瘀血作痛.褥疮临床上较常见,我们采用疮面撒布“七厘散”治疗6例,获得了较满意的效果.药物组成及制法血竭32克儿茶6.5克 硃砂4.0克红花32克乳香3.2克没药3.2克麝香0.4克冰片0.4克其中血竭、儿茶、红花、乳香、没药另研过筛,硃砂研水飞,麝香、冰片另研后下,按掺药要求,研为极细粉末(研之无声为度).使用方法及注意事项首先对患部给于清创,除去坏死组织,然后将七厘散均匀撒布于疮面上,其厚度以隐约可见基底组织为佳,然后再盖上凡士林纱条,最后以消毒敷料包扎.治疗初期,疮面渗液较多,若敷料被渗液浸     

胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区甲基化检测及意义

目的检测胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区甲基化表达,并探讨其Nanog基因表达的关系。方法使用无血清悬浮培养法获得胶质瘤干细胞并鉴定;采用甲基化特异性多聚酶链反应(MSP)分别检测胶质瘤干细胞和胶质瘤细胞系U87中Nanog基因启动子区甲基化状态,实时定量多酶链反应(RT-PCR)检测相应细胞中Nanog表达情况。结果由U87胶质瘤细胞系成功获得胶质瘤干细胞(GSCs);MSP检测胶质瘤干细胞和U87细胞系Nanog启动子区皆呈非甲基化状态,且胶质瘤干细胞中Nanog非甲基化程度高于U87细胞系(t=6.988,P=0.000)。实时定量PCR结果显示胶质瘤干细胞中Nanog mRNA相对表达量高于U87细胞系。结论胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区呈非甲基化状态,可能与Nanog基因表达有关,且可能促进Nanog的转录并维持着胶质瘤干细胞的恶性生物学活性。     

胶质瘤组织和细胞系中 Nanog 基因启动子区甲基化检测

目的：检测胶质瘤组织和细胞系中 Nanog 基因启动子区甲基化状态与 Nanog 基因的表达,并探讨其在胶质瘤发展中的作用。方法采用甲基化特异性 PCR(MSP)法分别检测正常脑组织、胶质瘤组织、胶质瘤癌旁组织、胶质瘤细胞系 U87和 U251中 Nanog 基因启动子区甲基化状态,实时定量 PCR(RT-PCR)法检测相应组织和细胞系中 Nanog 表达情况。结果 MSP 法检测胶质瘤组织 Nanog 基因启动子区呈非甲基化状态,且非甲基化检出率(58．82%)高于癌旁组织(13．63%),差异有统计学意义(χ2=14．852,P <0．01)。对MSP 法检测结果行灰度值分析,高级别胶质瘤中 Nanog 基因启动子区非甲基化程度高于低级别组。 U87和 U251细胞系中 Nanog 基因启动子区呈非甲基化状态。 RT-PCR 结果显示高级别胶质瘤中 Nanog mRNA 相对表达量高于低级别组, U87和 U251细胞系中 Nanog mRNA 的转录明显增多。结论胶质瘤中 Nanog 基因启动子区呈非甲基化状态,且可能促进 Nanog 基因的转录,影响胶质瘤的发生与发展。     

PEX基因对C6胶质瘤干细胞MMP-2和VEGF表达的影响

目的 探讨PEX基因对C6胶质瘤干细胞(GSCs)中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用血清培养基培养C6胶质瘤细胞系,再取其单细胞悬液悬浮培养于无血清培养基中传代培养.采用单细胞克隆和免疫荧光染色分离鉴定GSCs,运用本实验室成功构建的重组子pDsRed2-C1-PEX,以脂质体为介导转染体外培养的GSCs,逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检验真核表达载体在GSCs中的表达及PEX基因对GSCs表达MMP-2mRNA、VEGFmNA的影响.结果 成功培养出GSCs并成功转染,PEX在GSCs中高表达并且体外对MMP-2、VEGF的表达有明显抑制作用,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PEX基因可以在GSCs中表达,并且体外可以抑制MMP-2和VEGFmRNA在GSCs中的表达,为胶质瘤的治疗奠定理论基础.     

胶质瘤中 Nanog 启动子区组蛋白修饰的检测及意义

目的检测胶质瘤组织中Nanog启动子区组蛋白修饰与Nanog的表达，并探讨其在胶质瘤发展中的作用。方法Westernblot检测胶质瘤及正常脑组织中抗组蛋白H3乙酰化（H3ac）及抗H3K9三甲基化（H3K9me3）蛋白的表达．染色质免疫共沉淀．（ChIP）Real—timePCR技术检测Nanog启动子区域组蛋白H3乙酰化及H3K9甲基化水平，Real—timePCR检测相应组织中NanogmRNA表达情况。结果Westernblot结果显示：胶质瘤组织中H3ac的表达量较正常脑组织显著增高（F=72．80，P=0．00），H3K9me3的表达量较正常脑组织显著下调（F=84．79，P=0．00）。ChIP—Real—timePCR检测显示：胶质瘤中Nanog启动子区组蛋白H3乙酰化水平高于正常脑组织（F=59．34，P=0．00），H3K9甲基化程度低于正常脑组织（F=74．88，P=0．00）。Real—timePCR结果显示：高级别胶质瘤中NanogmRNA相对表达量高于低级别胶质瘤（t=11．41，P=0．00）。结论Nanog启动子区的组蛋白修饰可调节其蛋白的表达，并且是影响脑胶质瘤的发生和发展的重要机制之一。     

组蛋白H3乙酰化对脑胶质瘤中Nanog基因的调控作用

目的：探讨组蛋白H3乙酰化修饰对脑胶质瘤增殖相关标记因子Nanog的调控作用。方法体外培养胶质瘤U87细胞,用不同浓度的Apicidin在不同时间内干预U87细胞作为实验组,另设加入DMSO溶剂的DMSO组,及不加药的空白对照组。MTT增殖实验观察Apicidin对细胞增殖的影响,并选出合适的干预浓度。Real-time PCR检测Nanog mRNA表达水平变化,Western blot检测组蛋白H3乙酰化及Nanog蛋白水平,染色质免疫共沉淀（ChIP） Real-time PCR技术检测Nanog启动子区域组蛋白H3乙酰化水平。结果 MTT结果显示：实验组细胞生长出现显著抑制,48 h内细胞增殖的半数抑制浓度IC50为（1.74±0.13）μmol/L。与空白对照组比较,实验组脑胶质瘤U87细胞中Nanog mRNA表达降低46.52%±0.53%（P＜0.05）,H3乙酰化水平和Nanog蛋白也均明显降低（P＜0.05）,实验组Nanog启动子区组蛋白H3乙酰化水平降低46.52%±0.82%（P＜0.05）。结论在脑胶质瘤细胞系中,组蛋白H3低乙酰化水平抑制Nanog表达,Nanog受组蛋白H3乙酰化修饰的调控。