Mfn2通过抑制内质网应激减轻椎间盘退变大鼠髓核细胞凋亡

目的 研究Mfn2对椎间盘退变大鼠髓核细胞内质网应激及细胞凋亡的作用及机制。方法 离体培养正常大鼠NP细胞为control组,离体培养椎间盘退变大鼠NP细胞分为model组、OE-Mfn2组、OE-NC组及4-PBA组。Western blot法检测Mfn2、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bcl-2、Bax、caspase-3的蛋白水平;qRT-PCR检测Mfn2、PERK、eIF2α、ATF4mRNA水平;免疫共沉淀实验验证Mfn2与PERK互作关系;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Mfn2可特异性结合PERK;与model组比较,OE-Mfn2组Mfn2、Bcl-2水平及细胞活力增加(P＜0.05),PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bax、caspase-3水平及凋亡率降低(P＜0.05)。结论 Mfn2可通过降低ERS抑制椎间盘退变大鼠NP细胞凋亡。     

T型钢板内固定治疗Barton骨折的临床研究

目的探讨早期切开复位"T"型钢板内固定治疗Barton骨折的临床效果.方法对22例Barton骨折(其中掌侧型20例,背侧型2例),均采用切开复位"T"型钢板内固定.术后早期功能锻炼治疗.结果平均住院14天,术后随访6～24个月,骨折全部愈合,腕关节功能按Kienst功能评分标准[1].评分:优:17例;良:4例;可:1例.优良率95.4%,无一例并发症.结论早期切开复位"T"型钢板内固定治疗Barton骨折,功能恢复良好,减少并发症,临床值得推广.     

同种异基因成骨细胞对混合淋巴细胞反应体系中T细胞的免疫抑制

背景：由同种异基因骨髓间充质干细胞诱导的成骨细胞移植免疫反应各家报道不一致,差别明显。目的：体外观察由骨髓间充质干细胞诱导而成的成骨细胞对T细胞的免疫调节作用及特点。方法：用Ficoll-Hypaque梯度密度离心法分离出兔骨髓单个核细胞,体外扩增,获取第3代细胞,经典化学方法诱导为成骨细胞,将其按照不同的比例加入到T细胞形成双向混合淋巴细胞培养体系中,在第3,5,7天,用MTT比色法检测各组混合淋巴细胞培养体系中的T细胞增殖情况,24h后用流式细胞仪分析各组T细胞亚群凋亡情况。结果与结论：诱导后成骨细胞混合淋巴细胞培养体系中,成骨细胞对T细胞的增殖有抑制作用,在一定范围内,抑制作用具有量效关系。诱导后成骨细胞剂量大,时间延长,抑制程度增强;3次平均抑制率相比：1：20组低于1：80组（P〈0.01）;1：40组低于1：80组（P〈0.05）;诱导后成骨细胞能引起T细胞亚群凋亡,其中CD4＋（凋亡率8.57%）亚群不如CD8＋（凋亡率15.31%）细胞亚群凋亡显著（P〈0.01）。结果显示诱导的成骨细胞在体外能够通过细胞凋亡途径抑制T细胞的增殖,特别是CD8＋。但这种抑制不是特别强,表明诱导的成骨细胞虽有一定的免疫性,但其免疫性较低。     

乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡机制

背景：有研究表明乙醇可诱导骨髓间充质干细胞凋亡并引起成骨细胞和破骨细胞数量减少,但乙醇对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制目前尚不十分清楚。 目的：观察乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡、线粒体功能的影响及bcl-2、Caspase-3表达的变化。 方法：应用全骨髓培养法分离培养SD大鼠骨髓间质干细胞,置于0,100,200,300,400,500,600,700,800,900 mmol/L 乙醇中作用24 h,MTT法进行细胞毒性药物实验;置于0,100,200,300,400,500 mmol/L乙醇中作用6,12,24 h,AnnexinV/ PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化情况;置于0,427 mmol/L 乙醇中作用24 h,RT-PCR法检测与凋亡有关的基因bcl-2 和Caspase-3 mRNA表达水平。 结果与结论：MTT检测结果显示427 mmol/L 是乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞生长的半数抑制浓度;AnnexinV/ PI检测结果表明,与0 mmol/L组比较,随作用时间的延长与乙醇浓度的增加,骨髓间充质干细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的破坏水平明显升高(P < 0.05)。与0 mmol/L组比较,乙醇作用24 h后427 mmol/L组bcl-2 mRNA表达水平下降,Caspase-3 mRNA表达水平增加(P < 0.05)。说明乙醇能诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,凋亡的发生可能与线粒体膜电位破坏、线粒体功能障碍、bcl-2和Caspase-3激活有关。     

