外源性ATP诱导PC12细胞的膜孔形成

 目的：探讨外源性三磷酸腺苷(ATP)诱导PC12细胞的膜孔形成及关键分子靶标。方法：用不同浓度的ATP处理培养的PC12细胞,采用倒置相差显微镜观察形态,CCK-8法检测细胞存活率,YO-PRO-1染色检测细胞膜通透性,Western blotting和real-time PCR检测P2X7 受体和pannexin 1（Panx1）表达的变化。结果：（1）ATP（1 mmol/L、3 mmol/L、5 mmol/L）作用3 h,可见随着ATP浓度升高,PC12细胞变圆,脱壁细胞增多;当ATP浓度为3 mmol/L或5 mmol/L时,PC12细胞活力较对照组显著下降（P<0.05）。（2）不同浓度的ATP（0、1、3、5 mmol/L）作用1 h,PC12细胞摄入YO-PRO-1的荧光强度随着浓度增加而增加;同一浓度的ATP作用不同时间（15、30、60 min）,随着时间的增加,胞内的荧光强度也增加。（3）亮蓝G（P2X7受体的抑制剂）预处理可明显拮抗ATP引起的细胞活力下降和胞内荧光强度增强（P<0.05）,而生胃酮（Panx1的抑制剂）预处理不改变细胞活力和胞内的荧光强度（P>0.05）。（4）ATP作用3 h使PC12细胞 P2X7受体的mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）,而Panx1 mRNA和蛋白表达变化不大（P>0.05）。结论：胞外高浓度ATP引起PC12细胞的膜孔形成可能主要与P2X7受体的表达和激活有关。     

长期丰富环境对由神经毒素MPTP所致的帕金森病小鼠模型抑郁情绪的作用

目的探讨长期丰富环境(EE)对由神经毒素MPTP所致的帕金森病(PD)小鼠模型抑郁情绪的作用。方法采用随机分组法将40只7月龄雄性C57BL/6N小鼠,分为EE+MPTP组、EE+NS组、SE+MPTP组与SE+NS组,每组10只。EE组和标准环境(SE)组在干预3个月后,MPTP组小鼠进行神经毒素MPTP造模(腹腔注射,30 mg/kg),每天注药1次,连续7 d;NS组给予腹腔注射等量的0.9%NaCl作为对照观察。采用行为学方法评估小鼠行为学表现。行免疫组织化学染色方法观察酪氨酸羟化酶(TH)与5-HT1A受体阳性面密度值变化情况。结果行为学结果显示MPTP组的小鼠的强迫游泳评分较NS组小鼠低(P0.01);悬尾实验静止不动时间延长(P0.01)。EE+MPTP组的上述抑郁表现轻于SE+MPTP组(P0.05)。从免疫组织化学染色结果中发现,SE+MPTP组和EE+MPTP组小鼠的TH与5-HT1A受体阳性表达水平较NS组小鼠降低(P0.01),而EE+MPTP组小鼠TH及5-HT1A受体阳性表达水平降低程度较SE+MPTP组小鼠小(P0.05)。结论 MPTP小鼠的行为学异常以及TH阳性面密度值减少提示PD模型制作成功。EE+MTPT组小鼠5-HT1A受体受损较SE+MPTP组小鼠轻,提示丰富环境可能缓解MPTP诱导的PD小鼠模型的抑郁情绪。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活剂-1αrs2946385基因多态性与帕金森病的相关性

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活剂-1α(PGC-1α)rs2946385基因多态性与帕金森病(PD)发病风险及患者焦虑、认知的关系.方法 选择2018年3月至2019年12月就诊于新乡医学院第一附属医院的86例PD患者(PD组)及86例健康体检人员(对照组)为研究对象.PD组患者根据运动症状分为强直少动型...     

帕金森病患者血清中Toll样受体4及下游炎症因子的高表达与临床分期及分型的关系研究

目的 检测Toll样受体4(TLR4)及白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)在帕金森病(PD)患者血清中的表达,探讨TLR4及下游炎症因子与PD发生发展的关系。方法 选取2019年 9月至 2020 年9月于新乡医学院第一附属医院神经内科门诊和病房就诊的原发性PD患者60例（PD组）,以及同期在该院体检健康者60例（对照组）。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其血清TLR4蛋白及IL-6、IL-1β 和TNF-α水平,并分析其与PD患者Hoehn-Yahr分期和临床分型的关系。结果 PD组外周血血清TLR4水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);下游炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平高于对照组,差异有统计学意义（均P<0.05）。PD分期越高,TLR4、IL-6、IL-1β 和TNF-α的表达越高。震颤为主型、强直少动型和混合型PD患者TLR4、IL-6、IL-1β和TNF-α的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4及其下游炎症因子的高表达与PD的发生发展和分期密切相关,对PD发病机制的研究具有重要意义。 [国际神经病学神经外科学杂志, 2022, 49(3): 41-45.]     

