封闭群五指山小型猪主要脏器重量与体重的相关性分析

目的对盐酸多西环素（DOX）进行了药物动力学及残留研究,为临床合理用药提供理论依据。并阐明盐酸多西环素在猪的组织中消除规律,为休药期的制定提供参考。方法建立DOX在猪血浆及组织中的提取方法及反向高效液相色谱（RP—HPLC）检测法。猪单次口灌5mg／kg体重剂量给药后,于不同时间采血样和组织样,用反相高效液相色谱法测定血浆及组织中DOX的浓度;用3P97药物动力学软件处理血浆药物浓度-时间数据。结果所建立的标准曲线相关性好,相关系数均达0．9990以上,血浆、肌肉、皮脂、肝脏和肾脏中最低检测限分别为0．075μg／ml、0．010μg／g、0．010μg／g、0．020μg／g、0．0120μg／g;血浆及各组织中的平均回收率均在69％以上;目内变异系数小于10％,日间变异系数小于15％。房室模型分析表明,其药物时间曲线符合有吸收二室模型,动力学方程为：C=5．37e^-0.15t6．02e^-0.115t-11．39e^0.25t。主要药物动力学参数为：吸收速率常数Ka0．25±0．02／h;消除半衰期t1/2β6．02±0．83h;药时曲线下面积AUC17．07±2．80μg·ml^-1h·^-1;表观分布容积Vd／F2．26±0．48L／kg;清除率CLb0．29±0．05L·h^-1kg·^-1;达峰时间Tp5．42±0．25h;峰浓度Cmax1．09±0．26μg／ml。通过药物动力学试验得知,以5mg／kg体重的剂量单次口灌给药后,药物在体内吸收速度快,分布广,可以达到明显的抑菌效果;通过药物残留试验得知,药物在组织中消除速度较快。     

五指山小型猪繁殖性能测定

目的测定封闭群五指山小型猪繁殖性能指标。方法依据相关标准,测定普通级封闭群五指山小型猪种猪繁殖性能,并通过SAS软件进行相关统计分析。结果封闭群五指山小型猪繁殖行为学参数稳定,母猪性成熟早,胎次对窝产仔率、仔猪生存率以及个体重量有一定的影响,但多数统计学差异不显著。相关性分析显示,窝产活仔数与出生个体重间存在负相关,并且随着胎次的增加负相关性增强。结论封闭群五指山小型猪生产繁育性能较高,具有较好的实验动物化价值。仔猪个体发育过程中个体间差异仍有增大的趋势,提示种群仍需进一步选育和纯化。     

小鼠脑脊髓炎病毒自然感染调查以及人工感染小鼠试验

目的了解小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV)自然感染情况,探究人工感染TMEV小鼠体内各脏器组织中病毒分布及血清抗体变化。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法对2010年~2015年广东地区采集的SPF级小鼠、开放环境饲养的小鼠以及野生褐家鼠临床样本进行TMEV检测。36只ICR小鼠经脑内接种TMEV BeAn病毒,每天观察动物的临床症状,在接种第0、3、7、10、17、21、31、39、46天每个时间点分别对3只动物安乐死,剖检并取血清和组织脏器样本进行TMEV检测。结果 SPF级小鼠TMEV抗体阳性率为5.29%(n=2834),核酸阳性率为27.27%(n=457);开放环境饲养的小鼠的抗体和核酸阳性率分别为71.95%(n=82)和53.66%(n=82);野生褐家鼠中核酸阳性率为25.93%(n=27)。TMEV阳性小鼠中仅有两只小鼠表现有明显的临床症状。盲肠内容物、粪便和脑是qRT-PCR检测的最佳选择样本。ICR小鼠脑内接种TMEV BeAn病毒后第3 d可在脑、心脏、肝脏、肺脏和胃中检测到病毒核酸,脾脏、肾脏和盲肠中未检测到病毒核酸。肝脏、心脏、肺脏和胃中的病毒在接种后第10天已完全清除,脑中的病毒一直持续存在到第46天试验结束。小鼠感染后第7天可以检测到抗体,随后抗体水平逐渐升高,接种后17 d抗体阳性率达100%,并一直到46 d都可以维持较高的抗体水平。人工感染小鼠呈隐性感染,临床上并未表现明显症状和眼观病理变化。结论广东地区实验小鼠和野生褐家鼠均存在TMEV感染,且感染率较高。小鼠接种TMEV BeAn毒株后呈隐性感染,感染小鼠第7天可以产生抗体且持续存在。病毒在感染小鼠肝脏、心脏、肺脏和胃中短时间存在,而在脑中长期存在。qRT-PCR与ELISA两种检测方法具有较好的一致性,qRT-PCR检测方法可作为实验动物国家标准的有力补充。     

