杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5'上游序列的克隆与序列分析

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5'上游序列,并对其进行测序和序列分析.方法:提取杜氏盐藻基因组DNA,经过BamH I、EcoR I、Hind Ⅲ、Pst I、Sal Ⅰ及Xbal Ⅰ限制性内切酶分别酶切后,再与相应接头连接,分别构建盐藻步行基因组文库BL、EL、HL、PL、SL和XL.采用巢式(LA)-PCR方法,从上述步行基因组文库中扩增杜氏盐藻NR基因5'上游序列,克隆至pMD18-T,对酶切鉴定正确的克隆进行测序.结果:从HL里扩出约1 200 bp特异性片断,回收此片段并进行T载体克隆,对阳性克隆测序.该序列的3'端与已知NR基因cDNA 5'端序列完全一致.该序列含有多个与转录调控有关的保守序列(如CAAT-box和GAGA-box),含有与EBP、EFII、NF-E1、LV 等转录因子以及广谱激活剂Oct-1结合位点相似的核苷酸序列.结论:采用LA-PCR基因组步行方法,从已知cDNA 周围未知启动子或其他调控区域中克隆得到的NR基因的5'上游区序列,可能是一种新的杜氏盐藻启动子区序列.     

肝癌组织中转化生长因子beta1表达与Treg浸润的关系及临床意义

目的 探讨肝癌组织中转化生长因子beta1表达与Treg浸润的关系及临床意义.方法 采用免疫组织化学染色的方法检测213例肝癌组织、癌旁肝组织中TGF-β和Foxp3表达.结果 肝癌组织中TGF-β低表达组92例,高表达组121例,高表达阳性率为56.81％;癌旁组织中TGF-β低表达组44例,高表达组169例,高表达阳性率为79.34％,癌组织和癌旁高表达率差异有统计学意义(P=0.0000).肝癌组织中Foxp3细胞平均密度为2.76个/HP,癌旁极少见或未见.肝癌组织中TGF-β与Foxp3表达呈正相关(r=0.221,P=0.027).肝癌组织中TGF-β和Foxp3表达在患者血浆AFP浓度高水平组高于低水平组(P=0.017 6, 0.028 1).结论 TGF-β在肝癌瘤旁组织较之肝癌组织表达更为明显,而Treg侵润则与之不相符,在肝癌组织中TGF-β的表达,与肿瘤局部组织中的Treg侵润具有一定的正相关性,与临床特征相关联可见患者血清AFP水平与TGF-β及Foxp3表达具有一定的相关性.     

杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变株的筛选与鉴定

目的:制备杜氏盐藻氯酸盐抗性突变株库并从中筛选出硝酸盐还原酶(NR)缺陷型突变株,测定其NRcDNA全长序列,分析其突变位点.方法:①用乙基亚硝基脲(ENU)对杜氏盐藻进行诱变,得到突变株库.然后用氯酸盐抗性筛选方法获得氯酸盐抗性藻株,经复筛和不同氮源生长试验,获得了氯酸盐抗性突变株库.再用96孔板法进行单藻培养,获得氯酸盐抗性突变株单藻群.用磺胺比色法测定各个单藻群的NR活性,挑选出NR活性完全丧失的突变株.然后用氯酸盐抗性实验和不同氮源生长实验验证其NR突变的稳定性.②根据已知的盐藻NR全长序列,设计3对PCR引物,提取突变株盐藻细胞mRNA,反转录成cDNA,分3段扩增其NR cDNA的全长序列,产物与T载体连接后转化至大肠杆菌JM109中,经筛选后测序,测序结果与野生型盐藻NR eDNA序列比较,分析其突变位点.结果:序列分析表明,3株突变株共有11处相同的突变,其中的3处点突变引起了氨基酸性质的改变.它们均在近3'端有一段相同的移码突变,造成19个氨基酸的完全改变.此外,2株还分别由于在1 235和1 639的位点突变而产生了一个终止密码子.结论:筛选出了3株杜氏盐藻NR完全缺陷型突变株.     

