脂质体介导人β-神经生长因子基因转染培养肌母细胞的表达研究

目的　了解含 β-神经生长因子 (β- NGF)基因的表达质粒 PSVCEP NGF- CAT在培养肌母细胞中的表达及 L ipofect AMINE阳离子脂质体介导的转染效率。方法　将表达质粒 PSVCEP NGF- CAT经 L ipofectAMINE转染至培养成的肌母细胞中 ,用免疫细胞化学方法检测基因在肌母细胞内的表达。结果　培养肌母细胞在转染 6小时吞噬脂质体最显著 ,转染 48小时后约 40 %的肌母细胞胞质内有β- NGF基因表达。结论　含β- NGF基因的表达质粒 PSVCEP NGF- CAT可以在培养肌母细胞中表达 ,脂质体转染的方法简便、有效     

黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体外膜单克隆抗体免疫...

BALB/c mice were immunized intraperitoneally with outer envelopes of serogroup icterohaemorrhagiae lai serovar strain 017 leptospires. Monoclonal antibodies against outer envelopes (IgG, agglutinating titre 1:25,600) were produced by hybridoma technique. The monoclonal antibodies ascites (diluted 1:100) 1 ml administered intraperitoneally 1 hour before the intraperitoneal injection of 2 x 10(8) leptospires of strain 017 and the subsequent daily administration of McAb in similar doses for five days protected 80% of guinea pigs. Survival rates of three control groups which received physiological saline, ascites of BALB/c mouse myeloma cell lines SP2/0, and monoclonal antibodies against Pseudomonas aeruginosa in place of monoclonal antibodies against outer envelopes of strain 017 leptospires were 10%, 20% and 10% respectively. When killed 20 days after challenge, guinea pigs of experiment group were normal at autopsy. Old pulmonary haemorrhage were present in the animals of three control groups. Passive immunoprotection experiments have demonstrated immunoprotection of monoclonal antibodies against outer envelopes of strain 017 leptospires. It will be valuable for separating protective antigen fraction of outer envelopes and studying new vaccine of leptospira.     

恒河猴骨髓间充质干细胞分离培养及其生长特性

采用密度梯度离心和贴壁筛选方法分离纯化了恒河猴骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells from bone marrow of Rhesus monkey,RhBMSCs);通过表面抗原检测和核型分析对细胞进行了初步鉴定;通过生长曲线的绘制和细胞凋亡的检测探讨了细胞的生长特点。本实验获得的RhBMSCs形态以梭型为主,核型正常,CD29表达率为99.2%,CD34、CD45、HLA-DR表达率均低于3.2%,RhBMSCs表型符合间充质干细胞的特点,且纯度较高,细胞生长旺盛,但倍增时间有随传代数的增加而逐渐延长的趋势。本实验探讨了RhBMSCs的体外分离、扩增培养及鉴定的方法,并对其生长特点进行了初步观察,这不仅有助于进一步了解与之近似的人的骨髓间充质干细胞的相关特性,而且为以猕猴为对象的BMSC定向分化和组织修复等动物体内实验打下了基础。     

细胞和组织中两种线粒体标记方法的比较

  目的  比较探针和抗线粒体蛋白抗体标记细胞及组织中线粒体的效果,为相关研究选取适合的标记方法提供参考。  方法  在经体积分数4%多聚甲醛固定的HepG2细胞中,分别使用100 nmol/L MitoTracker Deep Red探针和抗葡萄糖调节蛋白75（Grp75）抗体标记线粒体;在经体积分数4%多聚甲醛固定的HeLa细胞中,分别使用75 nmol/L、100 nmol/L MitoTracker Deep Red探针和抗Grp75抗体标记线粒体;取人肝组织冰冻切片,经4%多聚甲醛固定后,分别使用150 nmol/L MitoTracker Deep Red和抗Grp75抗体标记线粒体。共聚焦显微镜下观察。  结果  MitoTracker Deep Red探针标记细胞线粒体的效果不如抗Grp75抗体标记清晰,且在HeLa细胞中有非特异性染色,抗体标记可更清楚地反映线粒体的点状和管状分布;在组织中MitoTracker Deep Red探针标记的单个细胞更均匀,标记线粒体的特异性更高,效果优于抗体染色。  结论  在细胞中使用抗Grp75抗体标记线粒体效果更好,能直观反映线粒体的分裂融合状态;在组织中使用MitoTracker Deep Red染色效果更佳。     

口腔癌相关成纤维细胞对舌癌细胞株侵袭特性的影响

目的 采用重建基底膜细胞侵袭实验,研究直接分离自舌癌组织旁的癌相关成纤维细胞（CAFs）对舌癌细胞株侵袭特性的影响,探讨CAFs在口腔鳞癌发展中的作用。方法 以Matrigel模拟重建基底膜,采用Transwell小室建立口腔CAFs与舌癌细胞株Tca8113的交互作用模型,观测CAFs对Tca8113侵袭特性的影响。结果 与正常成纤维细胞（NFs）相比,CAFs能促使更多的Tca8113细胞穿透Matrigel（P<0.05）。结论 口腔CAFs能促进舌癌细胞株Tca8113
的侵袭,在口腔鳞癌发展中起重要作用。     