广东省2014～2016年普通级兔和豚鼠病毒抗体监测与分析

目的 依据GB 14922.2标准中SPF级动物质量要求,对2014～2016年广东省生产许可单位的普通级兔和豚鼠进行病毒抗体监测,分析从普通级动物中筛查SPF级动物的可行性。方法 累计收集到来自6家单位9批次的167只普通级兔和155只普通级豚鼠血清样本,采用ELISA方法检测GB 14922.2标准中规定的SPF级动物排除的病毒抗体。结果 兔出血症病毒（RHDV）免疫阳性率85.4%（134/157）,10只非免动物抗体均为阴性,兔轮状病毒（RRV）阳性率42.5%（71/167）,兔仙台病毒（SV）结果均为阴性。豚鼠呼肠孤病毒Ⅲ型（REO-3）阳性率52.9%（82/155）,豚鼠小鼠肺炎病毒（PVM）阳性率20%（31/155）,仙台病毒（SV）和淋巴细胞脉络丛脑炎病毒（LCMV）均为阴性。结论 普通级兔和豚鼠虽然满足国家标准要求,但SPF级动物质量要求排除的病原污染率较高,表明不适宜通过群体筛查获得满足SPF级质量要求的动物。     

不同途径感染小鼠诺如病毒对小鼠抗体水平和病毒复制的影响

目的探讨小鼠诺如病毒(MNV)不同接种途径对小鼠血清抗体水平和病毒复制的影响。方法 MNV(4×104拷贝/μL)分别以静脉、腹腔联合注射(iv+ip)、饮水(dw)、灌胃(ig)3种不同途径接种ICR小鼠,各组于感染前(0 d)、感染后3 d、6 d、14 d、25 d、34 d、51 d随机剖检2~3只小鼠,收集血清和心、肝、脾、肺、肾、脑、胃肠内容物,利用酶联免疫吸附法(ELISA)和实时定光定量(q RT-PCR)方法分别检测血清抗体和病毒载量。结果所有感染小鼠均无明显临床症状。3种途径接种的小鼠在感染后25 d均可检测到特异性抗体。抗体产生初期以ig接种组抗体水平最高,随后iv+ip接种组抗体水平上升幅度最大并在51 d高于其它接种组。小鼠接种MNV 3 d可在3组接种鼠的胃肠道、脾、脑中检测到病毒核酸,各组的组织脏器病毒载量有差异,其中iv+ip接种组盲肠内容物(3~51 d)、脾(6 d)和肝(14 d)病毒载量高于其它两组。结论不同接种途径对MNV在小鼠抗体水平和病毒载量影响较大。iv+ip感染效果较好,可作为MNV病毒感染模型的有效接种方式。血清抗体ELISA检测结合盲肠内容物核酸检测有利于MNV早期监测。     

