新生牛皮胶原蛋白海绵的制备及其体外细胞相容性

背景：现已证实,人肌腱、牛肌腱、鼠尾、猪皮、新生牛跟腱制备的胶原蛋白海绵有良好的细胞相容性。目的：采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其与羔羊肾成纤维细胞的相容性。设计、时间及地点：对比观察实验,于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。材料：出生24h内宰杀的新生尕里巴牛犊皮,岷县黑裘皮羔羊肾原代成纤维细胞。方法：取新生牛犊皮,经脱毛、胃蛋白酶＋冰醋酸联合处理、盐析、透析、冻干后制备胶原蛋白海绵。将海绵与羔羊肾F3代成纤维细胞混悬液共培养,分别设胶原海绵材料组、阴性对照组（生理盐水）、阳性对照组（橡胶塞浸提液）。主要观察指标：应用倒置相差显微镜及JVC数码摄像系统观察、拍摄与记录细胞形态、生长情况。培养20,35d,对共培养物进行AO染色,观察细胞在胶原海绵中的增殖情况。培养65d后制石蜡切片,行苏木精-伊红染色,观察细胞在胶原海绵中的生长情况。结果：阳性对照组细胞培养24h细胞圆缩,不贴壁,3d后全部死亡。胶原海绵材料组与阴性对照组细胞形态均正常,细胞贴壁生长良好。随着培养时间的延长,海绵孔隙逐渐变小,细胞数量增加,形态变小,海绵外观从柔软、混浊变得挺拔、透明。AO染色显示培养20,35d的胶原海绵-羔羊肾成纤维细胞共培养物中有大量细胞存在,并且在胶原蛋白空隙中有大量细胞成团簇状生长。苏木精-伊红染色显示有大量蓝色细胞核和新生的红色胶原纤维。结论：制备的新生牛皮胶原蛋白海绵对岷县黑裘皮羔羊肾成纤维细胞有良好的相容性。     

新生牛跟腱胶原蛋白海绵与细胞的生物相容性

目的:采用新生牛跟腱制备生物医用胶原蛋白海绵,通过分别接种Vero细胞、天祝白牦牛胚胎皮肤原代细胞和岷县黑紫羔羊睾丸原代细胞至胶原蛋白海绵组织支架上,观察新生牛跟腱胶原蛋白海绵与3种细胞的生物相容性。方法:实验于2006-02/05在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。①用新生牛跟腱经冰醋酸、胃蛋白酶等消化,经盐析、透析及冻干等处理后,制备成胶原蛋白海绵。②在六孔板中,将Vero细胞、天祝白牦牛胚胎皮肤原代细胞和岷县黑紫羔羊睾丸原代细胞分别接种于经紫外线、臭氧灭菌后的胶原蛋白海绵上,经37℃体积分数为0.05的CO2恒温培养;并用另一组细胞在凯氏瓶中培养作对照实验。用奥林帕斯倒置相差显微镜及JVC摄像系统观察、拍摄与记录细胞生长情况,并于培养11d,用考马斯亮蓝和苏木精-伊红染色,证实相差显微镜观察的结果。结果:①胶原蛋白海绵制备结果:用新生牛跟腱制备得到具有一定孔隙度的胶原蛋白海绵,经紫外线、臭氧灭菌后可进行细胞培养。②3种细胞在胶原蛋白海绵上和六孔板底的生长情况:3种细胞接种后5h,在胶原蛋白海绵周围的六孔板孔底可看到Vero细胞已贴壁、伸展,个别细胞有分裂现象,在胶原蛋白海绵表面,隐约可见圆形细胞排列。Vero细胞和天祝白牦牛胚胎皮肤原代f2细胞接种72h、岷县黑裘皮羔羊睾丸原代f2细胞接种48h时,孔底细胞已经铺满单层,但与对照孔比较,生长速度较慢。②3种细胞用考马斯亮蓝细胞骨架染色和苏木精-伊红染色的结果:培养到第11天,3种来自不同动物、不同组织的细胞接种的胶原蛋白海绵支架孔中均有大量细胞良好生长,胶原海绵外观变得挺拔、透明、有韧性。结论:新生牛跟腱胶原蛋白海绵,对Vero细胞、天祝白牦牛胚胎皮肤原代细胞和岷县黑紫羔羊睾丸原代细胞无毒性,3种细胞均能在其上良好生长,但在体内是否会引起免疫排斥反应,还有待进一步研究。新生牛跟腱有望成为医用胶原蛋白海绵产品新的原材料。     

