h载脂蛋白E4/h淀粉样前体蛋白转基因鼠自发变换行为的研究

目的 建立h载脂蛋白E4(h-apo E4)/h淀粉样前体蛋白(h-APP)双转基因鼠模型,探讨人apo E4及人突变APP基因在脂质代谢及早老痴呆疾病(AD)中的作用.方法 将h-apo E4转基因鼠及h-APP转基因鼠交配,建立h-apo E4/h-APP双转基因鼠.通过酶法检测鼠血清胆固醇.Y迷宫检测鼠自发变换行为.结果 经聚合酶链反应初选,Southern杂交进一步鉴定,获得h-apoE4/APP双转基因鼠(10只).h-apo E4/h-APP转基因鼠血清胆固醇水平[9月龄(2.76±0.75)mmol/L,12月龄(3.35±1.23)mmol/L]明显高于同龄对照组鼠(10只)[9月龄(2.03±0.30)mmol/L,12月龄(2.16±0.50)mmol/L](P＜0.05),分别是同龄对照组鼠的1.3倍和1.2倍.12月龄h-APP转基因鼠和h-apo E4转基因鼠血清胆固醇水平[h-APP鼠(2.38±0.37)mmol/L,h-apo E4鼠(2.67±0.59)mmol/L]均明显高于同龄对照组鼠[(2.16±0.5)mmol/L](P＜0.05).转基因鼠自发变换行为[h-apo E4/h-APP(0.74±0.03)%,h-APP(0.80±0.05)%,h-apo E4(0.72±0.07)%]与对照组鼠[(0.95±0.06)%]的差异有统计学意义(P＜0.01或＜0.05).结论 h-apo E4基因与血清胆固醇水平有关,h-apo E4基因及h-APP基因的异常表达对实验鼠的空间记忆能力有影响.     

cDNA微阵列分析人apoE4转基因鼠肾脏基因表达谱的变化

目的研究人apoE4转基因鼠肾脏的基因表达谱变化.方法分别提取人apoE4转基因鼠和正常C57BL/6J小鼠的肾脏总RNA,经逆转录合成cDNA探针后分别与鼠cDNA表达点阵杂交,再用ESTblot软件进行分析,并用Northern印迹证明基因表达的改变.结果人apoE4转基因鼠肾脏中有38个基因的mRNA表达升高,22个基因的mRNA表达降低.其中血浆谷胱甘肽过氧化物酶前体、视黄酸γ受体和白介素5受体等基因的表达明显增加.B-raf原癌基因、促红细胞生成素受体、整联蛋白α4的基因表达显著降低.Northern杂交证明转基因鼠肾脏的c-Jun基因表达升高.结论人apoE4转基因鼠肾脏的c-Jun、血浆谷胱甘肽过氧化物酶前体、白介素5受体等基因的表达增加;促红细胞生成素受体、整联蛋白α4等基因的表达减少.     

先天性骨-肾畸型综合征小鼠C57BL/6·KM-1d同源导入近交系的生化基因位点检测

利用经典遗传学的杂文－互交方法将昆明（ＫＭ）小鼠携带的先天性骨─肾畸形综合征致病基因１ｄ导入遗传背景已知的Ｃ５７ＢＬ／６近交品系小鼠中，建立Ｃ５７ＢＬ／６－１ｄ同源导入近交系。本实验随机挑选第六、七循环Ｃ５７ＢＬ／６－１ｄ动物共１２只，采用蛋白质和同工酶电泳方法对位于共九对染色体上的１４个生化标记基因位点进行检测，结果表明，第六循环的Ｃ５７ＢＬ／ｅ－１ｄ在Ｅｓ－１和ＧＰｄ－１位点的等位基因为杂合型，至第七循环，Ｃ５７ＢＬ／６－１ｄ动物的１４个位点全部为纯合子，与Ｃ５７ＢＬ／６基因型一致。     

hApoE7转基因小鼠纯合子的培育和鉴定

目的：载脂蛋白E(apoE)是血浆中参与脂质代谢的重要蛋白质，并且与迟发型早老性痴呆(AD)相关。为从整体水平研究人突变ApoE基因剂量与效应的关系，我们拟培育C57BL/6-hApoE7纯合子转基因小鼠。方法：将经Southern杂交鉴定为阳性的F1代小鼠进行互配，仔代经PCR初筛，再行Southern杂交鉴定，杂交结果经扫描定量分析以确定hApoE7基因整合的拷贝数，纯合子小鼠的拷贝数为杂合子的两倍。经此法鉴定的纯合子小鼠与正常C57 BL/6小鼠进行侧交以进行进一步的鉴定。结果：Southern杂交鉴定出F1代转基因小鼠6只，F2代转基因小鼠7只，其中纯合子3只。将所得到的纯合子小鼠与正常的C57 BL/6小鼠交配，仔代鼠经PCR鉴定结果全部为阳性。结论：通过培育C57 BL/6-hApoE7纯合子转基因小鼠，发现人ApoE7基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传，转基因的遗传特征符合常染色体单位点整合。     