多西他赛联合顺铂方案新辅助治疗局部晚期食管鳞癌的临床研究

目的分析比较多西他赛联合顺铂方案(TP)与氟尿嘧啶联合顺铂方案(PF)新辅助治疗局部晚期食管鳞癌的有效性及安全性。方法收集自2010年6月至2013年3月在我院肿瘤内科和胸心外科住院新辅助化疗的局部晚期食管鳞癌患者94例,其中TP方案组42例(DTX 75 mg/m2,静滴d1,DDP 20 mg/m2,静滴d1^d3)和PF组52例(5-FU 1000 mg/m2,静滴d1d3)和PF组52例(5-FU 1000 mg/m2,静滴d1^d5;DDP 20 mg/m2,静滴d1d5;DDP 20 mg/m2,静滴d1^d3,q4周)组。化疗3周期后评价疗效及毒副反应。结果全部入组病例均可评价近期疗效和毒副反应。TP组患者的近期有效率明显高于PF组(P<0.05);然而疾病控制率相似,无统计学意义(P=0.344);两组化疗方案的3d3,q4周)组。化疗3周期后评价疗效及毒副反应。结果全部入组病例均可评价近期疗效和毒副反应。TP组患者的近期有效率明显高于PF组(P<0.05);然而疾病控制率相似,无统计学意义(P=0.344);两组化疗方案的3⁴级毒副反应方面比较,毒副作用均可耐受,恶心呕吐、过敏、乏力、腹泻的34级毒副反应方面比较,毒副作用均可耐受,恶心呕吐、过敏、乏力、腹泻的3⁴级不良反应发生率两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。骨髓抑制、神经毒性及肌痛差异具有显著性(P<0.05)。结论在局部晚期食管鳞癌新辅助化疗中,TF方案与PF方案比较,具有更好的近期有效率,但有更高的毒副反应,经过及时处理后PF方案可具有较好的耐受性。     

重组人血管内皮抑素联合同步放化疗治疗老年晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的 观察重组人血管内皮抑制素联合同步放化疗治疗老年晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的近期临床疗效、不良反应及耐受性。方法将39例经病理组织学或细胞学检查确诊的ⅢB～Ⅳ期NSCLC老年患者随机分成两组,实验纽（19例）采用恩度联合同步放化疗治疗,对照组（20例）采用单纯同步放化疗治疗。采用调强放疗技术对肿瘤区域以及累及淋巴结区域进行放疗,总剂量DT60～76Gy／30～38次,共6～8周。化疗方案：多西他赛60mg／m^2第1天,顺铂30mg／m^2第1～3天,21d为1个周期,共3～4个周期。重组人血管内皮抑素15mg／d,第1～14天连续给药,与化疗同步进行。按照WHO标准评价近期疗效,参考KPS评分以及患者临床症状缓解情况评价患者的生活质量（QoL）;按照WHO抗癌药物不良反应分度标准评价不良反应。结果试验组和对照组的客观有效率（RR）分别为84．2％和50．0％（P〈0．05）,临床受益率（CBR）分别为94．7％和70．0％（P〈0．05）;QoL改善稳定率为94．7％（18／19）和90．0％（18／20）（P〉0．05）;在血液学及非血液学不良反应主要有中性粒细胞减少、血小板减少、恶心、呕吐、乏力、心律失常、过敏,Ⅲ级以上不良反应发生率试验组和对照组差异无统计学意义;两组放射性食管炎和放射性肺炎的发生率分别为15．8％和10．0％（P〉0．05）。结论重组人血管内皮抑素联合同步放化疗治疗老年晚期非小细胞肺癌,近期疗效有所提高,不良反应轻,易于接受。     

肿瘤相关抗原p62应用于肿瘤免疫诊断的Meta分析

目的分析肿瘤相关抗原p62在免疫诊断中的作用和价值。方法采用Cochrane系统评价方法,通过计算机检索中国学术期刊全文数据库、万方数据库、维普咨询网、中国生物医学文献数据库和PubMed、Springer、Elsevier、EBSCO外文数据库,并辅以手工检索,检索时间截止至2010年6月。获取p62用于肿瘤血清学免疫诊断的病例-对照研究共18篇文献,采用Cochrane协作网Review Manager 4.2.8软件进行Meta分析。结果以p62能否应用于肿瘤的免疫诊断为题,共纳入17项研究,包括6种不同的肿瘤类型,含1554例肿瘤患者病例和1461例正常人对照,目的均是检测p62自身抗体在肿瘤患者和正常对照中出现的例数。统计得出总的效应统计量比值比(odds ratio,OR)及其95%CI为10.74(7.25～15.90),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Meta分析结果表明肿瘤患者血清中抗p62自身抗体的检测在免疫诊断中具有实际应用价值。     