新生牛皮胶原蛋白海绵的制备及其体外细胞相容性

目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其生物学活性与细胞相容性。方法:实验于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。实验方法:①取出生24h内宰杀的新生尕里巴牛犊皮制备胶原蛋白海绵。②将新生牛皮胶原蛋白海绵与黑裘皮羔羊肾F3代成纤维细胞混悬液共培养,分别设胶原海绵材料组、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(橡胶塞浸提液)。实验评估:①应用倒置相差显微镜观察细胞形态。②培养20,35d对细胞与胶原蛋白海绵共培养物进行AO染色观察细胞在胶原海绵中的增殖情况。③培养65d后制石蜡切片,行苏木精-伊红染色观察细胞在胶原海绵中的生长情况。结果:①细胞形态观察结果:阳性对照组细胞培养24h细胞圆缩,不贴壁,3d后全部死亡。胶原海绵材料组与阴性对照组细胞形态均正常,细胞贴壁生长良好。随着培养时间的延长,海绵孔隙逐渐变小,细胞数量增加,形态变小,海绵外观从柔软、混浊变得挺拔、透明。②细胞在胶原海绵中的增殖情况:吖啶橙-AO染色显示培养20,35d胶原海绵-羔羊肾成纤维细胞共培养物中有大量细胞存在,并且在胶原蛋白空隙中有大量细胞成团簇状生长。③细胞在胶原海绵中的生长情况:苏木精-伊红染色显示有大量蓝色细胞核和新生的红色胶原纤维。结论:制备的新生牛皮胶原蛋白海绵对岷县黑裘皮羔羊肾成纤维细胞有良好的生物相容性,无细胞毒性。     

散发性急性病毒性肝炎的病原学和流行病学分析

本文对北京、廊坊、沈阳、武汉等地4所医院321例散发性急性病毒性肝炎血清学分型表明,157例(48.91%)为甲型;7例(2.18%)为甲、乙型混合感染;71例(22.12%)为乙型;20例(6.23%)为丙型,33例(10.28%)为戊型,33例(10.28%)未能分型。甲型平均发病年龄(20.68岁),小于乙型,丙型和戊型(分别为31.79岁、35.67岁和35.67岁)。各型肝炎均为男性多于女性,尤其是甲、乙和戊型肝炎。84.61%甲型肝炎病例发生于秋冬季节,即9月至次年1月,但乙型、丙型和戊型肝炎无明显季节性。丙型肝炎病人肠道外暴发极为常见,而其他型肝炎有接触肝炎病人史者较为多见。本文还对各型肝炎的临床特点进行了探讨。     

绒癌小肠转移误诊1例

子宫绒毛膜癌易发生多处组织转移，最常见的是肺、脑、肝、消化道，而临床以高位小肠转移为首发症状者确为少见，且易误诊。病历摘要患者，女，24岁，已婚，因黑便半月，加重sd，伴头昏、耳鸣，收住内科。既往无溃疡病史，无呕血黑便史．月经史正常，末次月经1996年12月IO日，1996年2月曾有葡萄胎史。查体：T37．6C，P105／mln．R24／ruin，BP12．5／7kPa，神清．急性贫血貌，皮肤粘膜苍白，弹性稍差，钱表淋巴结未触及，双侧乳房未触及包块，双侧乳头乳晕着色稍深，心肺无异常，腹部平坦、软，无压痛及跳痛，肝脾夫触及，腹部未触及包…     

