表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒靶向治疗裸鼠移植性肝癌

目的 观察表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒(EPI-PBCA-MNPS)对裸鼠移植性肝癌的作用效果.方法 建立Bel-7402裸鼠人肝癌模型,当肿瘤体积长至20～30mm3时,将其随机分成5组:生理盐水组(NS组)、表阿霉素组(EPI组)、表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒组(EPI-PBCA-NPS组)、表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒组(EPI-PBCA-MNPS组)、表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒组加磁场组(EPI-PBCA-MNPS+MF组),每组10只,除生理盐水组外,其余各组按照0.002mg/g体质量或相当于40 μg/只的表阿霉素静脉注射给药,治疗2周后处死裸鼠,准确测量肿瘤大小并称重,计算瘤体积抑制率及瘤重抑制率,所有肿瘤均编号病理切片,比较治疗前后各组肿瘤细胞坏死的程度.结果 治疗后肿瘤体积抑制率、瘤重抑制率除EPI-PBCA-NPS组与EPI-PBCA-MNPS组差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组间差异有统计学意义(P<0.05),其中EPI-PBCA-MNP+MF组(94.26%、80.82%)显著高于其余组,差异有统计学意义(P<0.01).病理切片显示,EPI-PBCA-MNP+MF组肿瘤细胞坏死程度最重.结论 EPI-PBCA-MNPS具有良好的靶向性,在外加磁场作用下对裸鼠人肝癌模型有显著抑瘤作用.

Abstract：

Objective To observe the effect of epirubicin polybutylcyanoacrylate magnetic nanoparticles (EPI-PBCA-MNPS) on the transplanted hepatoma in nude mice.Methods Human hepatoma cell line Bel-7402 nude mice models were established and divided into 5 groups with each of 10 once gross tumor volume was up to 20-30 mm3:normal saline group (NS),epirubicin group (EPI),epirubicin polybutylcyanoacrylate nanoparticles group (EPI-PBCA-NPS),epirubicin polybutylcyanoacrylate magnetic nanoparticles group (EPI-PBCA-MNPS) and epirubicin polybutylcyanoacrylate magnetic nanoparticles+magnetic field group(EPI-PBCA-MNPS+MF).Except for NS group, the dosage of epirubicin was 0.002 mg/g body weight or 40 μg for intravenous injection.After two-weeks therapy,all nude mice models were executed and the tumor volume and weight were measured so as to calculate the volume inhibition ratio and the weight inhibition ratio.Every tumor specimen was made into pathological section and labelled with serial number for comparing neorobiosis degree in different groups before and after therapy.Results There were statistically difference among the other groups (P<0.05) in the volume inhibition ratio and the weight inhibition ratio after therapy except for EPI-PBCA-NPS and EPI-PBCA-MNPS group (P>0.05).The two ratios in the EPI-PBCA-MNP+MF group (94.26%,80.82%) were significantly more than those in other groups (P<0.01).The pathological sections demonstrated the most severe tumour neorobiosis in the EPI-PBCA-MNP+MF group.Conclusion With the additional magnetic field,EPI-PBCA-MNPS has significant anticancer effect on human hepatoma nude mice models due to its favourable magnetic targeting.     

Mcl-1基因与肝细胞癌

Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡的调节中起着重要的作用，髓样细胞白血病-1（Mcl-1）是Bcl-2家族中一个重要的抗凋亡成员，并作为促耐药因子在不同肿瘤组织中表达。进展期肝细胞癌对各种化疔药物有着高度的耐药性。Mcl-1下调使HCC癌细胞对不同化疗药物敏感，并增加癌细胞的凋亡率。因而，Mcl-1靶向治疗有望成为肝细胞癌治疗的新途径。     

Bcl2抑制NNK诱导的DNA损伤后修复的分子机制研究

目的 为了探索Bcl2抑制NNK诱导的DNA损伤后修复的分子机制.方法 Western Blotting检测Bcl2、APE1和XRCC1蛋白的表达情况,定量检测AP位点来观察DNA损伤程度,免疫沉淀检测Bcl2蛋白和APE1蛋白,APE1蛋白和XRCC1蛋白相互作用,免疫荧光染色检测Bcl2蛋白的细胞分布情况及其变化,亚细胞结构分离提取蛋白观察Bcl2蛋白在细胞核及线粒体中表达水平及其变化.同位素测定APE1核酸内切酶活性观察Bcl2对APE1核酸内切酶活性的影响及其Bcl2的BH结合域的关系.结果 Bcl2下调APE1核酸内切酶活性与抑制AP住点修复有关.4-(N-甲基-N-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-丁酮(NNK)与细胞接触导致Bcl2在细胞核中积聚,并且与APE1相互作用,这种相互作用需要Bcl2的所有BH结合域参与.Bcl2的BH结合域的任一缺失导致Bcl2与APE1相互作用的能力和对APE1活性、AP位点修复的抑制作用消失.Bcl2在细胞中的过度表达减少了APE1/XRCC1修复复合物的形成,并且Bcl2纯蛋白在体外直接使APE1/XRCC1复合物分裂从而抑制APE1核酸内切酶活性.结论 Bcl2蛋白下调APE1核酸内切酶活性抑制NNK诱导的DNA损伤后AP位点的修复.     