TRAIL/死亡受体5途径在缺氧再给氧诱导人肝细胞凋亡中的作用及相关机制

目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)/死亡受体5(Death receptor 5,DR5)途径在人肝细胞缺氧/再给氧(Hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用,并探讨其作用机制。方法:在体外建立肝细胞H/R模型,模拟肝脏的缺血再灌注。H/R处理后,培养基中加入不同浓度外源性TRAIL蛋白,噻唑盐比色法(MTT)和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。半定量RT-PCR检测DR5mRNA的表达。结果:以正常人肝细胞为对照,H/R使人肝细胞的DR5 mRNA的表达上调,再给氧2小时达峰值,此后直至再给氧20小时维持在相对高的水平。单纯缺氧6小时不能引起肝细胞的大量凋亡。TRAIL诱导H/R处理后的肝细胞发生凋亡,并呈浓度依赖性。H/R大大增强TRAIL的肝毒性。结论:H/R使DR5在人肝细胞的表达上调,增加TRAIL的肝毒性。TRAIL/DR5途径可能在IRI诱导人肝细胞凋亡过程中发挥重要作用。     

雌激素对血清饥饿诱导成骨细胞凋亡基因表达的影响

目的探讨雌激素对血清饥饿诱导的体外培养大鼠成骨细胞凋亡基因bcl-2、bax、fas表达的影响，为明确雌激素抑制由血清饥饿诱导的大鼠成骨细胞凋亡的机理提供依据。方法新生SD大鼠颅骨第2、3代成骨细胞随机分为对照组、血清饥饿组、血清饥饿＋雌激素组3组，每组细胞分别培养1d、2d、3d、5d、7d、14d后做免疫组化染色，计数各组Bcl-2、Bax、Fas阳性细胞率。结果对照组成骨细胞有少量Bcl-2、Bax、Fas表达；与对照组比较，血清饥饿组细胞Bax和Fas表达升高（P〈0．05），高峰期为14d，Bcl-2的表达无明显变化（P〉0．05）；与血清饥饿组比较，血清饥饿＋雌激素组细胞Bax和Fas表达降低（P〈0．05），高峰期仍为14d，Bcl-2的表达升高（P〈0．05）。结论血清饥饿使成骨细胞Bax和Fas表达增强，而对Bcl-2的表达无明显影响；雌激素能抑制血清饥饿增强成骨细胞Bax和Fas表达的作用，并使Bcl-2的表达增加，从而抑制血清饥饿诱导的大鼠成骨细胞凋亡。     

成骨分化的骨髓间充质干细胞的免疫原性

目的:骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSC)具有多向分化潜能,又因其低免疫原性,成为细胞移植治疗的良好选择。本实验室前期实验表明猪MSC具有低免疫原性和免疫调节作用,而猪MSC在人体内微环境中,将自动分化。本试验研究猪MSC在体外诱导分化后是否还能维持其低免疫原性,仍具有免疫调节作用。方法:MSC细胞从近交系版纳微型猪骨髓中分离获得,转入SV40基因,进行永生化。再用β-甘油磷酸钠、地塞米松、抗坏血酸磷酸盐等体外诱导其分化为成骨细胞,以未分化MSC为对照,用RT-PCR法检测分化MSC的主要组织相容性抗原(swine lymphocyte antigen classⅠ、classⅡ,SLAⅠ、SLAⅡ)的表达情况,用单向混合淋巴细胞反应(MLR)的方法检测分化MSC是否仍不能引起人外周血淋巴细胞(human peripheral blood lymphocyte,hPBL)的增殖反应。结果:RT-PCR结果显示未分化MSC只有SLAⅠ表达;分化MSC既有SLAⅠ,也有SLAⅡ的表达,但很低。这一结果支持MSC的低免疫原性特性。混培结果也显示分化猪MSC与未分化猪MSC一样都不引...     

用限制性核酸内切酶分析钩端螺旋体DNA的研究

作者选用钩体赖型56601株、017株、秋季型56606株、曼耗2型67020株、1987年分离株87112、87369株,用内切酶EcoR Ⅰ、Bgl Ⅱ、Hha Ⅰ和Hind Ⅲ消化分析其DNA,结果表明:钩体017株的四种内切酶图谱明显不同,在EcoR Ⅰ酶切图谱上,赖型、秋季型、曼耗2型钩体DNA的主要差别在高分子区带,赖型强毒力株017较同型弱毒力株56601在10.5kb处染色较深;三型钩体的Hind Ⅲ酶切图谱仅有细小差异;分离株87112和87369的EcoR I 酶切图谱与赖型56601和017基本一致。在HindⅢ酶切图谱上,分离株87112与赖型56601株、017株相似。提示:限制性核酸内切酶分析可以作为钩体分型和鉴定的手段。