重组人血管内皮抑制素联合吉西他滨和替吉奥方案治疗晚期肾癌的临床观察

目的观察重组人血管内皮抑素注射液（恩度）联合吉西他滨（Gemcitabine）和替吉奥（S-1）方案治疗晚期肾癌的的近期疗效和安全性。方法将63例经病理组织学或细胞学检查确诊晚期肾癌患者随机分成2组,试验组（30例）：采用恩度联合吉西他滨和替吉奥方案治疗;对照组（33例）：采用单纯吉西他滨联合替吉奥化疗。4个周期后按照WHO标准评价近期疗效,参考KPS评分以及患者临床症状缓解情况评价患者的生活质量（QoL）;按照WHO抗癌药物毒性反应分度标准评价毒性反应。结果试验组和对照组的客观有效率（RR）分别为70．O％和45．5％（P〈0．05）,临床受益率（CBR）分别为96．7％和75．8％（P〈0．05）;QoL改善稳定率为96．7％（29／30）和84．9％（28／33）（P〉0．05）;在血液学及非血液学毒性主要有中性粒细胞减少、血小板减少、恶心、呕吐、乏力、心律失常、过敏,Ⅲ级以上毒性反应发生率试验组和对照组分别为73．3％和57．6％（P〉0．05）;两组治疗后生活质量差异不显著（P〉0．05）。结论恩度联合吉西他滨和替吉奥方案治疗晚期肾癌,近期疗效有所提高,不良反应没有增加,安全性较好。     

实时荧光定量PCR法检测食管癌组织中细胞周期蛋白CyclinD1和CyclinA基因的表达

目的检测食管癌组织中细胞周期蛋白CyclinD1和CyclinAmRNA的表达水平，探讨相关基因表达与食管癌发生、发展的相关性。方法应用SYBRGreen染料法进行相对实时荧光定量PCR检测CyclinD1和CyclinA在48例食管癌组织及其癌旁正常食管组织中的表达情况。结果CyclinD1和CyclinA在食管癌组织中的表达水平均明显高于正常食管黏膜组织，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论人食管癌组织中CyclinD1和CyclinA的高表达可能与食管癌的发生发展密切相关，有望作为食管癌发生发展的评估指标。     

阿瑞匹坦预防含铂类化疗方案治疗肺癌所致恶心呕吐的临床观察

目的 探讨阿瑞匹坦在预防肺癌含铂化疗方案所致的化疗相关性恶心、呕吐的疗效和安全性。方法 收集2014年1月至2014年12月应用一线含铂化疗方案治疗的肺癌患者44例,采用自身对照比较使用阿瑞匹坦与否在化疗过程中止吐效果的差异,同时观察阿瑞匹坦在多周期化疗中的止吐疗效。结果 44例患者中,格拉司琼联合地塞米松组（A组）急性呕吐的发生率为50.0％,延迟性呕吐的发生率为81.8％;阿瑞匹坦、格拉司琼联合地塞米松组（B组）急性呕吐的发生率为25.0％,延迟性呕吐的发生率为47.7％;与A组相比,B组对急性呕吐的治疗有效率（RR）为909％,对延迟性呕吐的RR为77.8％。多周期化疗中阿瑞匹坦维持止吐效果较好,且无疗效衰减现象。阿瑞匹坦引起的不良反应主要有厌食、疲乏、便秘、腹泻,A组厌食的发生率为93.2%,高于B组的63.6%（P=0.001）;两组其他不良反应发生率的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 阿瑞匹坦可有效降低含铂化疗方案的急性和延迟性恶心呕吐的发生率,不良反应可耐受。     

怀旧治疗对老年慢阻肺合并抑郁患者的护理效果

目的 探讨怀旧治疗对老年慢阻肺(COPD)合并抑郁患者的护理效果.方法 本研究对象为我院2019年2月～2020年2月70例COPD合并抑郁症患者,随机分为对照组与观察组,对照组接受呼吸内科治疗以及常规心理干预,观察组在对照组基础上进行怀旧治疗.比较干预前后汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)以及圣乔治呼吸问卷(SGRQ)、1s用力呼气量(FEV1)、6min步行距离(6MWT).结果 两组干预后HAMD评分以及HAMA评分较干预前均明显下降,且干预后观察组均显著低于对照组(P＜0.05);两组干预后SAQ评分、FEV1、6MWT较干预前均明显增加,且干预后观察组均显著高于对照组(P＜0.05).结论 怀旧治疗能有效降低老年慢阻肺合并抑郁症患者焦虑、抑郁情绪,并有助于肺部功能、生活质量、步行能力的提升.