富含血小板血浆凝胶复合脂肪间充质干细胞构建可注射组织工程髓核

目的:探讨以自体富含血小板血浆(PRP)凝胶复合脂肪间充质干细胞(ADSCs)构建可注射组织工程髓核的可行性。方法:将体外扩增的第3代兔ADSCs经流式细胞仪鉴定后接种至自体PRP凝胶中,体外立体培养2周、4周、8周时分别行大体观察、组织学检查、5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)免疫荧光法观察细胞在PRP凝胶中的分布及存活情况;分光光度法检测PRP凝胶-细胞复合体中糖胺聚糖(GAG)含量,实时荧光定量PCR法检测低氧诱导因子(HIF-1α)、蛋白多糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)基因表达情况。结果:流式细胞仪检测显示体外扩增的第3代细胞CD90阳性率为95.2%,CD45阳性率为0.9%。培养2、4、8周时PRP凝胶细胞复合体均为表面光滑的凝胶状,弹性较好;番红O染色2周时细胞外基质几乎不着色,4周时可见细胞周围呈粉色的弱阳性染色,8周时多数细胞周围呈红色阳性染色。HE染色和扫描电镜各时间点均可见细胞均匀分布于网络状支架内;BrdU免疫荧光法显示细胞在支架中生存状态良好,培养4周时阳性细胞数较培养2周时明显增多(P<0.05),8周时较4周时明显增多(P<0.05)。培养4周时GAG含量较培养2周时明显增高(P<0.05),8周时较4周时明显增高(P<0.05);培养4周时与培养2周时比较3个目的基因mRNA表达量均增高,差异有显著性(P<0.05),8周时与4周时比较亦明显增高(P<0.05)。结论:以兔自体PRP凝胶与ADSCs构建的复合体在体外培养时细胞可以向类髓核样细胞分化,用此方法构建可注射组织工程髓核具有可行性。     

脂肪干细胞复合壳聚糖支架移植对兔退变早期椎间盘内肿瘤坏死因子α、白介素1β的影响

目的观察脂肪干细胞复合可注射温敏型壳聚糖支架移植对退变早期兔椎间盘内肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)含量的影响。方法 24只新西兰大白兔,雌雄不限,随机分为髓核抽吸组、脂肪干细胞壳聚糖支架复合移植组、单纯支架移植组以及单纯椎间盘暴露组。术后2、4、8周分别将每组处死2只兔,使用ELISA方法检测L2-3、L3-4、L4-5、L5-6椎间盘内TNF-α、IL-1β含量。结果 24只动物均存活。髓核抽吸组与单纯椎间盘暴露组相比,TNF-α、IL-1β浓度升高(P<0.05);复合移植组、单纯支架移植组与单纯椎间盘暴露组相比较,TNF-α、IL-1β浓度均降低(P<0.05);复合移植组与单纯支架移植组相比,8周时IL-1β降低(P<0.05)。结论脂肪干细胞与温敏型壳聚糖支架在兔椎间盘退变早期能抑制TNF-α、IL-1β表达,可能减轻炎症反应。     

不同pH值水平下脂肪间充质干细胞的存活和增殖

背景：在退变的椎间盘内,pH值的下降对脂肪间充质干细胞有很大影响。 目的：在不同的pH值条件下体外培养脂肪间充质干细胞,观察其增殖及生存情况。 方法：分离兔脂肪间充质干细胞,在分别在pH 7.4,7.1,6.8,6.5条件下培养5 d后用锥虫蓝染色检测各组的细胞存活率,采用MTT法绘制细胞生长曲线。 结果与结论：相比其他3组,pH 6.5条件下脂肪间充质干细胞存活率最低(P < 0.05),其细胞生长速度持续减慢。结果证实,pH 6.5的酸度培养条件可抑制脂肪间充质干细胞的活力和增殖。     

不同pH值水平下脂肪间充质干细胞的存活和增殖

背景:在退变的椎间盘内,pH值的下降对脂肪间充质干细胞有很大影响。目的:在不同的pH值条件下体外培养脂肪间充质干细胞,观察其增殖及生存情况。方法:分离兔脂肪间充质干细胞,在分别在pH7.4,7.1,6.8,6.5条件下培养5d后用锥虫蓝染色检测各组的细胞存活率,采用MTT法绘制细胞生长曲线。结果与结论:相比其他3组,pH6.5条件下脂肪间充质干细胞存活率最低(P<0.05),其细胞生长速度持续减慢。结果证实,pH6.5的酸度培养条件可抑制脂肪间充质干细胞的活力和增殖。     

不同pH值水平下脂肪间充质干细胞的存活和增殖★

背景：在退变的椎间盘内，pH值的下降对脂肪间充质干细胞有很大影响。 目的：在不同的pH值条件下体外培养脂肪间充质干细胞，观察其增殖及生存情况。 方法：分离兔脂肪间充质干细胞，在分别在pH 7.4，7.1，6.8，6.5条件下培养5 d后用锥虫蓝染色检测各组的细胞存活率，采用MTT法绘制细胞生长曲线。 结果与结论：相比其他3组，pH 6.5条件下脂肪间充质干细胞存活率最低(P < 0.05)，其细胞生长速度持续减慢。结果证实，pH 6.5的酸度培养条件可抑制脂肪间充质干细胞的活力和增殖。