仙灵骨葆对卵巢切除大鼠股骨骨折愈合影响的实验研究

目的 研究仙灵骨葆对卵巢切除大鼠股骨骨折愈合的作用.方法 健康12周龄雌性SD大鼠40只,体重(258±14)g,随机分为4组,每组10只.A组仅作切口暴露腹腔;B组仅切除卵巢;C、D组切除卵巢同时制备右侧股骨中段横型骨折,髓内针固定,术后分别采用生理盐水及250 mg/(kg·d)仙灵骨葆灌胃.于术后即刻、1、2、3、4及5周测量A、B组大鼠体重.术后5周取各组右侧股骨标本,双能X线骨密度仪测量股骨全长骨密度(total femur bone mineral density,tBMD)、远1/3段骨密度(distal femur bone mineral density,dBMD)和中1/3段骨密度(middle femur bone mineral density,mBMD),并行C、D组CR摄片、HE染色和免疫组织化学染色.结果 B组大鼠体重从第3周开始显著高于A组(P＜0.05),绝经后骨质疏松模型制备成功.CR摄片示D组骨痂量相对较多,骨折线模糊;C组骨痂量较少,骨折线清晰.B组tBMD和dBMD明显低于A组,D组mBMD明显高于C组,差异均有统计学意义(P＜0.05);D组tBMD和dBMD较C组有增高趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).组织学观察D组与C组比较,骨折端大部分骨性愈合,骨髓腔可见较多毛细血管植入.免疫组织化学染色示C、D组BMP-2的积分吸光度(IA)值分别为2.2366±0.1818和3.7273±0.8742,VEGF的IA值分别为2.8355±0.5370和3.8396±0.2230,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 仙灵骨葆可促进卵巢切除大鼠股骨骨折愈合,加快编织骨向板层骨的转化,这可能与上调BMP-2和VEGF表达相关.     

骨折愈合过程中降钙素基因相关肽表达与脑损伤的影响

背景：临床观察及实验研究发现合并中枢神经损伤的骨折愈合加速,但其具体机制尚未明确。 目的：观察股骨骨折合并脑损伤大鼠骨痂中降钙素基因相关肽及其mRNA的表达变化,探讨脑损伤对骨折愈合的影响及作用机制。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-01/10在华北煤炭医学院骨科实验室完成。 材料：健康12周龄雌性SD大鼠64只,建立大鼠开放骨折模型。 方法：骨折造模后64只SD大鼠随机数字法分为骨折合并脑损伤组和单纯骨折组,每组32只,骨折合并脑损伤组接着制备脑损伤模型。造模后7,14,21,28 d分批麻醉并处死动物,苏木精-伊红染色观察骨折愈合情况,免疫组织化学染色及原位杂交检测降钙素基因相关肽及其mRNA的表达变化。 主要观察指标：①造模后28 d大鼠右侧股骨X射线平片表现。②造模后不同时间点两组大鼠骨痂苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及原位杂交结果。 结果：64只SD大鼠均进入结果分析。①X射线平片显示与单纯骨折组相比,骨折合并脑损伤组骨折端骨痂形成早,骨痂量多。②苏木精-伊红染色示单纯骨折组呈典型骨折愈合过程,而骨折合并脑损伤组骨痂形成及改造提前,骨折愈合加速。免疫组织化学染色显示骨折愈合过程中内皮细胞、骨祖细胞、软骨细胞及成骨细胞表达降钙素基因相关肽。骨折合并脑损伤组造模后各时间点阳性细胞数均高于单纯骨折组,差异有显著性意义(P < 0.05)。原位杂交检测示骨折合并脑损伤组造模后7,14,21 d表达降钙素基因相关肽mRNA的成骨细胞数均高于单纯骨折组,差异有显著性意义(P < 0.05)。 结论：脑损伤对骨折愈合有促进作用,可能与合并脑损伤后降钙素基因相关肽及其mRNA表达水平升高有关。     