新生牛跟腱胶原蛋白海绵与动物肾、睾丸、皮肤细胞的生物相容性

背景：随着新生牛血清的产业化，新生牛跟腱资源大量积累，使得利用其制备医用胶原蛋白海绵并产业化成为可能。 目的：采用新生牛跟腱制备胶原蛋白海绵，观察其与Vero 细胞、天祝白牦牛胚胎皮肤细胞和岷县黑紫羔羊睾丸细胞的生物相容性。 设计、时间、地点：重复测量观察，于2006- 02/05 在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。 材料：用出生24 h内的新生牛跟腱经冰醋酸、胃蛋白酶等消化, 经盐析、透析及冻干等处理后，制成胶原蛋白海绵。天祝白牦牛胚胎皮肤f2代细胞和岷县黑紫羔羊睾丸f2代细胞为自制，Vero 细胞为协和医科大学细胞中心提供。 方法：在6孔板中, 将3种细胞分别接种于经紫外线、臭氧灭菌后的胶原蛋白海绵上，于37 ℃、 体积分数为0.05 的CO2 恒温箱培养，同时设对照实验。 主要观察指标：相差显微镜观察接种5，12，24，72 h时 3种细胞在胶原蛋白海绵上和6孔板底的生长情况，接种11 d对共培养物行考马斯亮蓝、苏木精-伊红染色。 结果：接种后5 h, 在胶原蛋白海绵周围的6孔板底部可看到细胞已贴壁、伸展, 个别细胞有分裂现象, 在胶原蛋白海绵表面, 隐约可见圆形细胞排列。接种后48~72 h 时, 6孔板底部细胞铺满单层。接种后11 d，考马斯亮蓝和苏木精-伊红染色显示3 种共培养物中均有大量细胞良好生长, 胶原海绵外观变得挺拔、透明、有韧性。 结论：新生牛跟腱胶原蛋白海绵与上述3种来自不同动物、不同组织的细胞有很好的生物相容性，可做皮肤细胞、肾细胞和睾丸细胞的培养支架。     

我国少数民族2型糖尿病相关基因检测研究

随着经济的发展、人民生活水平的提高和人口老龄化，世界各国尤其是发展中国家糖尿病（DM）患病率呈现出世界性的上升趋势，尤其以2型糖尿病发病为主，成为继心脑血管疾病、肿瘤之后的第三位严重危害大众健康的慢性非传染性疾病。我国是一个多民族的国家，近年来虽然有关少数民族糖尿病流行病学调查研究已经开展，对其临床分析、     

血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病原学研究

目的对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎进行病原学研究。方法用ＨＢＶＰＣＲ、ＨＣＶＲＴ－ＰＣＲ和ＨＥＶＲＴ－ＰＣＲ分别检测血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎患者血清，并对其部分阳性产物进行克隆测序。结果８７例非甲～戊型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ均为阴性，９例（１０．３％）为ＨＣＶＲＮＡ阳性，部分经测序证实为ＨＣＶ１ｂ亚型；余７８例为ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性。该７８例中，１４例因无血清未作ＨＥＶＲＮＡ检测，余６４例中４９例（７６．６％）为ＨＥＶＲＮＡ阴性，１５例（２３．４％）为ＨＥＶＲＮＡ阳性。经序列分析显示，其中９例为典型的中国ＨＥＶ株基因序列，６例变异较大，与典型的中国株基因序列的同源性仅为８０％左右。４９例ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ和ＨＥＶＲＮＡ均阴性的血清中１６例（３２．６％）ＨＧＶＲＮＡ阳性。由此可见，该８７例中至少有９例为ＨＣＶ感染，１５例为ＨＥＶ感染，１６例为ＨＧＶ感染。结论对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病人应该用ＰＣＲ法进行病原学分型，以明确其诊断     