羟基磷灰石涂层股骨柄初次全髋关节置换随机对照试验的meta分析

目的 评价羟基磷灰石涂层与非羟基磷灰石涂层股骨柄初次全髋关节置换术的临床和放射学结果差异.方法 计算机检索MEDLINE、Embase、Cochrane图书馆、中国生物医学文献数据库,搜集比较羟基磷灰石涂层与非羟基磷灰石涂层股骨柄初次全髋关节置换术的随机对照试验,临床结果评价指标包括Harris评分、大腿疼痛发生率,放射学结果评价指标包括假体周围点焊和透亮线现象、异位骨化.采用RevMan 5.0软件对纳入试验数据进行meta分析.结果 共纳入10项研究917髋,其中HA组464髋,非HA组453髋.Meta合并结果两组术后Harris评分比较差异无统计学意义(WMD=3.04,95％ CI:-4.47～ 10.54,P=0.43),术后大腿疼痛发生率比较差异有统计学意义(RR=0.56,95％CI:0.33 ～0.94,P=0.03),术后假体周围点焊现象(RR=1.01,95％ CI:0.91～ 1.11,P=0.91)、透亮线现象(RR =0.99,95％ CI:0.88 ～ 1.11,P=0.83)和异位骨化发生率(RR =0.97,95％ CI:0.77 ～ 1.21,P=0.77),差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 羟基磷灰石涂层股骨柄初次全髋关节置换在临床和放射学结果上并无明显优势,目前尚无充足证据说明可降低术后大腿痛的发生率.     

地塞米松对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景：研究发现地塞米松能有选择性地促进骨髓间充质干细胞凋亡。目的：了解地塞米松对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制。方法：体外培养 SD 大鼠骨髓间充质干细胞,传至第 2 代后分两组培养,对照组不加地塞米松,实验组分别加入 10-9,10-8,10-7 mol/L 地塞米松,作用 3,6,12,24 h 后通过流式细胞仪检测凋亡率。MTT 法检测地塞米松对骨髓间充质干细胞增殖率的影响。取 10-7 mol/L 地塞米松作用骨髓间充质干细胞 24 h,反转录后检测 Caspase-3 和 bcl-2 的表达。结果与结论：与对照组比较,10-8,10-7 mol/L 地塞米松作用 12~24 h 对骨髓间充质干细胞的凋亡有明显促进作用,且与作用浓度和时间存在相关性,随着作用浓度的增大和时间的延长骨髓间充质干细胞的凋亡率有增高的趋势。MTT 结果表明10-8,10-7 mol/L 地塞米松作用 24 h 对骨髓间充质干细胞增殖率影响显著,这与上述流式细胞仪的检测结果相符。RT-PCR提示地塞米松作用组 Caspase-3 显著增高,bcl-2 降低。结果证实地塞米松可能是通过细胞外通路和（或）线粒体通路促进骨髓间充质干细胞凋亡。     

乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡机制

背景：有研究表明乙醇可诱导骨髓间充质干细胞凋亡并引起成骨细胞和破骨细胞数量减少,但乙醇对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制目前尚不十分清楚。目的：观察乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡、线粒体功能的影响及bcl-2、Caspase-3表达的变化。方法：应用全骨髓培养法分离培养SD大鼠骨髓间质干细胞,置于0,100,200,300,400,500,600,700,800,900mmol/L乙醇中作用24h,MTT法进行细胞毒性药物实验;置于0,100,200,300,400,500mmol/L乙醇中作用6,12,24h,AnnexinV/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化情况;置于0,427mmol/L乙醇中作用24h,RT-PCR法检测与凋亡有关的基因bcl-2和Caspase-3mRNA表达水平。结果与结论：MTT检测结果显示427mmol/L是乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞生长的半数抑制浓度;AnnexinV/PI检测结果表明,与0mmol/L组比较,随作用时间的延长与乙醇浓度的增加,骨髓间充质干细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的破坏水平明显升高（P〈0.05）。与0mmol/L组比较,乙醇作用24h后427mmol/L组bcl-2mRNA表达水平下降,Caspase-3mRNA表达水平增加（P〈0.05）。说明乙醇能诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,凋亡的发生可能与线粒体膜电位破坏、线粒体功能障碍、bcl-2和Caspase-3激活有关。     

乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡机制

背景:有研究表明乙醇可诱导骨髓间充质干细胞凋亡并引起成骨细胞和破骨细胞数量减少,但乙醇对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制目前尚不十分清楚。目的:观察乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡、线粒体功能的影响及bcl-2、Caspase-3表达的变化。方法:应用全骨髓培养法分离培养SD大鼠骨髓间质干细胞,置于0,100,200,300,400,500,600,700,800,900mmol/L乙醇中作用24h,MTT法进行细胞毒性药物实验;置于0,100,200,300,400,500mmol/L乙醇中作用6,12,24h,AnnexinV/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化情况;置于0,427mmol/L乙醇中作用24h,RT-PCR法检测与凋亡有关的基因bcl-2和Caspase-3mRNA表达水平。结果与结论:MTT检测结果显示427mmol/L是乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞生长的半数抑制浓度;AnnexinV/PI检测结果表明,与0mmol/L组比较,随作用时间的延长与乙醇浓度的增加,骨髓间充质干细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的破坏水平明显升高(P<0.05)。与0mmol/L组比较,乙醇作用24h后427mmol/L组bcl-2mRNA表达水平下降,Caspase-3mRNA表达水平增加(P<0.05)。说明乙醇能诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,凋亡的发生可能与线粒体膜电位破坏、线粒体功能障碍、bcl-2和Caspase-3激活有关。     

大鼠成骨细胞的原代培养和鉴定

背景:组织工程需要大量的种子细胞,成骨细胞已成为骨组织工程构建的重要种子细胞之一。但成骨细胞取材困难,获得的成骨细胞的纯度不一。目的:建立大鼠新生乳鼠颅骨来源成骨细胞的分离培养纯化方法,观察颅骨来源成骨细胞生物学特点。方法:采用二次酶消化法对SD大鼠乳鼠成骨细胞进行原代培养,扩增。通过差速贴壁法进行成骨细胞纯化。通过形态学、细胞碱性磷酸酶检测、茜素红染色、钙结节Vonkossa法染色、超微结构以及细胞增殖曲线,确定其增殖与成骨活性。结果与结论:二次酶消化法培养颅骨来源成骨细胞可获得原代细胞增殖,传代扩增细胞具有典型成骨细胞形态学和生物学活性。碱性磷酸酶、茜素红染色、钙结节Vonkossa法染色均呈阳性结果。超微结构显示为高分化功能活跃成骨细胞,细胞增殖曲线显示细胞生长活跃。提示,新生SD大鼠颅骨来源成骨细胞具有良好的增殖与成骨活性,能连续传代增殖,纯度高,细胞生物学特征稳定,适用于做体外实验研究。     

乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡机制

BACKGROUND: Previous studies demonstrated that ethanol can induce apoptosis in bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs), and decrease the number of osteoplasts and osteoclasts. However, the effect and mechanism of ethanol on apoptosis in BMSCs remains unclear. OBJECTIVE: To investigate the effect of ethanol on apoptosis in BMSCs of rats and their mitochondrial function and to evaluate the pathway associated with the regulation of Bcl-2 and Caspase-3. METHODS: BMSCs were isolated from Sprague-Dawley rats were treated with ethanol at doses of 0, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 mmol/L for 24 hours. cytotoxic drug experiment was performed with MTT assay. BMSCs were treated with ethanol at doses of 0, 100, 200, 300, 400, 500 mmol/L for 6, 12, 24 hours, AnnexinV/PI flow cytometry of double label method was performed to detect the apoptosis and mitochondrial membrane potential, BMSCs were treated with ethanol at doses of 0, 427 mmol/L for 24 hours, the levels of Bcl-2 and Caspase-3 mRNA expression were determined by RT-PCR method. RESULTS AND CONCLUSION: MTT assay results showed that 50% concentration of inhibition (IC50) of BMSCs of rats grew in ethanol was 427 mmol/L. The results of Annexin V/PI assay indicated that the apoptosis rates of BMSCs and mitochondrial membrane potential were higher than that of untreated (0 mmol/L) group when time and dose of ethanol was increased (P < 0.05). Compared with 0 mmol/L group, the level of Bcl-2mRNA expression was decreased in 427 mmol/L group after 24 hours, but the caspase-3 mRNA expression was increased significantly by treatment at 427 mmol/L (P < 0.05). These results suggest that ethanol can induce apoptosis in BMSCs of SD rat, and the occurrence of apoptosis may be related to the mitochondrial membrane potential damage, mitochondrial dysfunction, bcl-2 and Caspase-3 activation.