家兔动脉血压调节实验中迷走神经刺激参数的调节

目的寻找家兔动脉血压调节实验中迷走神经适宜的刺激参数(刺激强度及频率)。方法分离家兔颈部迷走神经,刺激其外周端,由小至大调节刺激强度和频率,直至观察到血压变化,记录结果并分析。结果适宜的刺激强度[(0.79±0.68)v]、刺激频率[(16.24±4.49)Hz]刺激迷走神经的外周端会引起血压降低。结论寻找动脉血压调节实验中迷走神经适宜的刺激参数,有助于提高实验效果并缩短实验时间。     

氯化钴诱导化学缺氧对N9小胶质细胞的损伤作用及机制

目的研究氯化钴(CoCl2)对N9小胶质细胞的损伤作用及机制。方法不同剂量CoCl2处理N9小胶质细胞后,XTT法检测细胞活力;倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;硫代巴比妥酸(TBA)显色法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期变化。结果 CoCl2(50～1 000μmol.L-1)处理24 h后,细胞活力明显降低(P<0.01),且呈剂量依赖性。细胞形态发生明显改变,部分细胞出现皱缩、破碎,细胞密度减小,随CoCl2剂量增大,细胞形态损伤程度进一步恶化。MDA含量检测结果显示,氯化钴处理后,细胞上清液中MDA含量明显增多(P<0.05)。Hoechst 33258染色结果显示,氯化钴处理组的细胞凋亡比例较对照组明显增多(P<0.01),且比例随CoCl2剂量增大而增多。细胞周期检测结果显示,CoCl2可使细胞周期阻滞于G1/G0期。结论 CoCl2可呈剂量依赖性损伤N9小胶质细胞,机制与诱导细胞凋亡、引发氧化应激反应及细胞周期阻滞有关。     

TRPV1通道在炎症痛觉过敏中的作用及其影响因素

正辣椒素受体自1997年从感觉神经元分离和克隆成功,就成为了疼痛领域研究的热点之一。TRPV1在下丘脑以及外周初级感觉传入神经元,特别是中小型神经纤维有着较高的表达,在星形胶质细胞、小胶质细胞,人组织的血管平滑肌,支气管上皮细胞,胃肠道细胞等也表达有TRPV1[1,2]。TRPV1是一种伤害性感受器,能够被辣椒素、伤害性热刺激和酸化等特异性激活。炎性痛具有持续性疼     

H_2S抑制高浓度ATP诱导的SH-SY5Y细胞凋亡与P2X_7受体的相关性研究

目的:研究H_2S对高浓度ATP诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用和可能的机制。方法:人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞、HEK 293和HEK 293-hP2X_7R细胞,分为对照组,Na HS组,KN-62组,ATP组,ATP+Na HS组和ATP+KN-62组。倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞活力,Hoechst 33258核染色分析细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot和RT-PCR法分别检测Caspase-3、Bcl-2在蛋白和mRNA水平的表达。结果:与对照组比较,6 mmol/L ATP处理3 h后SH-SY5Y细胞损伤明显,活力降低至62.7%±3.8%(P0.01),而凋亡率升高至30.75%±5.1%(P0.01)。与ATP组比较,用200μmol/L Na HS和500 nmol/L KN-62预处理30 min,SH-SY5Y细胞活力分别升高至90.1%±3.8%和84.6%±3.1%(P0.05),凋亡率则分别降低至14.73%±3.4%和18.32%±3.1%(P0.01)。ATP组SH-SY5Y细胞内Caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,但Na HS和KN-62可抑制Caspase-3表达,促进Bcl-2表达。与对照组和HEK293细胞比较,用2 mmol/L ATP分别处理HEK 293、HEK 293-h P2X7R细胞3 h,可见HEK 293-h P2X7R细胞内Caspase-3表达上调(P0.01)。与ATP组比较,200μmol/L Na HS预处理30 min,HEK 293-h P2X7R细胞内Caspase-3表达明显下调(P0.01)。HEK 293细胞Caspase-3表达在各组无差异(P0.05)。结论:H2S对高浓度ATP诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有抑制作用,且呈浓度依赖性,其作用机制可能与P2X7R相关。     

H_2S对ATP诱导小胶质细胞活化的影响

目的:研究硫化氢(hydrogen sulfide,H_2S)对三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)诱导大鼠小胶质细胞炎性因子释放的调节,并探讨小胶质细胞条件培养基对神经元样细胞凋亡的影响。方法:选定的大鼠小胶质细胞随机分4组:(1)正常对照组:常规培养;(2)ATP组:细胞接种24 h后用ATP处理;(3)Na HS(sodium hydrosulfide,H_2S供体)+ATP组:ATP处理前用Na HS预孵育30 min,且Na HS始终存在于反应体系中;(4)KN-62(异喹啉衍生物,嘌呤受体拮抗剂)+ATP组:ATP处理前用KN-62预孵育30 min。用ELISA检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-6的变化,用Western Blot检测各组丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)P38和JNK表达水平。用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)研究条件培养基对神经元的影响,其方法与上述大鼠小胶质细胞处理相同。用倒置显微镜观察SH-SY5Y细胞形态变化及凋亡情况,用MTT法检测各组细胞活力。结果:当ATP浓度3 mmol/L时,大鼠小胶质细胞释放TNF-α和IL-6水平增加(P0.05),同时上调大鼠小胶质细胞p-P38、p-JNK蛋白表达水平(P0.05)。当ATP浓度5 mmol/L时,小胶质细胞活化后的条件培养基可以使SH-SY5Y细胞形态发生改变,其细胞活力降低(P0.05)。ATP引起的上述变化可以通过Na HS预处理而逆转(P0.05),其作用与P2X7R阻断剂KN-62相类似。结论:H_2S可下调被ATP诱导的p-P38和pJNK MAPK蛋白表达,减少TNF-α和IL-6等炎性因子的释放,从而对神经元产生保护作用。     

烟雾病易感因素研究进展

烟雾病是一种进行性脑血管病,具有种族易感性、家族聚集性特征。烟雾血管表现出内膜增厚,中膜变薄,内弹力板迂曲,伴有淋巴细胞浸润等特征性病理表现,其病因及发病机制尚未完全阐明,目前认为该病与内皮细胞、平滑肌细胞、细胞外基质的异常代谢和炎性反应相关。作者从遗传因素、机体内环境因素、免疫因素3个层面,阐述内皮细胞易感基因环指蛋白213、平滑肌细胞易感基因、细胞外基质代谢相关基因、血管生成相关因子以及免疫易感基因在烟雾病的发生、发展中所起的作用。