转人载脂蛋白Eε4和突变淀粉前体蛋白基因小鼠的建立

将人载脂蛋白(ApoEε4)转基因鼠和突变前体蛋白(APP)转基因小鼠交配,以建立h-ApoEε4／突变APP双转基因小鼠。共产出仔鼠23只,经PCR初步筛选,并用Southern杂交对阳性小鼠基因组DNA作进一步鉴定,得到3只双转基因小鼠。该双转基因鼠的建立为进一步阐明ApoEε4的致病作用以及对AD的研究提供了理想的研究模型。     

EXPRESSION AND DELETION ANALYSIS OF EcoRII ENDONUCLEASE AND METHYLASE GENE

INTRODUCTIONEcoRIIrestrictionendonuclease（EcoRII．R）andEcoRIIDNA－methyltransferase（EcoRII．M）constitutearestriction－modificationsysteminE．coliR，whichrecog－nizethesamesequenceCCWGGasDNAcytosinemethylase（Dcm）existinggenerallyinE．coli．CleavagewithEcoRII．RinrecognizedsequencescanbeinhibitedbyeitherEcoRII．MmethylationorDcmmethylation．EcoRII．Risthefirsttype－IIrestrictionendonucleaseofwhichendonucleolyticactivitywasfoundtodependonthesimultaneousinteractionwit…     

一氧化氮与Alzheimer病(综述)

目的 概述了在Alzheimer病（AD）脑内一氧化氮（NO）可能介导胶质细胞激活后对神经元的损伤，参与炎性变化的毒性机制。诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在AD脑的胶质细胞和微血管内高表达，同时又在神经元内出现。而反应性胶质细胞内既有iNOS的激活又有神经元型NOS（nNOS）激活，共同产生过量的、具有神经毒性的NO。     

一种快速提取小鼠基因组DNA的方法

本文建立一套简易、快速从小鼠肝(肾)组织中提取高分子量DNA的方法，此法产组高、比较经济．其纯度可直接应用于PCR进行小鼠遗传监测。     

不同剂量氢化可的松对急性肺损伤大鼠多形核白细胞氧自由基释放的影响

目的观察不同剂量氢化可的松(HC)对内毒素(LPS)致鼠急性肺损伤(ALI)病理及多形核白细胞(PMN)释放氧自由基(OFR)的影响,并探讨其原因。方法大鼠腹腔注射O111B4,2000亿/kg复制ALI模型。40只大鼠随机分为空白组、内毒素组(LPS组)、大剂量HC组(150mg/kg)、中剂量HC组(20mg/kg)、小剂量HC组(6mg/kg),注药6h后采集标本,观察各组大鼠肺湿/干比(W/D值)、肺通透性指数(PPI)、肺病理变化(光镜、电镜)等指标,并检测PMN释放的OFR水平,在不同组之间进行比较。结果W/D值、PPI及肺光镜病理半定量评分等指标,LPS组均显著高于空白组(P<0.05)。使用HC干预后,小剂量HC组较LPS组各项指标均显著降低(P<0.05),中剂量HC组仅肺病理半定量评分较LPS组降低,差异有显著性(P<0.05),大剂量HC组各项指标与LPS组比较,差异均无显著性。OFR释放水平,LPS组显著高于空白组(P<0.01),应用HC后,各剂量组均显著降低(P<0.05),但不同剂量HC组差异无显著性。结论LPS组大鼠OFR产生明显增多,提示其在ALI发病中起重要作用;不同剂量激素均可对ALI大鼠OFR释放产生明显抑制,其抑制作用与激素剂量无关;小剂量激素组对ALI大鼠肺病理损伤的改善最明显,中剂量组次之,大剂量组无明显改善作用。     

小鼠先天性骨肾畸形综合征致病基因ldgene所在染色体的确认

通过对Ｃ５７ＢＬ／６·ＫＭ－ｌｄ同源导入近交系小鼠的１９条染色体上的２９个微卫星位点进行ＳＳＬＰｓ分析,表明,ｌｄ基因与２号染色体上的Ｄ２Ｍｉｔ３０,Ｄ２Ｍｉｔ６２和Ｄ２Ｍｉｔ６３连锁,与其它染色体上的位点不发生连锁,因此,我们可以初步将ｌｄ基因定位于２号染色体上。