MDCK悬浮细胞制备及流感病毒敏感性研究

目的 建立无血清悬浮培养MDCK细胞的方法,分析其传代、线性放大过程中的稳定性及增殖流感病毒的敏感性。方法 运用逐步降血清悬浮驯化法将贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞;进一步分析其生长动力学特性、连续传代稳定性,在5L生物反应器中扩大培养;接种流感和禽流感病毒,测定不同时间HA效价、CCID₅₀滴度,分析其病毒敏感性。结果 成功将ATCC引进的贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞(命名为MDCK-XF02细胞)并冻存;不同接种密度培养MDCK-XF02细胞最大增殖密度均达13.0×10⁶ cells/mL以上,且差异无统计学意义(P>0.05);连续传代培养过程中细胞形态和生长状况稳定,比生长速率差异无统计学意义(P>0.05);三个代次的MDCK-XF02细胞以2.0×10⁶ cells/mL接种于5 L生物反应器,细胞生长状态良好,倍增时间小于21 h,在批培养中细胞浓度高达(14.57±0.47)×10⁶ cells/mL,比生长速率分别为(0.027±0.012)h^-1、(0.028±0.013)h^-1、(0.027±0.013)h^-1(P>0.05);接种甲型流感病毒H1N1和H3N2,HA效价达到(6~7)log₂HA/25 μL、CCID₅₀为(4.35~4.68)lgCCID₅₀/mL;接种乙型流感病毒B/P和BX-35增殖效果更好,HA效价达到(9~10)log₂HA/25 μL,CCID₅₀为(6.38~7.31)lgCCID₅₀/mL。接种重组禽流感病毒H5亚型Re-5、Re-6、Re-10均能很好的增殖,HA效价达到(7~9)log₂HA/25 μL、CCID₅₀为(6.21~6.96)lgCCID₅₀/mL。结论 本研究获得一株具有自主知识产权的流感/禽流感病毒敏感的无血清悬浮培养型MDCK-XF02细胞株,实现了生物反应器高密度放大培养,为我国开展流感疫苗研究和生产提供细胞基质,也为其他动物细胞悬浮驯化提供参考。     

新生牛皮胶原蛋白海绵的制备及其体外细胞相容性☆◆

背景：现已证实，人肌腱、牛肌腱、鼠尾、猪皮、新生牛跟腱制备的胶原蛋白海绵有良好的细胞相容性。 目的：采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵，观察其与羔羊肾成纤维细胞的相容性。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。 材料：出生24 h内宰杀的新生尕里巴牛犊皮，岷县黑裘皮羔羊肾原代成纤维细胞。 方法：取新生牛犊皮，经脱毛、胃蛋白酶+冰醋酸联合处理、盐析、透析、冻干后制备胶原蛋白海绵。将海绵与羔羊肾F3代成纤维细胞混悬液共培养，分别设胶原海绵材料组、阴性对照组（生理盐水）、阳性对照组（橡胶塞浸提液）。 主要观察指标：应用倒置相差显微镜及JVC数码摄像系统观察、拍摄与记录细胞形态、生长情况。培养20，35 d，对共培养物进行AO染色，观察细胞在胶原海绵中的增殖情况。培养65 d后制石蜡切片，行苏木精-伊红染色，观察细胞在胶原海绵中的生长情况。 结果：阳性对照组细胞培养24 h细胞圆缩，不贴壁，3 d后全部死亡。胶原海绵材料组与阴性对照组细胞形态均正常，细胞贴壁生长良好。随着培养时间的延长，海绵孔隙逐渐变小，细胞数量增加，形态变小，海绵外观从柔软、混浊变得挺拔、透明。AO染色显示培养20，35 d的胶原海绵-羔羊肾成纤维细胞共培养物中有大量细胞存在，并且在胶原蛋白空隙中有大量细胞成团簇状生长。苏木精-伊红染色显示有大量蓝色细胞核和新生的红色胶原纤维。 结论：制备的新生牛皮胶原蛋白海绵对岷县黑裘皮羔羊肾成纤维细胞有良好的相容性。