血管内皮生长因子在卵巢切除大鼠骨折愈合骨痂中的表达

背景：血管内皮生长因子在骨折愈合过程中起着重要作用,研究发现去卵巢大鼠影响骨折愈合,但其作用机制尚未明确。 目的：观察去卵巢大鼠股骨骨折愈合中骨痂组织学变化以及血管内皮生长因子的表达与分布,探讨骨质疏松对大鼠骨折修复的影响与血管内皮生长因子对其的作用。 方法：取12周龄雌性Sprague-Dawley 大鼠20只,随机分成假手术组和去卵巢组。制造股骨骨折模型,于术后4周处死,各组截取大鼠右侧股骨标本后行计算机X射线摄像仪摄片观察骨折愈合情况,并应用双能X射线骨密度仪测量右股骨骨密度,苏木精-伊红染色观察骨痂生长情况及其组织形态,免疫组织化学染色测定血管内皮生长因子表达。 结果与结论：骨折后4周,去卵巢组形成的骨痂中含有的软骨骨痂比例高与假手术组。去卵巢组中表达血管内皮生长因子的成骨细胞数目少于假手术组。提示骨质疏松大鼠骨折愈合形成的骨痂质量较差,血管内皮生长因子在成骨细胞中的表达减少是骨质疏松骨折愈合质量下降的可能因素之一。 关键词：骨质疏松;骨折愈合;血管内皮生长因子;雌激素;组织构建;组织工程     

阿仑膦酸钠预防卵巢切除大鼠腰椎间盘退变

目的: 探讨阿仑膦酸钠对卵巢切除大鼠腰椎间盘退变预防作用及其作用机制.方法: SD大鼠随机均分为Sham组,双侧卵巢切除+盐水组(OVX+V组),双侧卵巢切除+阿仑膦酸钠(OVX+ALN组).处死前10d和4d分别给予四环素和钙黄绿素双荧光标记.取腰2椎体进行骨形态计量学分析,腰4～5腰椎及椎间盘进行VG特殊染色,免疫组织化学检测椎间盘基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达,观察椎间盘的病理学改变并根据组织学评分系统对腰椎间盘的退变程度(LVD)进行评分.结果: 腰椎骨量OVX+V组低于Sham组及OVX+ALN组;腰椎间盘评分OVX+V组高于Sham组及OVX+ALN组; OVX+V组大鼠椎间盘中MMP-13表达高于OVX+ALN组、Sham组.结论:阿仑膦酸钠可预防卵巢切除大鼠腰椎间盘的退变,其作用可能与维持椎体骨量及微观结构,降低椎间盘中MMP13的表达,抑制基质的降解有关.     

辛伐他汀对大鼠骨髓基质干细胞Wnt信号通路相关因子表达的影响

背景:辛伐他汀作为降脂类药物,具有一定的潜在促骨形成作用,并因此成为骨代谢领域的研究热点,但在体内试验中对其促进成骨的作用尚存争议.目的:观察辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖﹑分化的影响,及其在此过程中Wnt信号通路相关因子mRNA表达水平的变化.方法: 6周龄雌性SD大鼠36只随机分成2组:对照组每天蒸馏水灌胃;实验组辛伐他汀灌胃20 mg/(kg·d).分别于给药后3,6,9周处死两组大鼠各6只,取左侧股骨行骨密度测定;取右侧股骨和胫骨骨髓细胞向成骨方向诱导培养,于细胞培养第16天检测碱性磷酸酶比活性、碱性磷酸酶染色;细胞培养第21天提取总RNA,采用Real-time RT-PCR检测LRP-5、Axin2、β-catenin的mRNA的表达.结果与结论:辛伐他汀体内给药干扰3,6,9周后大鼠骨密度均无显著变化,体外培养骨髓基质干细胞所有检测基因mRNA水平、成骨分化能力与对照组相比差异均无显著性意义.辛伐他汀体内给药3,6,9周对大鼠骨量及骨髓基质干细胞的分化及LRP-5、Axin2、β-catenin mRNA表达无显著作用.     