聚氰基丙烯酸正丁酯纳米颗粒的表面修饰和转染研究

目的：比较不同物质修饰的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米颗粒的物理化学性质,并考察它们体外基因转染活性,以寻求一种新的非病毒基因载体递送系统。方法：用乳化聚合法制备不同物质修饰的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒,透射电镜观察表面修饰对纳米粒粒径大小、粒子形态的影响;利用体外转染实验考察表面修饰对纳米粒转染活性的影响;用倒置荧光显微镜观察并用流式细胞仪测定转染结果。结果：经壳聚糖表面修饰的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒带有很强的正电荷,能够转染人肝癌细胞HepG2细胞,并且转染效率高于葡聚糖和mPEG-NH2修饰的纳米粒,也能防止DNase I酶的降解。结论：壳聚糖修饰的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米颗粒能有效地将基因递送到细胞内,并且报告基因能在细胞内表达。因此,壳聚糖修饰的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒用做基因递送的载体系统值得进一步的研究。     

表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒的制备与表征

目的 制备表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒(EPI-PBCA-MNPs)并进行表征.方法 以化学共沉淀法制得粒径(15.2±4.6)am的Fe3O4纳米磁流体,采用微乳液反相界面聚合法制得EPI-PBCA-MNPs,反应条件:pH=2.0,搅拌速度2000 r/min,然后对其进行相关表征.结果 EPI-PBCA-MNPS粒径为(152.0 ±28.5)nm,分布均匀,胶体溶液长期稳定,平均包封率为(81.30 ±15.20)%,平均载药量为(14.65±2.05)%,饱和磁化强度为:0.35 KA/m.结论 制备的EPI-PBCA-MNPs粒径合适,分布均匀,其主要指标符合肝癌靶向治疗的要求.

Abstract：

Objective To prepare and characterize epirubicin polybutylcyanoacrylate magnetic nanoparticles ( EPI-PBCA-MNPs) for the purpose of offering a new dosage form of high-performance for targeted therapy of hepatoma. Methods Nanosized Fe3 O4 magnetic fluids with the mean particle diameter of (15. 2 ±4. 6) nm were prepared by chemical coprecipitation method. Subsequently, EPI-PBCA-MNPs was prepared by a reversed-phase micro-emulsion polymerization method, of which reactive condition was pH = 2. 0 and agitating velocity = 2000 r/min, and was correlatively characterized. Results EPI-PBCA-MNPs were uniformly and stably distributed in the colloid solution with the mean particle diameter of (152.0 ±28. 5) nm. The mean envelopment rate, drug-loading, saturated magnetization intensity is (81. 30 ±15. 20) % ,(14. 65 ± 2.05) % ,0. 35 KA/m, respectively. Conclusion In this experiment, EPI-PBCA-MNPs is uniformly distributed with satisfactory particle diameter,of which main indexes meet the demand of targeted therapy for hepatoma, offering a new dosage form with applicable potential for anticancer drugs exploration.     

Bcl2对NNK诱导的DNA损伤后修复的抑制作用

目的 为了探索Bcl2对DNA损伤后修复的抑制作用.方法 Western Blotting检测Bcl2蛋白的表达情况,单细胞电泳、定量检测AP位点来观察DNA损伤程度.结果 NNK诱导DNA损伤产生大量的AP位点,去掉NNK后未转染Bcl2质粒的H1299细胞中AP位点数量逐渐下降,转染野生型Bcl2质粒的H1299细胞中AP位点数量也在下降,但比前一组慢,仍维持在较高水平,说明去掉NNK后来转染Bcl2质粗的H1299细胞中DNA损伤在逐步修复,而转染野生型Bcl2质粒的H1299细胞中DNA损伤后AP位点的修复受到抑制.NNK处理1h后两组H1299细胞的细胞核均有拖尾现象,说明NNK可以使H1299细胞中DNA发生损伤;去掉NNK诱导剂后24h观察发生未转染H1299细胞中DNA的细胞核未有拖尾现象现象,说明DNA损伤已得到修复,但另一组细胞中仍有部分细胞核有拖尾,说明DNA损伤仍有部分未得到修复.结论 Bcl2蛋白对NNK诱导的DNA损伤后的修复有抑制作用.     