广东小鼠腺病毒血清学调查及病毒和抗体在人工感染小鼠体内消长规律研究

目的了解我省小鼠腺病毒(Mad)自然感染情况及探究人工感染Mad小鼠体内各脏器组织中病毒分布规律及血清抗体变化。方法采用ELISA方法对2007年和2015年饲养于普通环境小鼠血清及2013年~2015年广东省12家监督单位和32家委托单位SPF级小鼠血清进行病毒抗体检测。利用腹腔注射方法感染36只3周龄BALB/c小鼠,0.2 m L/只,浓度为4.5×106copies/μL,每天观察动物临床表现,并于攻毒前第0天和攻毒后第3、7、10、15、18、21、30、37、44、51、60天剖检小鼠(各3只),取组织标本(心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、盲肠内容物)及血清,应用实时荧光定量PCR(QPCR)方法检测组织病毒核酸,ELISA方法检测血清抗体水平。结果普通饲养小鼠抗体阳性率为24.44%~84.15%,其中以Mad-2型K87株血清型为主。SPF级小鼠Mad血清抗体阳性率均为0%。所有攻毒小鼠均呈隐性感染,无临床表现。攻毒后第3天及7天小鼠各组织病毒核酸检测阳性率均为100%(3/3),其中以脾脏100%阳性率维持时间最长(60 d)。除肝脏外,小鼠各组织病毒含量均在攻毒后7 d达到高峰,其中以脾脏病毒含量最高(5.5×105copies/μL),其次是心脏(3.4×105copies/μL)、盲肠内容物(2.6×105copies/μL)和胃(2.6×105copies/μL),脑为0.8×105copies/μL。攻毒后15 d可测出血清抗体,在37 d达到峰值,此后至60 d一直维持高水平。结论 SPF级小鼠Mad感染率低,普通环境饲养小鼠Mad感染率高。人工感染小鼠脾脏病毒含量最高,阳性率维持时间最长,说明病毒可以在脾脏内长期复制,感染后第7天为组织病毒核酸最佳检测时间点。血清抗体在感染后15~60 d内均可以作为监测指标。     

五指山小型猪糖耐量试验及血脂分析

目的 确定五指山小型猪的正常糖耐量水平,并检测血脂,筛查糖、脂代谢异常小型猪.方法 选择未去势的五指山小型猪,禁食不禁水12h后按1.2 ml/kg体重的剂量静脉注射50％葡萄糖注射液,并分别在注糖前、注糖后10、30、60、90和120 min采血测定血糖值.同时采取空腹血清送实验室检测血糖（Glu）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等生化指标.结果 静脉注糖后血糖水平出现显著性波动,注糖后10 min内血糖水平达到峰值,随后逐渐下降,直至注糖后90 min恢复到给糖前水平.有7头小型猪的糖耐量部分血糖值超过95％置信度上线值,有12头小型猪部分相关的血清生化指标值超过95％置信度上线值.相关性分析发现Glu与TG、TC、HDL-C、LDL-C这4个指标都存在显著的相关性,多因素分析表明TG、HDL-C与Glu显著相关.结论 筛选出糖代谢或脂代谢异常,以及糖耐量减低的小型猪.     

广东省实验用小型猪主要病原微生物学及寄生虫学调查

目的调查广东省实验用小型猪主要病原微生物和寄生虫的感染情况。方法从广东省4家生产单位随机抽取小型猪154头,包括巴马小型猪、蕨麻小型猪、西藏小型猪和五指山小型猪4种品系,采集皮毛、鳞屑、血清、肛拭子、粪便等样品检测20种病原,对结果进行生产单位和品系间的差异性分析。结果所检4家单位的所有品系小型猪均存在多种病原复合感染,猪链球菌2型(50.7%)、胸膜肺炎放线杆菌(40.3%)、肺炎支原体(100.0%)、乙型脑炎病毒(41.3%)、猪圆环病毒2型(74.8%)、猪传染性胃肠炎病毒(73.8%)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(44.7%)7种病原的检出率相对较高,猪细小病毒(26.0%)、猪伪狂犬病病毒(15.6%)、肠道中蠕虫(3.2%)有一定检出率;要求强免的猪瘟病毒(62.8%)、口蹄疫病毒(35.8%)免疫合格率较低,猪伪狂犬病病毒免疫合格率高达98.4%。本次调查未检出沙门氏菌、布鲁氏菌、猪痢疾蛇样螺旋体、皮肤病原真菌、甲型流感病毒、弓形虫、体外寄生虫和粪便球虫。结论广东地区存栏实验用小型猪存在多种病原复合感染,需加强免疫和质量控制,逐步建立高等级群体;同时也为实验用小型猪地方标准乃至国家标准的制/修订提供了依据。     

