亲细胞非均质分子脂质抑制人脑胶质瘤U87细胞株增殖的实验研究

目的研究亲细胞非均质分子脂质（cytotropic heterogeneous molecular lipid,CHML）对人脑胶质瘤U87细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法不同浓度CHML不同作用时间处理U87细胞后,采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western印迹法检测细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结果 CHML作用于U87细胞后,细胞生长受到明显抑制。流式细胞术检测显示,CHML使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例降低。Annexin V-PI法发现,用药24 h后,U87细胞凋亡比例随着CHM L的浓度升高而上升。Western印迹法检测显示,CHML引起U87细胞的周期相关蛋白Cyclin D1和CDK6表达降低,p21表达升高,凋亡相关蛋白Bax和Caspase 3表达增高,Bcl-2表达下降。结论 CHML可能通过诱导细胞凋亡和G1期细胞周期阻滞抑制U87细胞的增殖。     

五味子甲素通过ATP结合盒转运子B1逆转胶质瘤干/祖细胞耐药性研究

目的探讨五味子甲素对胶质瘤干/祖细胞耐药性的影响及作用机制。方法自人胶质瘤细胞系SHG-44中分离培养胶质瘤干/祖细胞SHG-44s,予五味子甲素0、12.50、25.00和50.00μmol/L联合长春新碱400、800和1200 nmol/L,细胞活性检测试剂盒CCK-8细胞毒性实验检测SHG-44s细胞增殖活性,罗丹明123染色检测SHG-44s细胞泵出药物能力,实时聚合酶链反应(PCR)和Western blotting法检测SHG-44s细胞ATP结合盒转运子B1(ABCB1)基因转录和翻译能力。结果五味子甲素50μmol/L即可抑制SHG-44s细胞增殖活性(P=0.001,0.001,0.039),剔除这一浓度后无论长春新碱浓度为400、800或1200 nmol/L,联合应用五味子甲素均可抑制SHG-44s细胞增殖活性(长春新碱400 nmol/L组:P=0.007,0.001;长春新碱800 nmol/L组:P=0.001,0.000;长春新碱1200 nmol/L组:P=0.000,0.000)。倒置荧光显微镜观察,五味子甲素12.50μmol/L组和25.00μmol/L组SHG-44s细胞可见明显绿色荧光。流式细胞术显示,随着五味子甲素浓度的增加,SHG-44s细胞罗丹明123染色阳性细胞比例分别为10.40%、39.20%和45.20%。实时PCR法显示,五味子甲素12.50μmol/L组和25.00μmol/L组SHG-44s细胞ABCB1基因表达水平较0μmol/L组降低(P=0.027,0.006),尤以25.00μmol/L组显著(P=0.034)。Western blotting法显示,随着五味子甲素浓度的增加,SHG-44s细胞P-糖蛋白表达水平下降。结论五味子甲素通过抑制胶质瘤干/祖细胞表面已存在的ABCB1基因编码的P-糖蛋白泵出药物能力并降低ABCB1基因转录和翻译能力,逆转胶质瘤干/祖细胞耐药性。