辛伐他汀对大鼠骨髓基质干细胞Wnt信号通路相关因子表达的影响

背景：辛伐他汀作为降脂类药物,具有一定的潜在促骨形成作用,并因此成为骨代谢领域的研究热点,但在体内试验中对其促进成骨的作用尚存争议。 目的：观察辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖﹑分化的影响,及其在此过程中Wnt信号通路相关因子mRNA表达水平的变化。 方法： 6周龄雌性SD大鼠36只随机分成2组：对照组每天蒸馏水灌胃;实验组辛伐他汀灌胃20 mg/(kg•d)。分别于给药后3,6,9周处死两组大鼠各6只,取左侧股骨行骨密度测定;取右侧股骨和胫骨骨髓细胞向成骨方向诱导培养,于细胞培养第16天检测碱性磷酸酶比活性、碱性磷酸酶染色;细胞培养第21天提取总RNA,采用Real-time RT-PCR检测LRP-5、Axin2、β-catenin的mRNA的表达。 结果与结论：辛伐他汀体内给药干扰3,6,9周后大鼠骨密度均无显著变化,体外培养骨髓基质干细胞所有检测基因mRNA水平、成骨分化能力与对照组相比差异均无显著性意义。辛伐他汀体内给药3,6,9周对大鼠骨量及骨髓基质干细胞的分化及LRP-5、Axin2、β-catenin mRNA表达无显著作用。     

仙灵骨葆延缓前交叉韧带切断后大鼠关节软骨退行性变的研究

目的 观察仙灵骨葆(xianlinggubao,XLGB)对前交叉韧带切断术(anterior cruciate ligament transection,ACLT)后骨关节炎大鼠模型膝关节软骨和软骨下骨的影响.方法 24只3月龄雌性SD大鼠按体重随机分为3组(n=8):假手术组(A组)、ACLT组(B组)和XLGB组(C组).B组和C组大鼠行右膝关节ACLT:A组同法打开关节腔暴露ACL后缝合.术后4 d C组开始持续XLGB灌胃250 mg/(kg·d),A、B组给予等剂量生理盐水.术后12周取材行大体观察,关节软骨Matin法评分,MMP-13免疫组织化学染色观察关节软骨的退行性变和软骨基质的降解程度,股骨远端软骨下骨骨密度和胫骨近端骨组织形态计量学分析.结果 术后12周大体观察A组无溃疡,C组较B组溃疡面小;C组关节软骨Mankin评分和MMP-13免疫组织化学染色积分光密度值低于B组,差异有统计学意义(P<0.05).B组股骨内侧髁骨密度低于A组和C组,差异有统计学意义(P<0.05):C组的胫骨近端骨量高于B组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 XLGB 250 mg/(kg·d)灌胃12周可以预防ACLT大鼠关节软骨退行性变,其作用机制可能与下调MMP-13的表达和增加软骨下骨骨量有关.     

脑外伤对骨折愈合中血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨脑外伤对骨折愈合的影响及作用机制.方法 12周龄雌性SD大鼠随机分成2组:骨折合并脑外伤组和单纯骨折组.建立骨折及脑外伤模型,术后1周、2周,3周、4周截取骨痂,HE染色观察骨痂生长情况,免疫组织化学染色及原位杂交检测血管内皮生长因子(VEGF)及其mRNA表达.结果 HE染色示单纯骨折组呈典型骨折愈合过程,而骨折合并腩外伤组骨痂形成及改造提前.骨折合并脑外伤组术后1～4周骨痂中VEGF及其mRNA阳性细胞百分率分别高于同一时间点单纯骨折组(P<0.05).结论 脑外伤对骨折愈合有促进作用,可能与脑外伤后VEGF表达水平升高有关.     