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞增殖与凋亡的影响.方法:体外合成mTOR siRNA,并转染HepG2细胞,同时设无义对照组(转染无义siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染).采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达;应用MTT法检测...     

胆盐(GCDA)对肝癌细胞凋亡及其药物敏感性的影响

目的 探索胆盐(GCDA)环境下肝癌细胞株HepG2的生长情况及其对抗肿瘤药物的敏感性.方法 用不同时间或浓度GCDA处理HepG2细胞,采用MTT法检测细胞活性与增殖性;用3种抗肿瘤药对HepG2细胞进行处理,采用流式细胞分析法检测GCDA存在与缺少时的细胞周期与凋亡.结果 GCDA的处理浓度在200μM内时细胞有明显增殖作用(P<0.05);GCDA的处理时间在4 h内对细胞有增殖作用,以10～20 min最明显(P<0.05).3种药物对肝癌HepG2细胞均有杀伤作用,阿霉素(ADM)对细胞周期的影响阻滞在G0/G1,Oxaplatin与Irinotecan阻滞在S期,GCDA使Irinotecan作用下细胞凋亡率明显下降(P<0.05).结论 GCDA能诱导肝细胞癌细胞株HepG2细胞存活与增殖,GCDA对Irinotecan的药性有抵制作用,使肿瘤细胞对其的敏感性降低.     

MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体的构建与鉴定

背景：疫苗诱导的抗肿瘤CD8+T细胞反应被认为在增加机体对肿瘤抵抗力方面起重要作用。研究发现,抗原递呈细胞摄取热休克蛋白70与肿瘤相关抗原的融合蛋白,并在MHC I类分子上处理提呈有此热休克蛋白为伴侣的肽后,会启动CD8+细胞毒性T淋巴细胞反应。 目的：构建黑色素瘤抗原3(MAGE-3)、人热休克蛋白70(HSP70)融合基因的真核表达载体。 设计、时间及地点：单一样本观察,于2008-06/12在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成。 材料：pcDNA3.1(-) Vector为BD公司产品,pINCY /MAGE-3,pOTB7/HSP70为Open Biosystems公司产品,DH5α由纳米生物技术重点实验室保存。 方法：设计含Xho Ⅰ酶切位点MAGE-3引物及含Kpn Ⅰ酶切位点人热休克蛋白70引物,以pINCY/MAGE-3 和pOTB7/HSP70为模板扩增黑色素瘤抗原3和人热休克蛋白70基因片段,以基因片段为模板,采用MAGE-3上游引物(含Xho Ⅰ酶切位点)及人热休克蛋白70下游引物(含Kpn Ⅰ酶切位点),PCR扩增MAGE-3-HSP70融合基因片段,KpnⅠ和Xho Ⅰ双酶切并连接至pcDNA3.1(-),转化感受态大肠杆菌DH5α,获得阳性克隆进行双酶切和测序鉴定。 主要观察指标：真核表达载体pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70的鉴定。 结果：测序结果显示黑色素瘤抗原3与Gene Bank上公布的序列完全一致, 人热休克蛋白70有3处同义突变。 结论：成功构建MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体。     

MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体的构建与鉴定

背景:疫苗诱导的抗肿瘤CD8+T细胞反应被认为在增加机体对肿瘤抵抗力方面起重要作用.研究发现,抗原递呈细胞摄取热休克蛋白70与肿瘤相关抗原的融合蛋白,并在MHC Ⅰ类分子上处理提呈有此热休克蛋白为伴侣的肽后,会启动CD8+细胞毒性T淋巴细胞反应.目的:构建黑色素瘤抗原3(MAGE-3)、人热休克蛋白70(HSP70)融合基因的真核表达载体.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-06/12在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成.材料:pcDNA3.1(-)Vector为BD公司产品,pINCY/MAGE-3,pOTB7/HSP70为Open Biosystems公司产品,DH5α由纳米生物技术重点实验室保存.方法:设计含Xho Ⅰ酶切位点MAGE-3引物及含Kpn Ⅰ酶切位点人热休克蛋白70引物,以pINCY/MAGE-3和pOTB7/HSP70为模板扩增黑色素瘤抗原3和人热休克蛋白70基因片段,以基因片段为模板,采用MAGE-3上游引物(含Xho Ⅰ酶切位点)及人热休克蛋白70下游引物(含Kpn Ⅰ酶切位点),PCR扩增MAGE-3-HSP70融合基因片段,Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切并连接至pcDNA3.1(-),转化感受态大肠杆菌DH5α,获得阳性克隆进行双酶切和测序鉴定.主要观察指标:真核表达载体pcDNA3.1(-)IMAGE-3+HSP70的鉴定.结果:测序结果显示黑色素瘤抗原3与Gene Bank上公布的序列完全一致,人热休克蛋白70有3处同义突变.结论:成功构建MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体.