2013年~2015年广东地区实验小鼠和大鼠微生物学及寄生虫学调查

目的 调查2013~2015年广东地区实验小鼠和大鼠的病原携带情况。方法 本文涉及的样品主要来源于监督检测的抽样样品和委托检测的送样样品,共收集到广东省12家监督单位和32家委托单位样品。按照国家标准要求的项目及标准外的螺杆菌和小鼠诺如病毒进行检测。结果 监督检测和委托检测结果存在较大差异。3年中监督检测的小鼠检出4种病原,包括绿脓杆菌（0.7%）、嗜肺巴斯德杆菌（0.3%）、肺炎克雷伯杆菌（0.7%）和鞭毛虫（1.7%）,未检出病毒;大鼠检出1种病原即嗜肺巴斯德杆菌（1.1%）,未检出病毒和寄生虫。委托检测的小鼠检出15种病原,包括绿脓杆菌（3.7%）、嗜肺巴斯德杆菌（5.2%）、支原体（1.9%）、金黄色葡萄球菌（0.7%）、肺炎克雷伯杆菌（0.8%）、螺杆菌（45.3%）,小鼠肝炎病毒（8.5%）、小鼠脑脊髓炎病毒（7.0%）、小鼠诺如病毒（16.2%）、鼠痘病毒（0.3%）、小鼠细小病毒（0.5%）、仙台病毒（0.1%）、鞭毛虫（11.7%）、蠕虫（1.0%）、体外寄生虫（0.1%）。大鼠检出8种病原,包括绿脓杆菌（3.4%）、嗜肺巴斯德杆菌（8.6%）、支原体（0.9%）、金黄色葡萄球菌（2.9%）、泰泽病原体（4.8%）、大肠杆菌（1.0%）、大鼠细小病毒H-1株（3.0%）、大鼠冠状病毒（1.0%）,未检出寄生虫。其中,实验小鼠7种病原,包括绿脓杆菌、嗜肺巴斯德杆菌、螺杆菌、鞭毛虫、小鼠肝炎病毒、小鼠脑脊髓炎病毒和小鼠诺如病毒,大鼠2种病原,包括金黄色葡萄球菌和泰泽病原体,检出范围广、检出率较高,而且存在区域分布特点,即设施污染后能在多次送检的动物中检出这些病原。结论 本研究获得广东省实验大小鼠病原流行情况和分布,这些数据的统计为我国实验动物质量标准的制订提供基础数据,同时也为各动物实验设施的质量控制方案制订提供依据。     

己烯雌酚单独或与乌拉坦共同暴露对新生和5周龄小鼠的致肿瘤作用

目的研究不同生长阶段ICR小鼠对己烯雌酚(DES)暴露的敏感性及DES暴露频率与肿瘤发生的关系,探索乌垃坦(Ure)对DES的肿瘤促进作用。方法新生及5周龄小鼠分对照、溶剂、DES、Ure及Ure+DES联合应用组。新生鼠在d 14,5周龄鼠在出生第5周末,均以500 m.gkg-1Ure ip;新生鼠分别在d 1,8和15 ip DES共3次;5周龄鼠从出生第6周起ip DES,每周1次,连续18次。至26周时剖检,观察肿瘤发生情况。结果新生鼠和5周龄鼠均有明显的肺肿瘤发生。新生鼠DES(2.0,4.0和8.0 m.gL-1)给药组,肺肿瘤发生率分别为16.7%,22.4%和43.1%;Ure+DES(2.0,4.0和8.0 m.gL-1)为70.4%,90.9%和70.8%。5周龄鼠DES 5,15及50 mg.kg-1时,肺肿瘤发生率分别为52.5%,32.1%和23.0%;Ure+DES(5,15和50 m.gL-1)为54.1%,58.5%和62.0%。结论外源DES对同一品系小鼠不同生长阶段的致肿瘤作用不同,新生鼠比成年鼠对DES和Ure联合作用有更高的肿瘤易感性,Ure对DES有一定的肿瘤促进作用。