甲状旁腺激素1-34、阿仑膦酸钠、辛伐他汀治疗大鼠骨质疏松效果的比较

BACKGROUND:Bone resorption drugs in the treatment of osteoporotic fracture are still controversial. The development of new drugs, especially drugs in the promotion of bone formation, become more important and urgent.  OBJECTIVE: To compare the effects of parathyroid hormone (1-34), alendronate sodium and simvastatin on bone loss in ovariectomized rats. METHODS: Thirty female Sprague-Dawley rats aged 3 months were randomized into five groups of six animals in each group. All rats but those in sham group received dual ovariectomy (OVX) and treated by vehicle (OVX+V), parathyroid hormone (1-34) (5 days per week at a dose of 20 μg/kg, OVX+P), alendronate sodium (70 μg/kg/wk, OVX+A), simvastatin (5 mg/kg/d, OVX+S). Three months later, all rats were sacrificed. Dual energy X-ray method was used to measure bone density of L4 vertebra. Bone histomorphometry was utilized to analyze cancellous bone mass and bone microstructure. Compression test was performed on the L5 vertebra for the maximum loading and elastic modulus.   RESULTS AND CONCLUSION:(1) Bone density: The bone density from high to low levels was OVX+P group, sham group, OVX+A group, OVX+S group, and OVX+V group. No significant difference in bone density was detectable between the OVX+P and sham groups, but significant differences in bone density were determined between any other two groups (P < 0.05). (2) Bone histomorphometry: Relative volume of trabecular bone was significantly lower in the OVX+V group than in other groups. Relative volume of trabecular bone was remarkably higher in the OVX+P group than in the OVX+A group and OVX+S group. (3) Biomechanical properties: Biomechanical properties were noticeably lower in the OVX+V group than in other groups. Biomechanical properties were remarkably higher in the sham group and OVX+P group than in the OVX+S group and OVX+A group. (4) These findings indicated that under the dosage and intervention period used in the present study, parathyroid hormone (1-34), alendronate sodium and simvastatin showed anti-osteoporosis effect on OVX rats in a descending manner. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

替莫唑胺-尼莫地平-O6-苄基鸟嘌呤联用对胶质瘤细胞株U251抑制作用的研究

目的观察替莫唑胺（TMZ）、尼莫地平（NIM）、O6-苄基鸟嘌呤（O6-BG）联用对脑胶质瘤细胞株的抑制作用。探讨胶质瘤耐药发生的机制,寻找有效的多药耐药逆转剂,克服耐药性的产生,提高化疗效果,增加肢质瘤细胞对化疗药物的敏感性,最大限度地抑制胶质瘤细胞增殖,延缓肿瘤复发。方法用免疫细胞化学法检测胶质瘤细胞中MGMT蛋白表达,观察比较MGMT在用O6-BG处理前后表达的差异。分别以尼莫地平和O6-BG作为耐药逆转剂,与替莫唑胺单独或联合应用于体外培养的脑胶质瘤细胞U251。用MTT法检测细胞抑制率;观察TMZ、NIM、O6-BG联用对脑胶质瘤细胞的抑制作用。结果与对照组相比,MGMT在用O6-BG处理后表达明显减少。MTT比色法分别检测TMZ、TMZ＋NIM、TMZ＋O6-BG组及TMZ＋NIM＋O6-BG组对胶质瘤细胞U251的抑制作用,结果显示各组对胶质瘤细胞的抑制作用为TMZ＋NIM＋O6-BG联合组〉TMZ＋O6-BG〉TMZ＋NIM〉TMZ。与TMZ组比较,TMZ＋NIM组、TMZ＋O6-BG组对U251细胞株的抑制率显著升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;同样,与TMZ组比较,TMZ＋NIM＋O6-BG组对U251细胞株的抑制率也显著升高,差异有统计学意义（P〈O．05）。结论O6-BG能够有效抑制MGMT表达,从而能逆转人脑胶质瘤细胞株U251对替莫唑胺的耐药性。尼莫地平、O6-BG二者均可增强替莫唑胺时脑胶质瘤细胞株U251的细胞毒作用,对于替莫唑胺的耐药有较好的逆转效果,因而可望作为临床化疗增敏剂与替莫唑胺联合使用。替莫唑胺、尼莫地平、O6-BG三者联用对肢质瘤细胞株U251有更好的抑制作用,其效果优于二者联合应用,强于单独应用替莫唑胺。